多重PCR檢測豬偽狂犬、細(xì)小病毒和豬圓環(huán)病毒2型方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、1．以豬偽狂犬病毒（PRV）的基因組序列作為參考，設(shè)計了應(yīng)用在同一個PCR反應(yīng)體系的3對特異性擴(kuò)增引物，建立了鑒別診斷PRV疫苗株和流行毒株的多重PCR方法（Multiplex PCR，Multi-PCR）。在相同的PCR擴(kuò)增條件下，以PRVDNA作為模版，同時加入3對特異性引物，可同時擴(kuò)增不同長度的PRVgB，gE和Tk基因序片段，其大小分別為427bp（gB），298bp（gE）和208bp（Tk）。利用建立的Multi-PCR方法

2、，對商品化的四種不同基因缺失的PRV疫苗進(jìn)行檢測，其擴(kuò)增結(jié)果與疫苗的基因缺失背景一致。試驗(yàn)結(jié)果表明，Multi-PCR可同時區(qū)分PRV流行毒株和疫苗毒株，且具有良好的敏感性和特異性。該方法可應(yīng)用在PRV臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究工作中。 2．根據(jù)GenBank上豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）、豬細(xì)小病毒（PPV）的已發(fā)表序列分別設(shè)計并合成4對特異性擴(kuò)增引物建立PRV，PCV2，PPV單項PCR檢測方法。分別

3、擴(kuò)增出預(yù)期的657bp（PPV），490bp（PCV2），372bp（PRV-gB）和298bp（PRV-gE）片段，在優(yōu)化單項PCR反應(yīng)條件基礎(chǔ)上建立了PRV-PCV2-PPV復(fù)合PCR檢測方法，為預(yù)防和控制上述3種病毒性傳染病提供了一種快速、敏感、特異的檢測方法。 3．為促進(jìn)PCR反應(yīng)中豬偽狂犬病毒gB基因的擴(kuò)增效率，研制了含有二甲基亞砜（DMSO）成份的針對gB基因的PCR緩沖液。結(jié)果表明：在DMSO作用下，增強(qiáng)了gB基因