豬細小病毒和偽狂犬病毒二聯(lián)（價）疫苗的研究.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學博士學位論文豬細小病毒和偽狂犬病毒二聯(lián)（價）疫苗的研究姓名：呂建強申請學位級別：博士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導教師：陳煥春;熊遠著20031101豬細小瘸毒拳} 偽狂犬病毒二聯(lián)( 價) 疫苗} | 勺研究后利用V P 2 基因兩端的B a m HI 位點，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體p U S K - V P 2 ，同時提取親本株P(guān) R V E aT K ’／g G - ／L a c Z + 的基因組D N A ，將它們共轉(zhuǎn)染P K

2、—1 5 細胞，通過同源重組獲得了重組偽狂犬病毒T K V g G - ／V P 2 + 株。對該重組病毒進行生物學特性的鑒定，發(fā)現(xiàn)豬細小病毒V P 2 基因已重組到P R V 基因組中，而且遺傳穩(wěn)定性良好，表達的豬細小病毒V P ：蛋自主要分布于細胞核內(nèi)，其依然可以形成瘸毒樣顆粒，與完整豬細小病毒粒子一樣呈品格狀排列。進而利用該重組病毒制備了豬細小病霉一偽狂犬病毒基因工程二價疫苗，動物試驗表明，其對小鼠和豬的安全性良好，而且免疫豬可以

3、同時產(chǎn)生針對P P V 和P R V 的體液免疫反應，產(chǎn)生的抗體水平略低于各自單苗的，但是可以滿足臨床應用的要求。該疫苗不僅能達到一針防兩病的目的，而且可以作為預防這兩種疾病的標記疫苗。此外，本研究對豬細小病毒形態(tài)發(fā)生、結(jié)構(gòu)與功能的研究、新型疫苗的研制等均具有重大意義。3 ．豬細小病毒N S 】基因在桿狀病毒中的表達利用P C R 方法擴增豬細小病毒N S I 基因，將其克隆到p M D l 8 ，T 載體中，測定序列后與G e n B

4、 a n k 中登錄的P P V N S ?；蜻M行比較，證實?；蛟谪i細小病毒中高度保守。然后構(gòu)建桿狀病毒重組轉(zhuǎn)移載體p F a s t - N S I ，轉(zhuǎn)化D H , o B a c 大腸桿菌得到重組穿梭載體B a c m i d —N S I ，轉(zhuǎn)染S f 9 昆蟲細胞后獲得了重組桿狀病毒A c N P V ．N S l 。該重組桿狀病毒成功地表達了豬細小病毒N S I 蛋白，并且只能與感染豬細小病毒的豬的抗血清發(fā)生特異性免疫反