農(nóng)桿菌介導(dǎo)的秈稻遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的秈稻遺傳轉(zhuǎn)化研究姓名：肖向文申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：何光華20050501西南農(nóng)業(yè)丈學(xué)碩士學(xué)位論文進～步研究。(2)培養(yǎng)基種類和成分對秈稻愈傷誘導(dǎo)、繼代和分化再生影響很大，但不同基因顰對培養(yǎng)基類型的反應(yīng)存在較顯著的差異，即每種基闋型應(yīng)該有自己獨特的臺適培養(yǎng)基，總體來說，MS、NB培養(yǎng)基都是秈稻較為適合的培養(yǎng)基類型，在這兩種培養(yǎng)基上，供試品種均有比較高的誘導(dǎo)率，愈傷質(zhì)量也較

2、好。(3)不同激素配對秈稻分化率有影響，對ySH527、JHl0、JH35這3個品種來說，在分化培養(yǎng)基中添加3mg／LBA、o5mg／LNAA是較為適宜的激素配比，在此條件下，可以獲得較高分化率。(4)水分脅迫處理，包括適當(dāng)提高蔗糖濃度、添加滲透劑山梨醇或甘露醇、提高瓊脂濃度、部分干燥處理等，都會極大地提高秈稻的分化率。在我們的實驗中，經(jīng)過部分干燥處理的JH35愈傷的再生頻率達到594％，而對照只有43，5％。(5)不同基因型之間再生能

3、力存在顯著差異，供試5個晶種中，JHl01和R21分化率較低，分別為5％和83％；527、JHl0和JH35分化能力較強，分別為333％、30％和35％，基本上可咀滿足以后遺傳轉(zhuǎn)化的需要。2，以JH35和JHl0為材料、農(nóng)桿菌EHAl05／piGl21Hm為載體研究了影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)秈稻遺傳轉(zhuǎn)化的因素，初步建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)JHl0和JH35的遺傳轉(zhuǎn)化體系，確定了轉(zhuǎn)化程序中的幾個關(guān)鍵條件，獲得了一定的轉(zhuǎn)化率，并得到了共51個推測的轉(zhuǎn)基園植株

4、(GUS陌性植株)，轉(zhuǎn)基因植株的外源基因表達、遺傳特點等后續(xù)研究還在進行之中。(1)篩選標記基因及篩選劑的選擇對轉(zhuǎn)化有一定影響，潮霉素是水稻遺傳轉(zhuǎn)化中比較理想的篩選劑，可明顯區(qū)分轉(zhuǎn)化子與非轉(zhuǎn)化子，有較高的篩選效率，不同的基因型之間對潮霉素的敏感程度存在顯著的差異。確定合適的篩選濃度，是成功轉(zhuǎn)化的前提條件之一。本實驗條件F，寸H10和JH35臺適的Hm篩選濃度分別為30mg／L和50mg／L。(2)農(nóng)桿菌菌株平口質(zhì)粒對轉(zhuǎn)化效率有影響，EH

5、Al05是比較適合于水稻遺傳轉(zhuǎn)化的菌株xj具有較強的侵染力但在轉(zhuǎn)化中。應(yīng)注意脫菌抑菌，才能取得好的轉(zhuǎn)化效果。農(nóng)桿菌抑制劑頭孢霉索對抗性愈傷的再生有一定的抑制作用，在五期分化過程中，可以停止使用頭孢霉素。(3)在共培養(yǎng)基中添加一定濃度的As是獲得高效轉(zhuǎn)化的必備因素，不添加As則轉(zhuǎn)化率很低，甚至得不到轉(zhuǎn)化子，對本試驗條件而言，添加|00Itmol／LAs可獲得較高的轉(zhuǎn)化率。(4)共培養(yǎng)條件是獲得成功轉(zhuǎn)化的重要因素，適宜的農(nóng)桿菌菌液濃度、共培