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1、UniversityCode:10225RegisterCode:080063DissertationfortheDegreeofMasterStudyonAgrobacteriumMediatedPotatoTransformationof/P—loGeneCandidate:Supervisor:AcademicDegreeAppliedfor:Speeiality:DateofOraIExam1lnatl‘onUniversity
2、:WanPengVice—ProfLiKuihuaMasterDevelopmentBiologyJune,2008NortheastForestryUniversityAbstractAbstractPotatominituberwasusedaSexplantinthisstudyAefficientregenerationsystemofcultivarDongnon9303wasoptimizedbytestingdiffere
3、nthormonecombinationsAtthesametimeIPIOgeneWasintroducedintopotatogenomewithAgrobacteriummediatedmethodPeRRTPCRandGFPfluorescencedetectionWasdonetoprovethattargetgenehadbeenconformedintopotatogenomeInaddition,thebestcondi
4、tionsoftransgenepotatomicrotuberformationWasdiscussed1VirusfreepotatoplantletsWasusedtodegenerationtestingbydifferentIAA,NAA,GA3,IBA,6BAandZTcombinationsTheresultsshowedthattheoptimalmediumforcallusinductionfromstemwasMS
5、IBA01mg/L6BAO5mg/Landitsinductivitywas86%,butgerminationrateWaslow;乃ebestdifferentiationmediumforleavesWaSMSZT1000mg/LNAAO1mg/LGA302mg/LandtheshootinductionrateWas150%Ontheotherhand,theoptimaldifferentiationmediumfortube
6、rdiscWasMSIAA10mg/LZT35mg/Landthedifferentiationratereachedl20%2TransgenicplantswhichwereobtainedbyAgrobacteriuminfectionandhygromycinselectionwereperformedtoPCRamplificationof/P一10andhygromyeinphosphortransferasegenesre
7、spectivelyCorrespondingbandsof276bpand602bpwereobtainedThreetransgeniclineswereidentifiedbyfurtherRTPCRreactionandproteinGFPfluorescencelaserscanningconfocaldetection3,nIeeffectofph”ohormoneandsucrosecontenttotransgenicl
8、inesoftuberformedtesttubetuberWaSdiscussedResultshowedthatthemostformationWasobtainedwhenKTconcentrationWas100mg/L,B9concentrationWasl50mg/LandsucroseWas8%,andM聊lanfletwere14,15and16,respectivelyWeconfirmedKT’B9andsucros
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