農(nóng)桿菌介導(dǎo)花生遺傳轉(zhuǎn)化條件的研究.pdf

1、花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料作物和經(jīng)濟作物，但由于花生遺傳基礎(chǔ)狹窄、抗逆性差，易感多種病蟲害，尤其是褐斑病、黑斑病、網(wǎng)斑病等真菌性病害，嚴重影響其產(chǎn)量和質(zhì)量。本研究以廣譜抗真菌性的β-1，3-葡聚糖酶基因為目的基因進行了花生遺傳轉(zhuǎn)化。首先以花生幼葉為外植體進行培養(yǎng)，建立了花生幼葉高頻再生體系；然后以此體系為培養(yǎng)基礎(chǔ)對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花生遺傳轉(zhuǎn)化影響因素進行了研究，并將β-1，3-葡聚糖酶基因轉(zhuǎn)入花生，獲得了轉(zhuǎn)基

2、因植株，結(jié)果如下： 1.用花生品種花育22和花育23作材料，將種子萌發(fā)5-7 d的幼葉切塊培養(yǎng)在添加NAA和BAP的MSB<,5>培養(yǎng)基上誘導(dǎo)不定芽的形成，結(jié)果表明MSB5+1 mg/L NAA+6.0mg/L BAP培養(yǎng)基最有利于不定芽的誘導(dǎo)，花育22和花育23不定芽誘導(dǎo)率分別達到94％和90％。將形成不定芽的愈傷組織轉(zhuǎn)移到添加BAP的MSB<,5>培養(yǎng)基上促使芽伸長進一步長成小苗，結(jié)果表明MSBs+4.0 mg/L BAP的

3、培養(yǎng)基最為有效，花育22和花育23植株誘導(dǎo)率分別達到89.6％和91.8％。將再生小植株從基部切下轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基上，使其生根長成完整植株。在MSB<,5>+0.5 mg/L NAA培養(yǎng)基上生根效果較好。 2.利用花育22和花育23幼葉為受體材料，對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花生遺傳轉(zhuǎn)化條件進行了研究。農(nóng)桿菌選用LBA4404和EHA105，質(zhì)粒為表達載體pATC940含有β-1，3-葡聚糖酶基因和Km抗性基因。確立的轉(zhuǎn)化條件為：Km篩選壓為5