農(nóng)桿菌介導的菘藍遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、菘藍（Isatis indigotica Fortune）為十字花科菘藍屬二年生草本植物，是我國傳統(tǒng)的中藥材。本研究探討了菘藍遺傳轉(zhuǎn)化過程中幾個因素對對轉(zhuǎn)化效率的影響，并將P35-Iap、Ace-Tlp基因轉(zhuǎn)入菘藍，對轉(zhuǎn)Bar、Cry1C基因的后代進行了PCR、RT-PCR、Basta噴灑、Bar試紙條鑒定、Southern雜交。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.對農(nóng)桿菌介導菘藍的遺傳轉(zhuǎn)化過程中不同的浸染時間、共培養(yǎng)時間、乙

2、酰丁香酮(AS)濃度進行探討。研究結(jié)果表明，浸染10min，共培培養(yǎng)基中添加200μmol/LAS共培60h Basta抗性率最高。
　　2.將抗病基因P35-Iap、Ace-Tlp轉(zhuǎn)入菘藍獲得了T0植株，移栽成活46株，PCR檢測有28株為陽性，陽性率達到60.87％，為抗病檢測提供了材料基礎(chǔ)。
　　3.對轉(zhuǎn)Bar基因菘藍的T1代植株進行Bar試紙條檢測，并與PCR結(jié)果進行對比，吻合度可以達到72％。
　　4.經(jīng)RT

3、-PCR檢測，轉(zhuǎn)抗病基因T0代菘藍有7株有Bar基因表達，9個轉(zhuǎn)cry1C基因菘藍的T1代均有Bar基因表達，其中有6個有Cry1C基因的表達。
　　5.對未轉(zhuǎn)基因的菘藍進行Basta噴灑，確定400mg/L Basta可以區(qū)分轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因植株。使用該濃度噴灑轉(zhuǎn)基因菘藍，從60株轉(zhuǎn)Bar基因T1菘藍中篩選得到28株抗性植株，經(jīng)PCR檢測均為陽性。
　　6.使用ELISA試劑盒檢測Cry1C蛋白的含量，最高可達204.77