發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、棉花是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物,但由于我國可耕地面積和水資源十分有限以及病蟲害嚴(yán)重導(dǎo)致棉花生產(chǎn)安全壓力很大。隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,利用基因工程的手段將外源有益基因轉(zhuǎn)入棉花的研究也越來越熱。目前,轉(zhuǎn)基因常用的方法是以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)棉花遺傳轉(zhuǎn)化,但該方法受到棉花基因型的限制、轉(zhuǎn)化效率低和轉(zhuǎn)化周期長等不利因素的影響從而制約了棉花轉(zhuǎn)基因的發(fā)展和運(yùn)用。
　　 本論文創(chuàng)新性地采用發(fā)根農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化棉花,通過毛狀根的誘導(dǎo)和培養(yǎng),獲得了再生植株,并

2、獲得轉(zhuǎn)有三個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的棉花毛狀根。
　　 (1)利用子葉穿孔的方法,建立了無菌條件下獲得棉花毛狀根的體系。獲得的棉花毛狀根在無激素的培養(yǎng)基上表現(xiàn)出自發(fā)性生長和部分失去向地性等典型的毛狀根性狀。
　　 (2)利用三種不同的發(fā)根農(nóng)桿菌A4、K599和ATCC15834分別侵染誘導(dǎo)三種陸地棉品種石遠(yuǎn)321、YZ-1和柯字312,討論了菌種和品種對(duì)棉花毛狀根誘導(dǎo)的影響。經(jīng)ro／AB基因的PCR檢測篩選陽性棉花毛狀根,發(fā)

3、現(xiàn)由野生型A4發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)柯字312棉花品種轉(zhuǎn)化的毛狀根得率最高。
　　 (3)討論了棉花毛狀根誘導(dǎo)的最佳外植體部位和苗齡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明10-15天苗齡的棉花子葉最適合誘導(dǎo)毛狀根。
　　 (4)討論了誘導(dǎo)棉花毛狀根的固體培養(yǎng)基在碳源、無機(jī)鹽和有機(jī)成分上的最優(yōu)組合。研究表明,以葡萄糖30g／L為碳源的MS培養(yǎng)基最優(yōu)。
　　 (5)初步建立了棉花毛狀根再生植株的培養(yǎng)體系,獲得了3株再生植株。
　　 (6)將