農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：密級(jí)：$6651單位代碼：!鯉8魚(yú)學(xué)號(hào)：2__Q9922農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化研究AgrobacteriummediatedtransformationofChinesejujube學(xué)位申請(qǐng)人：郝征指導(dǎo)教師：劉孟軍教授趙錦教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：果樹(shù)學(xué)學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)博士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一二年五月三十一日摘要棗樹(shù)(ZiziphusjujubaMill)是我國(guó)原產(chǎn)重要果樹(shù)。棗樹(shù)由于花小、人工去雄難、坐果率低且胚敗育現(xiàn)象嚴(yán)

2、重，使得其雜交育種非常困難。棗瘋病是由植原體引起致死性傳染病害，幾乎分布于國(guó)內(nèi)外所有棗區(qū)，絕大多數(shù)棗樹(shù)品種都對(duì)其敏感，已成為制約棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重障礙。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，基因工程已成為現(xiàn)代植物改良育種的有效手段。本研究旨在探索建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棗樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化體系，并利用發(fā)根農(nóng)桿菌提高棗樹(shù)對(duì)棗瘋病的抗性，為棗樹(shù)遺傳改良和棗瘋病防治提供技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下：1建立了冬棗的花藥再生體系。誘導(dǎo)花藥愈傷的適宜培養(yǎng)基為1／2MSI0mg／L2

3、，4一D209／L麥芽糖559／L瓊脂；花藥愈傷的適宜增殖培養(yǎng)基為MS04mg／LTDZO1mg／LNAA209／L麥芽糖559／L瓊脂；1Omg／LTDZ和04mg／LNAA的組合是誘導(dǎo)冬棗花藥愈傷出芽的適宜生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合，誘導(dǎo)出芽率達(dá)100％，平均出芽數(shù)為39個(gè)／塊；02mg／LBA、O1mg／LIBA和159／LPVA是玻璃苗恢復(fù)的適宜組合，玻璃苗恢復(fù)率為489％；在添加15m∥LIAA的生根培養(yǎng)基中，生根率最高(433％)，根長(zhǎng)

4、最長(zhǎng)(42cm)。2首次建立了月光棗的花藥再生體系。誘導(dǎo)花藥愈傷的適宜培養(yǎng)基為1／2MS10mg／L24一D209／L麥芽糖559／L瓊脂；月光花藥愈傷的適宜增殖培養(yǎng)基為MS06mg／LTDZ01mg／LNAA209／L麥芽糖559／L瓊脂。適宜月光愈傷分化出芽的培養(yǎng)基為：MS559／L瓊fJ旨209／L麥芽糖08mg／LTDZ4Omg／LAgN03。其誘導(dǎo)出芽率為100％，平均出芽數(shù)為104個(gè)／塊；在培養(yǎng)基MS559／L瓊脂30∥L蔗

5、糖O2mg／LBA01mg／LIBAI59／LPVA中玻璃苗可恢復(fù)成『F常苗；添加2Omg／LIBA的生根培養(yǎng)基中月光生根率最高；GA3的添加對(duì)于棗愈傷的生長(zhǎng)和玻璃苗的恢復(fù)均為抑制作用。3建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的冬棗葉片遺傳轉(zhuǎn)化體系。適宜的遺傳轉(zhuǎn)化條件為：根癌農(nóng)桿菌的OD600為O8，侵染20min后，在共培養(yǎng)基MS5，59／L瓊fJ旨209／L麥芽糖1Omg／LTDZ01mg／LIBA2009MAS(pH58)中暗培養(yǎng)3d。首次將雙抗蟲(chóng)

6、基因(Bt基因和蛋白抑制劑基因彳阿)轉(zhuǎn)入冬棗中，得到了8個(gè)轉(zhuǎn)基因株系。4建立了冬棗葉片及冬棗瘋組培苗的發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。冬棗葉片誘導(dǎo)毛根的適宜條件是在菌液濃度OD600為08時(shí)侵染葉，午20min，在共培養(yǎng)基1／2MS40mg／LIBA55∥L瓊J指309／L蔗糖(pH58)中暗培養(yǎng)3—5d，然后轉(zhuǎn)接入培養(yǎng)基1／2MSOCR0100m∥L中，光照條件為光照／黑暗為14／10h。冬棗瘋組培苗莖段誘導(dǎo)出毛根的適宜條件為：在菌液中