農(nóng)桿菌介導(dǎo)的苦瓜遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、苦瓜(MomordicacharantiaL.)屬葫蘆科苦瓜屬，為一年生蔓性草本植物?？喙瞎麑?shí)中含有多種人體必須的氨基酸和微量元素，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)，苦瓜中含有的苦瓜苷等多種生物活性成分，具有降低血糖、抗菌、抗腫瘤以及提高人體免疫力的功效，因此，苦瓜做為一種蔬菜作物和藥用植物有著重要的研究?jī)r(jià)值。本研究以南嶼苦瓜等為試材，進(jìn)行了離體再生體系的研究，并對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，成功獲得了苦瓜轉(zhuǎn)基因植株。主要結(jié)果如下：

2、 1苦瓜離體再生體系的建立1)貯藏期長(zhǎng)的苦瓜種子易帶菌，種子在1/2MS培養(yǎng)基上萌發(fā)率高。 2)苦瓜子葉節(jié)可直接誘導(dǎo)出叢生芽，胚軸、真葉和愈傷組織誘導(dǎo)分化十分困難。 3)建立以苦瓜子葉節(jié)為外植體的叢生芽直接誘導(dǎo)體系，在本研究中最適合的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1，其叢生芽誘導(dǎo)率可達(dá)93.8％。 4)苦瓜子葉呈淺綠色時(shí)最適合子葉節(jié)叢生芽的誘導(dǎo)。 5)不同的基因型誘導(dǎo)率

3、有一定的差異，一定濃度的6-BA和IAA的配比有利于叢生芽的誘導(dǎo)，高濃度的6-BA不利于叢生芽的伸長(zhǎng)。 6)苦瓜再生植株生根容易，在1/2MS+IAA0.2mg·L-1中可以獲得較高的生根率，誘導(dǎo)的根形態(tài)正常。NAA誘導(dǎo)的不定根較粗短，根毛少。 2根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化1)苦瓜對(duì)卡那霉素不敏感，當(dāng)濃度達(dá)到100mg·L-1時(shí)，子葉節(jié)叢生芽的誘導(dǎo)才會(huì)受到明顯的抑制，頭孢霉素和羧芐青霉素的濃度高達(dá)500mg·L-1

4、時(shí)植物的生長(zhǎng)才略受影響，濃度為500mg·L-1時(shí)可以抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)。 2)苦瓜子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化條件的最佳配比為：苦瓜子葉節(jié)必須預(yù)培養(yǎng)3d左右，用OD600為0.3～0.5之間的菌液濃度浸泡，浸泡時(shí)間為10min，然后共培養(yǎng)3～4d。 3發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的苦瓜誘導(dǎo)毛狀根1)菌株的類型對(duì)苦瓜子葉塊生根能力十分重要的，發(fā)根農(nóng)桿菌A對(duì)苦瓜的致根能力比發(fā)根農(nóng)桿菌M強(qiáng)。 2)外植體極性可能影響發(fā)根農(nóng)桿菌的發(fā)根能力，經(jīng)感染的苦