神經(jīng)病理性疼痛對大鼠脊髓DRG神經(jīng)元上BKca-α亞基表達(dá)的影響.pdf

1、一、研究背景
　　 神經(jīng)病理性疼痛是多種中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)病變,比如神經(jīng)外傷、慢性癲癇、帶狀皰疹、糖尿病、髓核脫出、炎癥和感染的常見并發(fā)癥。臨床上病人常有疼痛過敏、疼痛超敏、異常痛覺等不適情緒和感覺,其產(chǎn)生的病理基礎(chǔ)主要是神經(jīng)元廣泛去極化和細(xì)胞內(nèi)鈣超載。大電導(dǎo)的鈣激活鉀通道(Bkca)在脊髓背根神經(jīng)節(jié)各種直徑的神經(jīng)元上均有分布,通過激發(fā)對Ca2+內(nèi)流敏感的外向性K+電流調(diào)節(jié)細(xì)胞興奮性和神經(jīng)元放電。既往研究表明,Bkca介導(dǎo)的AH

2、P電流在結(jié)扎的L5脊神經(jīng)支配DRG上明顯削弱,而在臨近的L4支配DRG上明顯增強(qiáng)。在體外實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)Bkca激活可以抑制4-AP和去極化引起的神經(jīng)元過度興奮,證實(shí)了Bkca功能抑制在增強(qiáng)去極化頻率和幅度、調(diào)節(jié)峰電位間期及頻率適應(yīng)性、調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)合成釋放上的作用和地位。但是在外周神經(jīng)損傷后,Bkca通道的表達(dá)和分布是否發(fā)生可塑性改變,國內(nèi)尚鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)擬建立改良的慢性坐骨神經(jīng)縮窄損傷模型,觀察NPP狀態(tài)下Bkca-α亞基在脊髓DRG神

3、經(jīng)元上的改變。
　　 二、目的
　　 本研究觀察不同的坐骨神經(jīng)損傷模型對動物疼痛行為和氧化應(yīng)激水平的影響。并選擇改良后的iCCI模型,檢測Bkca-α亞基在脊髓損傷節(jié)段DRG神經(jīng)元上的分布和表達(dá)改變,探討其參與疼痛發(fā)生的可能機(jī)制和作用。
　　 三、方法
　　 實(shí)驗(yàn)分二部分:
　　 1.神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型的制作、評估和篩選
　　 雄性SD大鼠60只,隨機(jī)分為4組(Sham組,n=15)、

4、傳統(tǒng)坐骨神經(jīng)結(jié)扎組(傳統(tǒng)CCI組,n=15)、改良坐骨神經(jīng)結(jié)扎組(iCCI組,n=15),坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷組(SNI組,n=15)。Sham組僅暴露坐骨神經(jīng),CCI組、iCCI組和SNI組分別參照文獻(xiàn)報(bào)道方法于右后肢行手術(shù)操作,制作疼痛模型。比較術(shù)前及術(shù)后1,3,7,10,14,17,21d各組大鼠的機(jī)械/熱縮足閾值差異,并在術(shù)后7,14,21d處死各組大鼠各5只,檢測脊髓L4～L6節(jié)段損傷側(cè)SOD、MDA含量。
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5、.改良的iCCI模型脊髓DRG神經(jīng)元上Bkca-α亞基的mRNA及蛋白的表達(dá)檢測
　　 雄性SD大鼠105只,均分為7組:iCCI組(iCCI處理7d,14d,21d組,n=15),Sham組(假手術(shù)處理7d,14d,21d組,n=15),正常對照組(Control組,n=15)。按照文獻(xiàn)方法建立篩選疼痛模型后,分組在規(guī)定時間點(diǎn)處死大鼠,采用RT-PCR技術(shù)測定L4-6脊髓DRG上Bkca-α亞基mRNA水平;Western b

6、lotting和免疫組化測定L4-6節(jié)段DRG上Bkca-α的蛋白表達(dá)和陽性免疫產(chǎn)物分布情況。
　　 四、結(jié)果
　　 1.熱/機(jī)械痛閾檢測:Sham組的熱/機(jī)械痛閾在術(shù)前及術(shù)后各時間點(diǎn)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。CCI和iCCI組在術(shù)后第7天即出現(xiàn)明顯的熱/機(jī)械痛閾降低,并在術(shù)后第14天達(dá)到最低值(P＜0.01)。iCCI組比CCI痛閾下降更加顯著(P＜0.05)。SNI疼痛模型僅對機(jī)械刺激敏感而對熱刺激不敏感。

7、r>　　 2.氧化應(yīng)激改變:術(shù)后7,14,21d發(fā)現(xiàn)三種模型脊髓損傷側(cè)SOD水平明顯下調(diào),MDA表達(dá)顯著上調(diào),各指標(biāo)變化幅度iCCI＞CCI＞SNI＞Sham。iCCI大鼠因坐骨神經(jīng)結(jié)扎和異物刺激導(dǎo)致的氧化應(yīng)激強(qiáng)度改變在三種疼痛模型中最顯著(P＜0.05)。Sham組手術(shù)前后SOD/MDA水平改變沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.Bkca-α表達(dá)改變:正常和Sham組間Bkca-α表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是CCI組D

8、RG上Bkca-α mRNA和蛋白表達(dá)明顯下調(diào),并重分布(P＜0.05)。Bkca-α mRNA的表達(dá)水平變化和大鼠熱/機(jī)械痛敏增加的變化規(guī)律基本一致。
　　 五、結(jié)論
　　 1.三種NPP模型的疼痛規(guī)律和氧化應(yīng)激水平各不相同,iCCI大鼠的氧化應(yīng)激和異常痛敏增高比傳統(tǒng)CCI、SNI更明顯,提示iCCI模型是一種更加典型、穩(wěn)定的疼痛模型。
　　 2.外周神經(jīng)損傷導(dǎo)致大鼠脊髓DRG神經(jīng)元上Bkca-α表達(dá)下降,可能