初級痛覺神經元異常電活動在大鼠神經病理性疼痛中的機制研究.pdf

1、本文從以下幾部分闡述了初級痛覺神經元異常電活動在大鼠神經病理性疼痛中的機制研究。
　　第一部分:運用毛細管細胞電泳技術研究慢性神經病理性疼痛初級感覺神經元異常興奮機制
　　目的：
　　細胞電泳技術是一種廣泛應用的無創(chuàng)細胞分析技術。神經細胞主要依靠膜電位的極化狀態(tài)（表現(xiàn)為膜內的負電性）和膜電特性的改變執(zhí)行各種功能。研究神經細胞的電泳特性對于分析其功能具有獨特的優(yōu)勢。周圍神經損傷導致初級痛覺神經元異常放電而誘發(fā)神經病理性疼

2、痛，其發(fā)生機制和神經損傷部位的炎癥反應有關。這些炎癥反應將導致初級痛覺神經元上的離子通道蛋白、受體等過表達和聚集。研究發(fā)現(xiàn)，跨膜離子通道蛋白的漿膜外側特異地連接著大量以唾液酸殘基為主的糖鏈，這些唾液酸殘基帶有大量的負電荷。因此推測大量帶負電的膜外唾液酸糖鏈導致神經元膜電位的極化減低，最終導致了神經元的自發(fā)去極化而產生異位自發(fā)放電。本研究將建立慢性神經病理性疼痛大鼠模型，利用細胞電泳技術，分析疼痛模型大鼠的神經元膜電位的變化。
　　

3、方法：
　　建立神經細胞電泳技術裝置和大鼠的慢性坐骨神經壓迫(CCI)神經病理性疼痛模型，利用細胞電泳技術測量大鼠L4-5背根神經節(jié)神經元細胞電泳率(EMP)的變化，間接探索神經元膜上離子通道等蛋白糖基化的變化。
　　結果：
　　CCI組(n=96)的平均細胞電泳率為3.575±0.147μm.cm.V-1.s-1，顯著低于對照組(n=53)的5.123±0.220μm.cm.V-1.s-1(p＜0.0044)。其中，

4、小細胞(n=27)的細胞電泳率為3.318±0.286μm.cm.V-1.s-1，也顯著低于對照組(n=24)的5.415±0.467μm.cm.V-1.s-1(p=0.0003)。
　　結論：
　　損傷神經元向正極泳動的速率低于正常未損傷神經元，可能是由于神經元胞體離子通道蛋白的聚集導致神經元對毛細管內壁的吸附作用增強所致。我們的結果部分驗證了慢性神經病理性疼痛的機制假說，具體機制有待進一步研究。本研究完善了神經細胞電泳技

5、術方法，明確了其中部分技術難點;神經細胞電泳技術具有較大的發(fā)展?jié)摿Α?br>　　第二部分:A類神經元電刺激在周圍神經損傷導致病理性疼痛模型中的作用研究
　　目的：
　　究大都集中在神經損傷1天之后，而疼痛最早開始出現(xiàn)的確切時間尚不明確。最近本課題組通過改進脊神經結扎(SNL)模型發(fā)現(xiàn)神經損傷后10分鐘內即可出現(xiàn)疼痛，同時鄰近未損傷的C類神經元出現(xiàn)自發(fā)放電和興奮性升高。該現(xiàn)象無法用損傷局部的炎癥反應解釋。因此，結合蛇毒脫髓鞘模

6、型的研究結論，推測神經損傷阻斷了A類纖維傳入，導致A類纖維對C類纖維的抑制作用消失，從而快速引發(fā)了神經病理性疼痛。為驗證此推測，給予損傷神經一定的弱電刺激來模擬A類纖維的傳入，發(fā)現(xiàn)C類神經元的自發(fā)放電被抑制，支持上述推測。但是，用A類纖維強度電刺激是否可以逆轉神經損傷導致的疼痛行為，目前尚不明確。本研究將在改進的SNL大鼠模型中，利用自制的在體神經刺激電極給予損傷神經A類纖維強度電刺激，對比刺激后與不刺激的大鼠行為，從行為學水平驗證A類

7、纖維在急性神經病理性疼痛中的作用。
　　方法：
　　將成年雌性SD大鼠分為電刺激組和對照組，兩組均預先在L5脊神經上植入刺激電極，然后在大鼠清醒狀態(tài)下切斷L5脊神經。電刺激組在神經損傷即刻起規(guī)律給予A類纖維強度電刺激(10 Hz，0.5mA，3 min)，對照組除不給予電刺激外，其他操作與電刺激組保持一致。測定電刺激后機械、熱、冷刺激誘發(fā)痛和自發(fā)痛等行為發(fā)生和發(fā)展的精確時間變化情況。
　　結果：
　　電刺激組大鼠

8、從L5脊神經損傷即刻開始進行A類纖維強度電刺激，其自發(fā)痛行為在術后10 min開始在1天內都顯著低于未進行電刺激的SNL組大鼠。電刺激組大鼠的機械痛從術后1小時直到第7天都顯著低于未進行電刺激的SNL組大鼠。
　　結論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)給予損傷神經A類纖維強度的電刺激可以部分緩解神經損傷早期的神經病理性自發(fā)痛和機械痛。推測A類纖維傳入在正常情況下可能抑制了C類纖維的電活動。激活A類纖維傳入的治療手段具有緩解神經病理性疼痛的潛