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文檔簡介
1、第一部分 不同慢性神經痛模型中c-jun、NGF和鈉通道亞型的表達 目的:通過建立兩種不同疼痛模型,觀察大鼠背根神經節(jié)(DRG)即刻早期基因c-jun、NGF和電壓門控鈉通道亞型Nav1.8、Nav1.9和Nav1.3以及坐骨神經中NGF的表達,探討慢性神經痛的發(fā)生機制。 方法:雄性SD大鼠36只,隨機分成3組,制備坐骨神經壓迫性損傷(組1,CCI組,n=12)與部分坐骨神經損傷(組2,SNI組,n=12)兩種疼
2、痛模型,另一組為假手術組(組3,n=12),實驗動物采用組內同側與對側自體對照,于術前2天和術后1、3、5、7、9、11、13天測定機械痛閾和熱痛閾。分別于術后1、7和14天取大鼠雙側L4、L5和L6DRG及雙側坐骨神經,以免疫組織化學分析CCI大鼠相應DRGc-jun、NGF和坐骨神經NGF表達變化。以逆轉錄聚合酶連反應(RT-PCR)半定量分析CCI與SNI后14天大鼠相應背根神經節(jié)鈉通道Nav1.8、Nav1.9和Nav1.3轉錄
3、物的變化。 結論:CCI模型術后以熱痛覺過敏為主,而SNI模型術后出現明顯觸誘發(fā)痛;CCI模型術后DRG中c-jun表達是神經損傷的標志和始動因素,引起NGF表達發(fā)生改變,而后又影響到鈉通道表達,但在SNI模型中出現不同的表達,提示兩種疼痛模型存在不同的病理生理機制。 第二部分:鞘內注射Nav1.8反義寡核苷酸對慢性神經痛大鼠背根神經節(jié)鈉通道m(xù)RNA表達的影響 目的:探討鞘內注射(IT)Nav1.8反義寡核苷酸
4、(ASODN)對慢性坐骨神經擠壓損傷(CCI)大鼠背根神經節(jié)Nav1.8鈉通道表達的影響。 方法:雄性SD大鼠24只,隨機分為4組:組1(CCI+NS組,n=6);組2(CCI+錯義寡核苷酸MISODN45μg組,n=6);組3(CCI+ASODN45μg組,n=6);組4(CCI+ASODN90μg組,n=6)。按Bennett法制作CCI模型,以術前2日和術后1、3、5、7、9、11、13日為觀察時點,用vonFreyfil
5、aments測定機械觸誘發(fā)痛和熱痛刺激儀測定熱痛閾,術后5日鞘內置管,術后8日開始鞘內注藥,術后14d取雙側L4、L5和L6DRG測定鈉通道Nav1.8mRNA和c-jun的表達。 結論:鞘內注射Nav1.8ASODN對CCI模型大鼠出現的疼痛行為有明顯的逆轉作用,這種作用部分是通過下調背根神經節(jié)Nav1.8mRNA鈉通道表達而實現的,其中90μg劑量作用更完全,但Nav1.8ASODN鞘內注射沒有神經修復功能。 第三
6、部分 外源性神經生長因子對大鼠慢性神經痛和背根神經節(jié)鈉通道表達的影響 目的:建立坐骨神經慢性壓迫性損傷(CCI)模型,觀察外源性神經生長因子(NGF)對慢性神經痛和背根神經節(jié)(DRG)鈉通道表達的影響,探討慢性神經痛中NGF的作用機制。 方法:雄性SD大鼠48只,制備CCI模型,而后按給予的藥物與否和劑量不同,分為組1(CCI組)、組2(CCI+NS組)、組3、組4、組5(即刻給予NGF4μg/kg、8μg/kg
7、和16μg/kg)以及組6、組7和組8(CCI術后4天給予NGF4μg/kg、8μg/kg和16μg/kg),每組均有6只大鼠。實驗動物采用組內同側與對側自體對照,以術前2日和術后1、3、5、7、9、11、13日為觀察時點,用vonFreyfilaments測定機械觸誘發(fā)痛和熱痛刺激儀測定熱痛閾。以逆轉錄聚合酶連反應(RT-PCR)半定量分析CCI后14天大鼠相應背根神經節(jié)鈉通道Nav1.8和Nav1.3轉錄物mRNA的變化,同時觀察雙
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