簡介：CLASSIFIEDINDEXU．D．CDISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREETHESTUDYONENERGYMETABOLISMOFDAIRYGOATMAMMARYGLANDCANDIDATESUPERVISORACADEMICDEGREEAPPLIEDFORSPECIALITYDATEOFORALEXAMINATIONUNIVERSITYZHANGNAPROF．LIQINGZHANGDOCTOROFSCIENCEBIOCHEMISTORYANDMOLECULARBIOLOGYJUNE，2010NORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITYO●●●LIIIRO■RR’’口目錄目錄中文摘要???????????????????????????????????．I英文摘要??????????????????????????????????．．III1前言????????????????????????????????????L1．1乳腺能量代謝特點????????????????????????????11．1．1乳腺能量來源????????????????????????????．11．1．2乳腺組織葡萄糖的吸收????????????????????????．11．2乳腺發(fā)育研究進展????????????????????????????．31．2．1概J苤???????????????????????????????????????????31．2．2乳腺胚胎期發(fā)育???????????????????????????．41．2．3乳腺胚后細胞學發(fā)育?????????????????????????．51．3參與能量代謝調(diào)控的信號分子研究進展???????????????????91．3．1AKT???????????????????????????????????????????．91．3．2AMP依賴性蛋白激酶?????????????????????????131．4研究的目的和意義????????????????????????????162材料方法?????????????????????????????????．172．1奶山羊乳腺組織發(fā)育各時期能量代謝相關(guān)途徑關(guān)鍵酶活性檢測????????一172．1．1實驗動物與樣品采集?????????????????????????172．1．2主要試劑和儀器???????????????????????????172．1．3實驗方法??????????????????????????????172．1．4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析?????????????????????????182．2奶山羊乳腺組織發(fā)育各時期能荷及腺苷酸含量測定?????????????．．182．2．1實驗動物與樣品采集?????????????????????????L82．2．2主要試劑和儀器???????????????????????????182．2．3實驗方法??????????????????????????????L92．2．4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析?????????????????????????L92．3奶山羊乳腺組織發(fā)育各時期GLUTL表達定位????????????????192．3．1GLUTI的表達定位?????????????????????????一192．3．2WESTEMBLOTTING檢測GLUTL表達???????????????????．．202．3．3REALTIMEPCR檢測GLUTL表達????????????????????232．4奶山羊乳腺能量代謝調(diào)控????????????????????????．．252．4．1奶山羊乳腺組織發(fā)育不同時期AKT信號通路基因的表達?????????．252．4．2奶山羊乳腺組織發(fā)育不同時期AMPK信號通路基因的表達????????．．262．4．3AMPK激活后對奶山羊乳腺細胞代謝的影響???????????????273結(jié)果???????????????????????????????????????????????323．1奶山羊乳腺組織發(fā)育各時期能量代謝相關(guān)途徑關(guān)鍵酶的活性?????????．．323．1．1HK活性檢測????????????????????????????。32舢4㈣4川5Ⅲ7，㈣8Ⅲ7，捫¨¨I●L_ⅢY

簡介：鈣離子濃度對奶牛乳腺上皮細胞增殖及免疫的影響研究生儲怡然導(dǎo)師趙國琦教授揚州大學動物科學與技術(shù)學院，225009摘要本試驗采用組織塊法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞，采用多種方法純化細胞。并以細胞為試驗?zāi)Ｐ?，采用HPLC、MTT、FCM法檢測BMEC在不同CA2濃度處理后，單層細胞通透性與細胞凋亡的情況；并研究了不同CA2濃度與LPS刺激后細胞因子MRNA、MAPK和NFVB蛋白的表達。試驗一用組織塊培養(yǎng)法獲得大量奶牛的原代乳腺上皮細胞，聯(lián)合運用刮除法、相差消化和相差貼壁法、單克隆法可獲得純化的、活力旺盛的乳腺上皮細胞，經(jīng)形態(tài)學鑒定為上皮細胞。用不同CA2濃度的培養(yǎng)基孵育細胞，通過HPLC法檢測單層細胞通透性。結(jié)果表明降低胞外CA2濃度對緊密連接具有破壞作用。試驗二通過MTT法檢測不同CA2濃度對奶牛乳腺上皮細胞增殖的影響。結(jié)果表明各濃度處理組較對照組對細胞增殖均有抑制作用，濃度越低抑制作用越明顯；處理細胞48H較24H和72H對細胞增殖的影響更明顯。此外，采用FCM法檢測不同CA2濃度在48H時對細胞凋亡的影響。結(jié)果表明045MMOL／L濃度組對細胞凋亡和細胞存活率影響最顯著。說明降低胞外CA2濃度對細胞凋亡具有促進作用。試驗三不同CA2濃度與LPS組合刺激奶牛乳腺上皮細胞，采用相對實時熒光定量法檢測IL1B、IL6和IFN的MRNA表達。結(jié)果表明在不同CA2濃度與LPS刺激下，三種細胞因子的表達量有所提高，IL1P與IFN較對照組變化顯著，但IL6變化不明顯。此外，采用ELISA法在蛋白水平上檢測24H時MAPK和NFRD3蛋白的表達量。結(jié)果表明兩種蛋白的表達量均有升高的趨勢，但MAPK蛋白變化不明顯，NF1B蛋白表達量變化顯著。說明CA2能促進乳房炎細胞模型中細胞因子、MAPK和NFVB蛋白的表達。關(guān)鍵詞奶牛乳腺上皮細胞；胞外CA2；緊密連接；細胞凋亡；脂多糖；細胞因子；促分裂素源活化蛋白激酶；核轉(zhuǎn)錄因子目錄文獻綜述11奶牛乳房炎的研究進展及奶牛低血鈣癥對乳房炎的影響111奶牛乳房炎的研究進展112奶牛低血鈣癥與乳房炎113乳腺免疫214脂多糖免疫2141白細胞介素4142腫瘤壞死因子5143干擾素614_4促分裂素原活化蛋白激酶6145核轉(zhuǎn)錄因子615CAZ與細胞免疫72奶牛乳腺上皮細胞的增殖與凋亡721細胞的增殖與凋亡722CA2與細胞凋亡機制一8221線粒體凋亡通路8222死亡受體凋亡通路9223內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路93血乳屏障的研究進展及影響因素1031緊密連接在屏障功能中的作用。10311維持屏障功能11312維持細胞的極性1132鈣離子與緊密連接的調(diào)控機制1133細胞單層緊密性L134緊密連接的研究進展124本論文的研究意義及主要內(nèi)容13試驗一奶牛乳腺上皮細胞的體外培養(yǎng)與單層細胞連接測定141材料和方法14

簡介：CLASSIFIEDINDEXUDCDISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREESUBSTANCEMETABOLISM0FDAIRYGOATMAMMARYGLANDCANDIDATENANXUEMEISUPERVISORPROFLIQINGZHANGACADEMICDEGREEAPPLIEDFORDOCTOROFSCIENCESPECIALITYBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYDATEOFORALEXAMINATIONMAY2010UNIVERSITYNORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITY＼刪1787533目錄目錄中文摘要I英文摘要III1弓I言111乳腺發(fā)育的基本規(guī)律1111乳腺發(fā)育概述L112激素對乳腺發(fā)育的調(diào)節(jié)3113催乳素和孕酮引發(fā)的乳腺形態(tài)發(fā)生。412乳腺發(fā)育與泌乳功能基因組學研究。613奶山羊乳腺及山羊乳的研究。7131奶山羊乳腺發(fā)育的形態(tài)學研究7132山羊奶及山羊乳品質(zhì)的研究714乳腺物質(zhì)代謝的研究815研究的目的和意義一92材料與方法。L121實驗動物1L22試劑與設(shè)備LL23實驗方法1L231奶山羊乳腺糖代謝研究LL232奶山羊乳腺脂代謝研究18233奶山羊乳腺蛋白質(zhì)代謝研究233結(jié)果2731奶山羊乳腺糖代謝變化27311血清葡萄糖濃度27312奶山羊乳腺中乳糖合成相關(guān)基因MRNA檢測28313免疫組織化學方法檢測GLUT4在乳腺中的定位。35314WESTERNBLOTTING方法檢測乳腺中GLUT4蛋白質(zhì)的表達36315HPLC方法檢測乳腺及乳中的乳糖3732奶山羊乳腺脂代謝變化393。21血清甘油三酯和總膽同醇的測定39322TAQM鋤探針法檢測乳腺中脂類合成和分解的主要代謝酶42323奶山羊乳腺脂代謝基因網(wǎng)絡(luò)的研究42324氣相色譜法對脂肪酸甲酯的檢測6233奶山羊乳腺蛋白質(zhì)代謝變化65331編碼乳蛋白質(zhì)基因MRNA的檢測65332調(diào)節(jié)乳蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)基因MRNA的檢測67333HPLC檢測乳腺及乳中的酪蛋白704討論73

簡介：||ILLLIIIL1UL／RLL1LLLIIJILLIIJY2361594STUDIESONGENETICVARL訂IONOF俐GENEANDITSFEASIBILITYASMOLECULARM瞼RKEROFM瞼STITISRESISTANCEINCHINESEHOLSTEINCATTLEBYYANGYUESUPERVISORPROFSHIFANGXIONGPROFWANGCHANGFAATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORMASTERDEGREEOFAGRONOMYTHECOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYNANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYNANJING，210095，PRCHINACOMPLETEDINOCTOBER2011COMMENCEMENTINDECEMBER2011本研究由科技部863項目2006AAL021D9／2007AAL02169資助SUPPORTEDBY863HIGHTECHNOLOGYANDDEVELOPMENTPROJECTOFCHINANO2006AAL021D9／2007AAL02169

簡介：揚州大學博士學位論文奶牛乳腺炎的病原菌分離鑒定、毒力基因檢測與基因治療研究姓名尹召華申請學位級別博士專業(yè)獸醫(yī)指導(dǎo)教師孫懷昌20091201揚州大學博士學位論文素、CS31A粘附素SNFL7B基因；在123株致奶牛乳房炎大腸桿菌中，8株65％產(chǎn)生溶血素，2L株171％產(chǎn)生血清抗性因子。為了便于防治奶牛乳腺炎基因藥物的推廣應(yīng)用，在前期試驗基礎(chǔ)上，用無針頭注射器將表達人溶菌酶的重組質(zhì)粒在干乳期注射健康奶牛乳腺或泌乳期乳腺炎患牛乳腺，根據(jù)乳汁的CMT檢測結(jié)果判定防治效果。結(jié)果顯示每乳區(qū)兩次注射500微克重組質(zhì)粒，對乳腺炎的預(yù)防效果在90％以上，對泌乳期隱性乳腺炎的治療效果為818％，與乳腺基部穿刺法的防治效果相當，說明無針注射法能取代常規(guī)有針注射法用于奶牛乳腺炎的防治，具有無需保定、無交叉污染和效率高等優(yōu)點。為了進一步評價基因藥物治療奶牛乳腺炎的安全性，將15頭患隱性乳腺炎的奶牛隨機均分為3組，分別以400州乳區(qū)、600PG／乳區(qū)、800PG／乳區(qū)的劑量，通過乳房基部穿刺注射表達人溶菌酶基因的重組質(zhì)粒P215C3LYZ，24H后重復(fù)注射一次，觀察奶牛的精神、食欲、心率、呼吸、體溫等臨床指標。結(jié)果顯示基因治療奶牛的精神、食欲、心率、呼吸、體溫等臨床指標在注射前后無顯著差異。另選取3頭患隱性乳腺炎的奶牛，通過乳房基部穿刺注射重組質(zhì)粒P215C3LYZ，劑量為1600PG／頭，24H后重復(fù)注射一次，定期采集試驗組奶牛的乳樣、糞樣、尿樣以及試驗牛舍的墊料、水樣，用PCR檢測重組質(zhì)粒在試驗牛體內(nèi)外的轉(zhuǎn)移擴散。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除再次注射后24H可從奶樣中檢測到重組質(zhì)粒外，其他樣品均為陰性，表明重組質(zhì)粒不能在奶牛體內(nèi)長期殘留，也不能在環(huán)境中擴散。于第二次注射重組質(zhì)粒后20天，將試驗?zāi)膛錃?，采集血液、心、肝、脾、肺、腎、肌肉以及乳腺等樣品進行PCR檢測，結(jié)果表明重組質(zhì)粒在奶牛體內(nèi)未發(fā)生轉(zhuǎn)移。關(guān)鍵詞奶牛乳腺炎；分子流行病學基因治療Ⅱ

簡介：國家自然科學基金資助項目31232407NATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA31232407國家自然科學基金資助項目31372286NATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA31372286國家自然科學基金資助項目31472067NATIONALNATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINA31472067揚州大學博士學位論文TERMSGO注釋P1。選擇其中LO個差異顯著表達的MIRNABTAMIR223、BTAMIR。31、BTAMIR205、BTAMIR145、BTAMIR132、BTAMIR130B、BTAMIR200B、BTAMIR1246、BTAMIR196A、BTAMIR184進行QPCR驗證，驗證結(jié)果和測序結(jié)果一致。對這些差異MIRNA進行靶基因預(yù)測，共預(yù)測到19792個靶基因。GO分析表明這些靶基因參與調(diào)控細胞的結(jié)合、催化活性、免疫等過程，KEGG分析顯示其主要富集于環(huán)境微生物代謝信號通路、內(nèi)吞作用信號通路、嗅覺轉(zhuǎn)換信號通路、癌癥信號通路等。4將MIRNA測序和MRNA表達譜結(jié)果進行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示共得到233對負關(guān)聯(lián)的MIRNA／MRNA，其中MIRNA下調(diào)，MRNA上調(diào)的為162對；MIRNA上調(diào)，MRNA下調(diào)的為71對。上述選擇的10個差異顯著的MIRNA關(guān)聯(lián)到47個靶基因，通過QPCR技術(shù)對其中8個差異顯著基因ST3GAL3、ILL3RA2、ARID3A、ADAPL、SYNE2、SLC04A1、GRAMDLC、SLC5A1進行熒光定量檢測，結(jié)果顯示ST3GAL3、ILL3RA2、ARID3A、ADAPL、SLC04A1基因在金葡組表達顯著高于健康組，而SYNE2、GRAMDLC、SLC5A1基因在金葡組表達均低于健康組，基因表達情況與芯片的結(jié)果一致，上述結(jié)果表明這些差異基因可能是金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺炎發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵基因。關(guān)鍵字奶牛；乳腺炎；金黃色葡萄球菌表達譜芯片；MICRORNA測序；差異表達基因

簡介：CHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESMASTERDISSERTATIONCONSTRUCTIONOFTRANSGENICMAMMARYEPITHELIALCELLSFORXFAT1MS．CANDIDATEZHANGYANADVISORPROF．ZHUHUABINMAJOREMBRYOBIOTECHNOLOGYSPECIALTYANIMALBREEDINGANDREPRODUCTIONCHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESJUNE201L中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文評閱人、答辯委員會簽名表論文題目轉(zhuǎn)SLAT．1基因乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)研究動物遺傳配子與論文作者張燕專業(yè)研究方向育種與繁殖胚胎工程指導(dǎo)教師朱化彬培養(yǎng)單位研究所北京畜牧獸醫(yī)研究所姓名職稱碩博單位專業(yè)簽名評教授碩導(dǎo)口北京農(nóng)學院動物遺傳＼＼郭勇博導(dǎo)團育種與繁殖閱＼．人敖紅副研碩導(dǎo)團中國農(nóng)業(yè)科學院北京動物遺傳究員博導(dǎo)口畜牧獸醫(yī)研究所育種與繁殖答動物遺傳．％啦辯碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)大學主朱世恩教授博導(dǎo)團育種與繁殖席碩導(dǎo)口山東農(nóng)科院奶牛動物遺傳岬慵仲躋峰研究員博導(dǎo)團研究中心育種與繁殖碩導(dǎo)口中國農(nóng)業(yè)科學院北京動物遺傳熗‘曹文廣研究員博導(dǎo)團畜牧獸醫(yī)研究所育種與繁殖答副研碩導(dǎo)團中國農(nóng)業(yè)科學院北京動物遺傳彖之、，敖紅究員博導(dǎo)口畜牧獸醫(yī)研究所育種與繁殖辯副研碩導(dǎo)團中國農(nóng)業(yè)科學院北京動物遺傳五攤王棟究員博導(dǎo)口畜牧獸醫(yī)研究所育種與繁殖委碩導(dǎo)口博導(dǎo)口員碩導(dǎo)口博導(dǎo)口碩導(dǎo)口博導(dǎo)口會議記錄秘書杜衛(wèi)華論文答辯時間地點2011／6／18中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所會議室

簡介：苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細胞增殖及酪蛋白基因表達的影響研究生彭春燕導(dǎo)師趙國琦教授揚州大學動物科技學院，225009摘要本試驗以組織塊法分離培養(yǎng)，采用刮除法和相差消化法純化傳代獲取山羊乳腺上皮細胞，以2～3代的細胞為對象，研究大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔?？傇碥諏ζ湓鲋澈蚈T。1和D兩種酪蛋白基因表達的影響。L山羊乳腺上皮細胞的培養(yǎng)及鑒定運用組織塊法分離培養(yǎng)山羊乳腺上皮細胞，經(jīng)形態(tài)學和免疫組化鑒定為上皮細胞，采用刮除法和相差消化法純化細胞，并用025％胰蛋白酶和004％EDTA進行傳代，傳代初始細胞活力保持良好，形態(tài)均一。傳至20代，細胞活力下降。至25代，細胞開始凋亡。傳至30代細胞發(fā)生完全凋亡。本章試驗結(jié)果為山羊乳腺上皮細胞系的建立奠定了基礎(chǔ)。2苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細胞增殖的影響采用MTT法研究了不同濃度的大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔梗總皂苷對山羊乳腺上皮細胞增殖的影響。結(jié)果表明苷類納克級別濃度組較微克級別濃度組對細胞增殖的影響更明顯；處理細胞48H較24H和72H對細胞增殖的影響更明顯；10NG／ML大豆苷顯著促進山羊乳腺上皮細胞增殖；10NG／ML和100NG／ML染料木苷顯著促進山羊乳腺上皮細胞增殖；山羊MEC增殖與淫羊藿苷納克級別濃度有一定的劑量依賴性關(guān)系，而且所有濃度處理組1、5、10、100和1000NG／ML都能顯著促進細胞增殖；說明這三種苷能促進細胞增殖。低濃度1和5N2／ML桔梗總皂苷能抑制細胞的增殖。3苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細胞酪蛋白基因表達的影響應(yīng)用REALTIMEPCR測定不同濃度的四種苷處理細胞48H后對伍；L和B兩種酪蛋白基因相對表達量的影響。結(jié)果表明低濃度1NEDML、10NEDML的大豆苷有所提高ASL酪蛋白基因的表達，10NEDML的大豆苷有所提高P一酪蛋白基因的表達；FILLLIIIIIIIIILLIILLLIY2049412EFFECTSOFGLYCOSIDESONPROLIFERATIONANDCASEINGENEEXPRESSIONOFGOATMAMMARYGLANDEPITHELIALCELLSPOSTGRADUATEPENGCHUNYANADVISORPROFZHAOGUOQICOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYYANGZHOUUNIVERSITY225009ABSTRACTTISSUECULTUREWASUSEDINTHISSTUDYTOSEPARATEGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSTHENCURETTAGELAWANDDIFFERENCEDIGESTWEREUSEDTOPURIFYCELLSEFFECTSOFFOURGLYCOSIDESDAIDZIN，GENISTIN，ICARIINANDTOTALPLATYCOSIDESONPROLIFERATIONANDEXPRESSIONOFCASEIN0LSLANDPGENEOFTWOORTHREEGENERATIONSOFTHECELLSWERESTUDIED1CULTUREANDIDENTIFICATIONOFGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSGMECTHROUGHTISSUECULTUREMETHOD，THISTESTFOCUSEDONPRIMARYCELLCULTURE，USINGCURETTAGELAWDIFFERENCEDIGESTANDADHERENTLAWTOPURIFYCELLS，WITH005PERCENTOFTVYSINANDO04PERCENTOFEDTATODIGESTPASSAGETHECELLSWHICHCOULDBESHOWEDFIOMMORPHOLOGYOBSERVATIONANDIMMUNIZATIONSECTIONTESTWEREEPITHELIALCELLSTHEGROWTHOFCELLSINGOODCONDITIONCOULDBEGOTANDTHEMORPHOLOGYOFCELLSWASSAMETHEVIABILITYOF20THPASSAGECELLSDECREASEDCELLAPOPTOSISHAPPEDEDIN25PASSAGECELLS，AND30THPASSAGECELLSDIED2EFFECTSOFGLYCOSIDESONPROLIFERATIONOFGMECTHEEFFECTSOFDAIDZIN，GENISTIN，ICARIINANDTOTALPLATYCOSIDESONPROLIFERATIONOFGOATMAMMARYGLANDEPITHELIALCELLSWEREMEASUREDBYMTTTHERESULTSREVEALEDTHATTHENGLEVELOFCONCENTRATIONHADMOREEFFECTSONCELLSTHANTHEGGLEVELOFCONCENTRATIONANDWHENCELLSWERETREATEDWITHTHEFOURMATERIALSFOR48H，THEEFFECTSWEREGREATERTHANFOR24HAND72HTHEHIGHESTPOTENCYWASDETECTEDINDAIDZIN1ONG／MLANDGENISTIN1ONG／MLANDLOONMLCOMPAREDWITHTHECONTROLGROUPALLTHECONCENTRATIONGROUPS1，5，10，100AND200NG／MECOULDSIGNIFICANTLYIMPROVETHEPROLIFERATIONOFCELLS，ANDTHEREWAS

簡介：山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文奶山羊乳腺血流量檢測的研究姓名宋移福申請學位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學指導(dǎo)教師馬衛(wèi)明20110609奶山羊乳腺血流量檢測的研究2顯，血流量變化無規(guī)律可循，在這種情況下不易檢測到準確的乳腺血流量在增加飼喂次數(shù)的條件下檢測乳腺血流量會更為準確，縮短飼喂間隔時間有助于減小營養(yǎng)吸收對乳腺血流量的影響本研究結(jié)果可以為泌乳反芻動物乳腺血流量檢測標準的制定提供參考依據(jù)。關(guān)鍵詞乳腺血流量；TRANSITTIME超聲血流量計；陰部外動脈；陰部外靜脈

簡介：分類號S8239學校代碼10129UDC576學號08201031奶牛乳腺上皮細胞低溫保存與復(fù)蘇培養(yǎng)的初步研究CRYOPRESERVATIONCULTUREOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLS申請人楊苗學科門類農(nóng)學學科專業(yè)動物營養(yǎng)與飼料科學研究方向反芻動物營養(yǎng)指導(dǎo)教師侯先志教授考桂蘭教授論文提交日期二〇一一年五月CRYOPRESERVATIONCULTUREOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSABSTRACTINTHISEXPERIMENTMAMMARYEPITHELIALCELLSWERECULTUREDATTHELEVELOFTHETWODIMENSIONALBYTAKINGHOLSTEINCOWSBREASTTISSUEASTHEMATERIALONTHEBASEOFITTHEEFFECTOFDIFFERENTCRYOPROTECTANTSDIFFERENTCRYOPRESERVATIONMETHODSDIFFERENTCRYOPRESERVATIONDENSITYONTHECRYOPRESERVATIONQUALITYOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSWERESTUDIED1BOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSWERECOLLECTEDBYWAYSOFDIGESTIONWITHCOLLAGENASETYPEⅡTHECASEINGENEEXPRESSIONPROTEINSECRETIONWEREDETECTEDTHERESULTSSHOWEDTHATΑS1CASEINΒCASEINGENEEXPRESSIONWEREDETECTEDATTHEGENELEVELΒCASEINWASNTDETECTEDINPURIFIEDCELLSCELLCULTUREMEDIUMEXCEPTPRIMARYCELLSWHICHINDICATEDTHATTHETRANSLATIONOFΒCASEINWASRESTRICTED2THEEFFECTOFCRYOPROTECTANTSCRYOPRESERVATIONMETHODSCRYOPRESERVATIONDENSITYONTHECRYOPRESERVATIONQUALITYOFTHEFIFTHGENERATIONOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSWERESTUDIEDRESPECTIVELYGROUPA85DMEM10?S5DMSOGROUPB80DMEM10?S10DMSOGROUPC75DMEM10?S15DMSOGROUPD70DMEM10?S20DMSOGROUPE85DMEM5?S10DMSOGROUPF75DMEM15?S10DMSOGROUPG70DMEM20?S10DMSOGROUPH80DMEM10?S10GLYCEROLGROUPI70DMEM10?S20GLYCEROLGROUPJ60DMEM10?S30GLYCEROLGROUPKGRADIENTFREEZINGGROUPLPUTTHECRYOPRESERVATIONTUBESIN20℃FREEZERFANHOURTHEN80℃FREEZERF12HOURSTEDINLIQUIDNITROGENGROUPMPUTTHECRYOPRESERVATIONTUBESIN80℃FREEZERDIRECTLYF12HOURTHENSTEDINLIQUIDNITROGENGROUPNPUTTHECRYOPRESERVATIONTUBESINTOTHESELFMADEFROZENFOAMBOXIN80℃FREEZERDIRECTLYF12HOURTHENSTEDINLIQUIDNITROGENGROUPOCRYOPRESERVATIONTUBESWEREWRAPPEDBY15GCOTTONIN80℃FREEZERDIRECTLYF12HOURTHENSTEDINLIQUIDNITROGENGROUPPCRYOPRESERVATIONTUBESWEREWRAPPEDBY200LAYEROFMEDICALGAUZEIN80℃FREEZERDIRECTLYF12HOURTHENSTEDINLIQUIDNITROGENGROUPQ1104MLGROUPR1105MLGROUPS1106MLGROUPT1107MLMEASURETHESURVIVALRATE24HADHERINGRATEAPOPTOSISRATEOFBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSSOASTODETERMINETHEOPTIMALCONDITIONSFCELLCRYOPRESERVATIONTHERESULTSSHOWEDTHATTHEBESTCRYOPRESERVATIONCONDITIONSOFCRYOPRESERVEDBOVINE

簡介：山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文限制性必需氨基酸對奶山羊泌乳性能及其乳腺氨基酸代謝的影響姓名傅瑩申請學位級別碩士專業(yè)動物科技學院指導(dǎo)教師王中華20110614限制性必需氨基酸對奶山羊泌乳性能及其乳腺氨基酸代謝的影響2EFFECTSONMAMMARYMETABOLISMPRODUCTIVITYINLACTATINGGOATSWHENONEESSENTIALAMINOACIDLIMITSMILKPRODUCTIONABSTRACTLACTATIONPROCESSESEMPLOYTHEPRIITYTOUTILIZETHEPLASMAAAWEUSETHISTHEYTOPROVIDELIMITEDAAOFLACTATIONINTHISWAYAAEXTRACTIONBYTHEMAMMARYGLFROMBLOODMAYBEMAXIMIZEDTHEAIMOFTHISSTUDYWASTODETECTANALYSEAMINOACIDAAABSPTIONMETABOLISMOFTHEMAMMARYGLINRESPONSETOANIMPOSEDLIMITATIONONLYSLARGAMETMHISHSUPPLYFMILKPRODUCTIONBYNUTRIENTSINFUSIONTECHNIQUEARTERIOVENOUSTECHNIQUEFLOWPROBESMONITTECHNIQUETHREENONPREGNANTMULTIPAROUSLACTATINGBRITISHSAANENGOATS405KGOFBWWEREUSEDUNDERGENERALANESTHESIAACATHETERWASPLACEDINTOTHEABOMASUMTHECAROTIDARTERYWASELEVATEDTOASUBCUTANEOUSPOSITIONTHECOMMONCOLLATERALVESSELSBETWEENTHEUDDERHALVESWERELIGATEDANULTRASOUNDFLOWPROBEWASPOSITIONEDAROUNDTHEEXTERNALPUDICARTERYEPAINTWO33COMPLETELATINSQUAREDESIGNESL–AMHLACTATINGGOATSWEREFEDALOWPROTEINRATIONTHATPROVIDEDONLY100OFMETABOLIZABLEPROTEINENERGYREQUIREMENTSFMAINTAINTHEPROTEINENERGYOFMILKPRODUCTIONWASALLEVIATEDBYINFUSIONINTOTHEABOMASUMOFANAAMIXTUREFULLAAEXCLUDINGONEAARIPECNSTARCHGOATSWEREASSIGNEDTOTREATMENTS8TO10DACCDINGTOTHEDESIGNONTHETHREEDAYSOFTHESAMPLINGPERIODARTERIALMAMMARYVEINBLOODWEREWITHDRAWNTODETERMINEBLOODAACONCENTRATION10ML30MINFLOWPROBESMONITEDMAMMARYBLOODFLOWTHERESULTSSHOWEDTHATLOWLEVELSOFBLOODEAAWERE1YIELDSOFMILKCPMILKN638CPMILKN625CONTENTSIGNIFICANTLYREDUCEDP005INTHEGROUPOFMHBUTTHESEHADNODEFERENCEINTHEGROUPOFLA2MAMMARYBLOODFLOWSINCREASEDBY46715A1A33EXTRACTIONRATESOFFREEAABYMAMMARYGLDURING–LM–HINCREASEDBY397、1399、313ESPECIALLYTHEGROPOFMHP005BUTITHADNODEFERENCEINA4ARTERIALVENOUSBLOODCONCENTRATIONLOWERP005EXCEPT–ABUTMAMMARYUPTAKECHANGEDLITTLEMAMMARYGLMAYATTEMPTTOOVERCOMEANAA

簡介：學號2009021211姓名王新菊手機15966619501郵箱WXJ1986HI學院生命科學學院單位代碼10445學號2009021211分類號Q38研究生類別全日制碩士碩士學位論文論文題目目MASP2變異研究及其與奶牛乳腺炎關(guān)系分析學科專業(yè)名稱專業(yè)名稱細胞生物胞生物學申請申請人姓人姓名王新菊王新菊指導(dǎo)教師李國榮國榮教授教授王長法研究研究員論文提交文提交時間時間20122012年44月2020日

簡介：寧夏大學碩士學位論文牛C5基因多態(tài)性與奶牛乳腺炎的相關(guān)研究姓名李娜申請學位級別碩士專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師劉順德；王長法201204ABSTRACTTHEFIFTHCOMPONENTOFCOMPLEMENTC5，AMEMBEROFTHECOMPLEMENTSYSTEM，ARTICIPATESINBOTHCYTOLYTICANDINFLAMMATORYPROCESSESTHEMAJORROLEOFC5ISTOMEDIATESMANYINFLAMMATIONANDCYTOLYTICEVENTSINTHEPRESENTSTUDY，WEDISCOVEREDTHREESINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMSOFTHEC5GENEINCHINESEHOLSTEINANDANALYZEDTHEIRASSOCIATIONSWITHMILKTRAITSBYSCREENINGTHEGENETICVARIATIONOFC5GENEIN605INDIVIDUALSUSINGCREATEDRESTRICTIONSITEPOLYMERASECHAINREACTIONCRSPCR，PCRRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISMPCRRFLP，POLYMERASECHAINREACTIONSINGLESTRANDCONFORMATIONPOLYMORPHISMPCRSSCPANDDNASEQUENCINGTECHNIQUES，THREENEWSNPS，T73830G，C81733G，T92133A，WEREFOUNDTOHAVEALLELEFREQUENCIESOF80％，28％AND25％OFTHEMUTANTALLELE，RESPECTIVELYWHILETHETWOSNPST73830G，C81733GARELOCATEDWITHININTRON30ANDINTRON34，RESPECTIVELYTHESNPT92133ARESIDESINTHEEXON41REGION，WHICHISASYNONYMOUSSUBSTITUTIONTHEVALUEOFPOLYMORPHISMINFORMATIONINDICATEDTHATCHINESEHOLSTEINCATTLEPOSSESSEDINTERMEDIATEGENETICDIVERSITYFORT73830G，C81733G，T92133ALOCUS025005AMONGTHE605CHINESEHOLSTEINCATTLEWITHDAIRYHERDIMPROVEMENTDHIRECORDS，EIGHTDIFFERENTHAPLOTYPESAND21GENOTYPECOMBINATIONSWEREDETECTEDANALYSISOFTHEGENOTYPESANDHAPLOTYPESSHOWEDTHEPOLYMORPHISMSANDTHEIRASSOCIATIONWITHMILKPRODUCTIONTRAITSWASINVESTIGATEDSTATISTICALANALYSESREVEALEDNOCORRELATIONBETWEENTHESNPSANDSCSSCORESOURDATAALSOSUGGESTEDTHATTHEHAPLOTYPECOMBINATIONSOFH4H1WITHHIGHESTFATCONTENT，H2H6WITHHIGHESTPROTEINCONTENT，H4H6WITHHIGHEST305DMILKYIELD，H4H1WITHHIGHESTMASTITISRESISTANCEMOREOVER，WERANDOMSELECTED301CHINESEHOLSTEINCATTLETODISCUSSTHREESINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMSOFTHEC5GENEANDANALYZEDTHEIRASSOCIATIONSWITHCOMPLEMENTACTIVITYCH50ANDAH50STATISTICALANALYSESREVEALEDNOCORRELATIONBETWEENTHESNPSANDCOMPLEMENTACTIVITYOURDATASUGGESTEDTHATTHEHAPLOTYPECOMBINATIONSOFH1H5WITHHIGHESTLEVELOFAH50THEREFORE，HAPLOTYPECOMBINATIONSOFH4H1，H2H6，H4H6CANBEUSEDASPOSSIBLECANDIDATESFORMARKERASSISTEDSELECTIONINTHEDAIRYCATTLEBREEDINGPROGRAMKEYWORDSDAIRYCATTLE，C5，SNPS，MILKTRAITS，SOMATICCELLSCORE，MASTITIS

簡介：分類號S8133學校代碼10129UDC636學號08100041乳腺特異表達嗜熱菌糖苷酶轉(zhuǎn)基因牛的研究STUDYINGONTRANSGENICDAIRYBETAGLYCOSIDASESPECIFICEXPRESSEDINMAMMARYGL申請人李璐學科門類農(nóng)學學科專業(yè)動物遺傳與育種研究方向動物組織胚胎學與發(fā)育生物學指導(dǎo)教師周歡敏教授論文提交日期二〇一二年五月摘要轉(zhuǎn)基因動物研究已經(jīng)成為生命科學研究和開發(fā)的重要領(lǐng)域，也是發(fā)展新型畜牧業(yè)的有效途徑之一。本研究旨在將嗜熱菌糖苷酶LACS基因通過轉(zhuǎn)基因手段整合到奶?；蚪M，并通過構(gòu)建乳腺特異表達載體使其在轉(zhuǎn)基因個體的乳腺中表達，以期降低牛奶中乳糖比例。1通過聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）從PEGFPCL中得到啟動子CMV并在其兩端引入SACI和KPNI兩個酶切位點，將其插入線性化載體PDSRED21紅色熒光蛋白基因上游，指導(dǎo)該基因在真核生物中的表達，得到質(zhì)粒PDSREDCMV；將來自古細菌硫礦硫化葉菌的Β乳糖糖苷酶基因（LACS）中的374個位點進行偏好性調(diào)整，用化學合成法獲得優(yōu)化后的LACS基因片段及以奶牛血液基因組為模板PCR得到的POLY（A）加尾序列連入載體PDSREDCMV的MCS中，得到載體PDSREDCPL；最后，以奶牛血液基因組DNA為模板PCR擴增得到酪蛋白（BC）啟動子片段，并在其兩端引入XHOI和SALI兩個酶切位點，將其插入線性化載體PDSREDCPL的LACS基因的上游，得到質(zhì)粒PBL，構(gòu)建乳腺特異性表達載體。經(jīng)酶切和PCR鑒定，質(zhì)粒構(gòu)建正確。2采集牛胎兒皮膚組織，用組織塊法分離培養(yǎng)牛胎兒皮膚成纖維細胞。對來源于經(jīng)鑒定為雌性的牛胎兒的皮膚分離培養(yǎng)得到的原代成纖維細胞進行冷凍保存。共建立10個雌性牛胎兒皮膚成纖維細胞系，從中選擇3個原代細胞游離快、形態(tài)良好且生長正常的皮膚成纖維細胞，測定生長曲線和核型分析。結(jié)果表明選擇的三個細胞系的F5代、F10代和F15代細胞生長均經(jīng)歷了潛伏期02天、對數(shù)生長期36天和平臺期7天之后；三個細胞系F5代、F10代和F15代細胞染色體具有正常二倍體性的比率（正常染色體數(shù)目2N60）均在80以上。說明這三個細胞系F15代之前均可作為核移植的供體細胞。3經(jīng)測序鑒定正確的質(zhì)粒（DSREDLACS2），采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染已選擇的3個牛胎兒成纖維細胞。轉(zhuǎn)染1824H后能夠表達紅色熒光的轉(zhuǎn)染組合以130稀釋培養(yǎng)，細胞生長匯合達50P時，換為含600GMLG418的篩選培養(yǎng)液培養(yǎng)直至形成單克隆。將能夠表達紅色熒光的克隆混合擴大培養(yǎng)，并做目的基因檢測。結(jié)果表明，能夠表達紅色熒光的混合克隆均能夠檢測到目的基因，因而篩選得到的混合克隆可以作為核移植的供體細胞。4采用體細胞核移植法構(gòu)建轉(zhuǎn)LACS基因重構(gòu)胚胎。經(jīng)卵母細胞孤雌發(fā)育體系摸索，確定了轉(zhuǎn)基因重構(gòu)胚體外培養(yǎng)和發(fā)育的參數(shù)。結(jié)果表明，構(gòu)建?？寺∨咛ミ^程中融合參數(shù)以電壓100V、脈沖時間30S和脈沖次數(shù)2次最佳，融合率達到78?；激活采用離子酶素聯(lián)合6D的方法最佳，卵裂率達90以上，囊胚率達30以上。5采用非手術(shù)法進行轉(zhuǎn)LACS基因克隆胚胎移植。選擇緊縮桑葚胚、早期囊胚和

簡介：奶牛乳腺中小肽的攝取及其在乳蛋白合成中的作用⑧論文作者簽名蟄鴦益指導(dǎo)教師簽名墨遨盟論文評閱人五僮童塞隱名證宣答辯委員會主席塞位亟熬援直立壅些太堂委員1迕掛苤麴援浙、江太堂委員2趙凰庭副熬攫差國垡苤掛太堂委員3汪叢真熬援浙江太堂委員4韭左歪熬援浙江太堂委員5塞J建塹熬援塹選太堂委員6昱題明麴援浙江太堂EFFECTSOFSMALLPEPTIDESONTHESYNTHESISOFMILKPROTEININCULTUREDBOVINEMAMMARYTISSUEAUTHOR’SSIGNATURE一‘●‘SUPERVISOR7SSIGNATUREEXTERNALREVIEWERS△衛(wèi)Q衛(wèi)Y墮I鯉EXAMININGCOMMITTEECHAIRPERSONEXAMININGCOMMITTEEMEMBERSDATEOFORALDEFENCE』墜望寶墨2Q