轉(zhuǎn)sfat-1基因乳腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)研究.pdf

1、乳腺上皮細(xì)胞由于其特有的合成和分泌的生理功能,而成為研究乳腺生物反應(yīng)器的重要細(xì)胞模型。這種細(xì)胞模型能真實(shí)反映動(dòng)物乳腺組織生長、發(fā)育及泌乳的啟動(dòng)、維持等各項(xiàng)生物學(xué)機(jī)制,驗(yàn)證構(gòu)建的乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建的是否合理有效。乳腺上皮細(xì)胞及以此為基礎(chǔ)建立的細(xì)胞模型,其應(yīng)用涉及到分子生物學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域,對于研究不同乳蛋白基因的表達(dá)及乳腺生物反應(yīng)器有重要意義。
　　 人體內(nèi),ω-6多不飽和脂肪酸與ω-3

2、多不飽和脂肪酸的比例將會直接影響身體健康及某些慢性病的發(fā)生。ω-6多不飽和脂肪酸可以經(jīng)由食物直接獲取,也可以由人體合成。但哺乳動(dòng)物體內(nèi)缺乏合成ω-3多不飽和脂肪酸的酶,所以,正常狀態(tài)下,ω-3 PUFAs只能經(jīng)由飲食獲取。而在現(xiàn)代飲食結(jié)構(gòu)中,ω-6／ω-3 PUFAs的比例嚴(yán)重偏高,直接影響了現(xiàn)代人的身體健康。在這種情況下,人們需要豐富的ω-3多不飽和脂肪酸的來源,從而降低ω-6／ω-3 PUFAs的比例,改善人們的膳食結(jié)構(gòu)。fat—1

3、基因恰好可以編碼ω-3不飽和脂肪酸脫氫酶,實(shí)現(xiàn)ω-6多不飽和脂肪酸到ω-3多不飽和脂肪酸的轉(zhuǎn)變。
　　 本研究所用實(shí)驗(yàn)材料來源于屠宰場屠殺的健康泌乳后期的荷斯坦奶牛的乳腺組織,通過對荷斯坦奶牛乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法的篩選,建立了具有正常生理功能的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系,并通過對乳腺上皮細(xì)胞的特異性蛋白角蛋白18的免疫熒光染色,對所建立的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行了鑒定。結(jié)果:利用組織塊接種法獲得里大量的乳腺上皮細(xì)胞用于原代培養(yǎng)。以DMEM—F1

4、2為基礎(chǔ)培養(yǎng)液,在其中添加205的胎牛血清、胰島素(1μg／mL)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(5μg／mL)、孕酮(1μg／mL)、氫化可的松(1μg／mL),乳腺上皮細(xì)胞生長狀態(tài)良好。乳腺上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞混合生長,原代培養(yǎng)中,兩種不同細(xì)胞之間界限明顯,但經(jīng)過傳代后,界限不明顯。乳腺上皮細(xì)胞有不同的細(xì)胞形態(tài),多為鵝卵石樣及多角形。
　　 利用本實(shí)驗(yàn)室己構(gòu)建的兩個(gè)乳腺特異性表達(dá)載體pCB1F1E(8979bp)和pCB2F1E(9101bp)