鈣離子濃度對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖及免疫的影響.pdf

1、本試驗(yàn)采用組織塊法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞，采用多種方法純化細(xì)胞。并以細(xì)胞為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，采用HPLC、MTT、FCM法檢測(cè)BMEC在不同Ca2+濃度處理后，單層細(xì)胞通透性與細(xì)胞凋亡的情況;并研究了不同Ca2+濃度與LPS刺激后細(xì)胞因子mRNA、MAPK和NF-κB蛋白的表達(dá)。
　　 試驗(yàn)一用組織塊培養(yǎng)法獲得大量奶牛的原代乳腺上皮細(xì)胞，聯(lián)合運(yùn)用刮除法、相差消化和相差貼壁法、單克隆法可獲得純化的、活力旺盛的乳腺上皮細(xì)胞，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為

2、上皮細(xì)胞。用不同Ca2+濃度的培養(yǎng)基孵育細(xì)胞，通過HPLC法檢測(cè)單層細(xì)胞通透性。結(jié)果表明:降低胞外Ca2+濃度對(duì)緊密連接具有破壞作用。
　　 試驗(yàn)二通過MTT法檢測(cè)不同Ca2+濃度對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明:各濃度處理組較對(duì)照組對(duì)細(xì)胞增殖均有抑制作用，濃度越低抑制作用越明顯;處理細(xì)胞48h較24h和72h對(duì)細(xì)胞增殖的影響更明顯。此外，采用FCM法檢測(cè)不同Ca2+濃度在48h時(shí)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果表明:0.45mmo

3、l/L濃度組對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞存活率影響最顯著。說(shuō)明降低胞外Ca2+濃度對(duì)細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用。
　　 試驗(yàn)三不同Ca2+濃度與LPS組合刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞，采用相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)IL-1β、IL-6和IFN的mRNA表達(dá)。結(jié)果表明:在不同Ca2+濃度與LPS刺激下，三種細(xì)胞因子的表達(dá)量有所提高，IL-1β與IFN較對(duì)照組變化顯著，但I(xiàn)L-6變化不明顯。此外，采用ELISA法在蛋白水平上檢測(cè)24h時(shí)MAPK和NF-κB蛋白的