奶牛乳腺上皮細(xì)胞低溫保存與復(fù)蘇培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、本試驗以內(nèi)蒙古地區(qū)的荷斯坦牛乳腺組織為材料，在二維水平上培養(yǎng)乳腺上皮細(xì)胞，并在此基礎(chǔ)上分別研究了不同凍存液、不同凍存方法和不同凍存密度對奶牛乳腺上皮細(xì)胞低溫保存的影響。
　　1.采用Ⅱ型膠原酶消化收集細(xì)胞的方法進(jìn)行奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)，并對其酪蛋白基因表達(dá)和蛋白分泌情況進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，在基因水平上，αs1-酪蛋白和β-酪蛋白得以表達(dá)，而在蛋白水平上，也僅檢測到原代上皮細(xì)胞β-酪蛋白的表達(dá)，純化的細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)基中均未檢測到。

2、由此表明，在培養(yǎng)過程中，奶牛乳腺上皮細(xì)胞β-酪蛋白的翻譯途徑受到限制。
　　2.奶牛乳腺上皮細(xì)胞傳至第5代后，分別研究了10組配方的凍存液，A組：85％DMEM+10%胎牛血清+5%DMSO，B組：80%DMEM+10%胎牛血清+10%DMSO，C組：75%DMEM+10%胎牛血清+15%DMSO，D組：70%DMEM+10%胎牛血清+20%DMSO，E組：85%DMEM+5%胎牛血清+10%DMSO，F(xiàn)組：75%DMEM+15%

3、胎牛血清+10%DMSO，G組：70%DMEM+20%胎牛血清+10%DMSO，H組：80%DMEM+10%胎牛血清+10%甘油，I組：70%DMEM+10%胎牛血清+20%甘油，J組：60%DMEM+10%胎牛血清+30%甘油；6組凍存方法，K組：常規(guī)的梯度降溫法；L組：將凍存管置于-20℃冰柜中1h，再在-80℃低溫冰柜中12h后，保存于液氮中；M組：直接將凍存管放置在-80℃低溫冰柜12h后，保存于液氮中；N組：將凍存管插入自制的

4、泡沫凍存盒內(nèi)，直接在-80℃低溫冰柜中12h后，保存于液氮中；O組：將凍存管用15g的棉花包起來后，直接置于-80℃低溫冰柜中12h后，保存于液氮中；P組：將凍存管用200層醫(yī)用紗布包裹后，-80℃低溫冰柜中12h后，保存于液氮中；4組凍存密度，Q組：1×104個/mL；R組：1×105個/mL；S組：1×106個/mL；T組：1×107個/mL，對奶牛乳腺上皮細(xì)胞低溫保存的影響。通過測定復(fù)蘇培養(yǎng)后細(xì)胞的存活率、24h貼壁率和凋亡率，確