奶山羊乳腺物質(zhì)代謝研究.pdf

1、乳腺擁有將各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化成乳成分的能力，因此乳腺上皮細(xì)胞被稱為“生物工廠”。泌乳是乳腺的主要功能，當(dāng)哺乳動(dòng)物獨(dú)有的泌乳能力被激活時(shí)，乳腺向新生代提供成長(zhǎng)和發(fā)育所需要的營(yíng)養(yǎng)均衡的食品。乳腺泌乳功能與乳腺發(fā)育密切相關(guān)，乳腺發(fā)育主要在成年完成，由激素和生長(zhǎng)因子進(jìn)行調(diào)控。
　　 乳腺的物質(zhì)代謝是乳腺發(fā)育和成功泌乳的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)對(duì)乳腺的糖、脂和蛋白質(zhì)代謝進(jìn)行了系統(tǒng)研究。采用熒光定量RT-PCR方法研究了AKT1、PRLR、GLUT1、G

2、LUT4、GLUT12、HKⅠ、HKⅡ、LALBA、β-1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶mRNA在乳腺發(fā)育和泌乳各時(shí)期的表達(dá)，并使用免疫熒光組織化學(xué)和蛋白印記分析方法檢測(cè)GLUT4在乳腺中的定位及其蛋白質(zhì)水平的表達(dá)。使用HPLC方法測(cè)定乳腺和乳中的乳糖，以確定乳糖開始合成的時(shí)間及產(chǎn)量。結(jié)果顯不AKT1、PRLR、GLUT1、GLUT12、HKⅠ、HKⅡ、LALBA、β-1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶mRNA在泌乳期表達(dá)上調(diào)，GLUT4 mRNA在泌乳期下

3、調(diào)。奶山羊乳腺基本糖代謝和乳糖合成均受PRLR、AKT1調(diào)控；奶山羊乳腺的主要葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是GLUT1，GLUT4和GLUT12也有表達(dá)；LALBA對(duì)于乳糖分泌的啟動(dòng)和維持至關(guān)重要；乳腺中乳糖最早出現(xiàn)在P150d。
　　 選擇與乳腺脂肪酸攝入（VLDLR、LPL、CD36）、外源膽固醇運(yùn)輸（ABCA1、ABCG2）、細(xì)胞內(nèi)脂肪酸運(yùn)輸（FABP3、FABP4、ACBP）、脂肪酸長(zhǎng)鏈（ACSL1）和短鏈（ACSS2、ACSS1）的

4、激活、從頭合成脂肪酸（ACACA、FAS）、去飽和（SCD、FADS1、FADS2）、三?；视秃铣桑ˋGPAT6、GPAM、LPIN、DGAT1、DGA12）、脂質(zhì)小滴形成（BTN1A1、XDH、ADFP、PLIN）、酮體利用（BDH1、OXCT1）和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)（INSIG1、INSIG2、SACP、PPARG、PPARGC1A、PPARGC1B、THRSP、SREBF1、SRE8F2）、鞘磷脂合成（SPTLC2、LASS2、SGPL1

5、、UGCG、OSBP、OSBP10）等相關(guān)的多個(gè)基因以及HSL、MLXIPL通過(guò)RT-PCR方法加以檢測(cè)，結(jié)果顯示大部分乳腺上皮細(xì)胞表達(dá)的基因在妊娠期和泌乳期上調(diào)，而脂肪細(xì)胞表達(dá)的基因則由于發(fā)育過(guò)程中脂肪的讓位而下調(diào)。PRLR、AKT1對(duì)奶山羊乳腺脂代謝的調(diào)控主要是通過(guò)PRLR、AKT1對(duì)SREBP1的調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)。SREBP1、SREBP2和PPARG位于脂代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的中心，山羊乳脂肪酸中C16:0、C18:1n9c和C18:1n9t

6、含量最高。
　　 研究4種酪蛋白（asl-casein，as2-casein，β-casein，κ-casein）與4種乳清蛋白（LGB，LALLBA，LTF，WAP）mRNA在不同時(shí)期的表達(dá)，結(jié)果顯示所有蛋白質(zhì)mRNA都在泌乳期表達(dá)上調(diào)，其中LTF從P150d到Lld表達(dá)快速增加。同時(shí)檢測(cè)與乳蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和翻譯作用相關(guān)的PRLR、AKT1、STAT5、ELF5、EIF4E-BP1、S6Kinase、Caveolinl mRNA在

7、乳腺中的表達(dá)，結(jié)果顯示除EIF4E-BP1和Caveolin1外，其他基因的表達(dá)趨勢(shì)與乳蛋白基本一致，提示其在乳蛋白轉(zhuǎn)錄或翻譯過(guò)程中具有作用，而EIF4E-BP1、Caveolin1 mRNA的下調(diào)提示其具有泌乳抑制作用。編碼奶山羊乳蛋白質(zhì)基因的表達(dá)均在泌乳期升高，其中LTF在Lld達(dá)到峰值，提示其在泌乳啟動(dòng)中的重要作用。PRLR對(duì)奶山羊乳蛋白質(zhì)合成轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要通過(guò)JAK2激活STAT5發(fā)揮作用，AKT1則通過(guò)mTOR對(duì)EIF4E