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1、MultiplexRTPCRDetectionofPotatoVirusesandthepartlySequenceDeterminationofPVS(IsolateNeimeng)ThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInfulfillmentoftheRequirementFortheDegreeofMasterofAgronomyAuthor:HuapengZhang(Col
2、legeofAgronomyandPlantProtection)Supervisor:ProfJianfengZhangQingdaoChinaJune,2011311供試馬鈴薯材料17312試劑及配制173121主要試劑173122主要溶液的配制17313儀器2032方法20321毒源的檢測203。22引物的設(shè)計與合成21323馬鈴薯總RNA的提取22324帶毒和健康馬鈴薯材料的單重RTPCR檢測22325PVY、PVS和PLRV檢
3、測片段的測序及同源性比較23326PVY、PVS和PLRV單重RTPCR反應(yīng)條件的試探23327ELISA和RTPCR檢測方法的靈敏度比較23328PVY、PVS和PLRV的雙重RTPCR24329PVY、PVS和PLRV的三重RTPCR243210PVS部分序列的克隆、測序和同源性比較2532101PVS部分序列擴(kuò)增的引物設(shè)計2532102大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化2632103PVS(內(nèi)蒙分離株)部分序列的測定與比對284
4、試驗結(jié)果與分析2841ELISA檢測結(jié)果2842各種材料總RNA的分析2843健康馬鈴薯材料對照以及PVY、PVS和PLRV的單重RTPCR3044PVY、PVS和PLRV檢測片段的測序及同源性比較3145PVY、PVS和PLRV單重RT—PCR反應(yīng)條件的試探33451不同退火溫度的擴(kuò)增結(jié)果34452不同dNTPS濃度的擴(kuò)增結(jié)果35453不同MgC12濃度的擴(kuò)增結(jié)果36454不同Taq酶濃度的擴(kuò)增結(jié)果3646ELISA和RT—PCR檢測
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