雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒分離株S1基因的克隆與序列分析及RT-PCR檢測方法的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒分離株S1基因的克隆與序列分析及RTPCR檢測方法的研究姓名：常繼濤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：關(guān)平原申之義20060501CloningandSequenceAnalysisoftheS1GeneofAvianViralArthritisVirusIsolatesandDetectionofAVAVbyRT—PCRAbstractTheAvianViralArthritisV

2、iDIS(AVAV)isolatedinInnerMongoliaandTianjin(AVAVB一98，C一98，G98，T98)WaSpropagated，andthetotalRNAofviruswasextractedAccordingtothepublishedS1genesequenceofARVSl133straininGeneBank，twopairsofprimerweredesigned，oneissequencin

3、gprimer，theotherisdiagnosticprimerTheS1geneofviruswasamplificatedwithsequencingprimerbyRT—PCRandthenclonedintopGEMTEasyplasmidsandthensequencedEachoftheacquiredsequencescontains1643bp，andallcongtainthreeORFs(ORFl，ORF2and

4、ORF3)andthenontranslatedregionP10P17and03proteinwasencodedbyORFl，ORF2andORF3respectivelyTheresultofsequencecomparisonindicated：therearen’tdifferencesinP10proteinandP17proteinamongthefourisolatesofAVAV，andonlythreenucleot

5、idesdifferencein03gene；theirhomologyisabove95％comparedwiththefourisolatedAVAVstrainswithotherreferencestrainSexceptARV138andNelsonBayVirusmBV)ThisindicatedthattheS1gene’SdependablityishighbetweentheAVAVisolatedfromChinaa

6、ndreferencestrainsThevirusRNAwasamplificatedwithdiagnosticprimerbyonestepRT—PCI乙thenestablishedRT—PCRdiagnosticmethod，anddetectedthismethod’SspecificityandsensitivityTheresultsindicatedthattheonestepRTPCRmethodcandetectt

7、henucleicacidofstandardstrainvirus(ARV—S1133)andloealityisolatedstrains(B98，C98，G一98，T98)，whichwerepropagatedinchickembryoWegeta435bpDNAfragment，whichisthesame、Ⅳitllweexpected，whilethedetectionresultsofotherreferenceetio

8、logicalagentsfNDV，IBDV，IBV，ILTV，EDS76V)werenegative；theminimumARVRNA’SdetectionlevelofthisRTPCRmethodisO5ngthisillustratedthatthismethodisspecificandsensitiveforthedetectionofAvianreovirusKeywords：AvianHralArthritisVirus

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