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文檔簡介
1、馬鈴薯是世界第四大糧食作物,它屬于一年生茄科茄屬作物,具有很高營養(yǎng)價值和使用價值。馬鈴薯極易感染病毒,已經(jīng)報道的可以侵染馬鈴薯的病毒超過35種,對四川省馬鈴薯產(chǎn)業(yè)危害最嚴(yán)重的有6種病毒,主要是馬鈴薯X病毒(PVX)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、馬鈴薯S病毒(PVS)、馬鈴薯A病毒(PVA)、馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)、馬鈴薯M病毒(PVM)。研究表明,這6種馬鈴薯病毒不僅可以單一侵染植株,還常常伴有復(fù)合侵染,嚴(yán)重影響馬鈴薯的品質(zhì)和產(chǎn)量。
2、r> 四川省自2006年至今沒有再次對四川省馬鈴薯6種主要病毒的分布進行普查,為了解這6種病毒在四川省的分布,本試驗應(yīng)用血清學(xué)雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(DAS-ELISA)對采自四川省不同海拔地區(qū)500m以下、500-1000m以及1000m以上的16個縣(市)的1003份田間馬鈴薯樣品進行檢測,檢測結(jié)果顯示,6種主要馬鈴薯病毒在四川省均有不同程度的發(fā)病,PVA的發(fā)病率為10.87%,PVM的發(fā)病率為5.68%,PLRV的發(fā)病率為5.
3、38%,PVY的發(fā)病率為19.44%,PVS的發(fā)病率為26.44%,PVX的發(fā)病率為18.74%。2006年,四川省對馬鈴薯病毒的分布情況進行了一次調(diào)查,結(jié)果顯示PVA、PVM、PLRV、PVY、PVS和PVX的發(fā)病率分別為16,41%、9.58%、3.58%、7.14%、61.77%和17.74%,與2015年調(diào)查結(jié)果相比較可看出,PVS病毒的發(fā)病率降低近35%,PVA的發(fā)病率下降5%左右,PVY的發(fā)病率增加近12%,其余三種病毒的發(fā)
4、病率變化不大,總體來說,除了PVY以外,其余5種病毒的發(fā)病情況得到一定程度的控制,這與近些年馬鈴薯脫毒種薯的種植有很大的關(guān)系。
不同海拔高度的發(fā)病情況也不相同,整體來說海拔在500m以下和500-1000m發(fā)病率較高,1000m以上發(fā)病率相對較低;每種病毒在不同海拔的發(fā)病情況存在差異,PVA和PVY在海拔500m以下地區(qū)的發(fā)病率較高, PLRV、PVM和PVS在海拔500-1000m地區(qū)發(fā)病率較高,PVX在海拔1000m以上地
5、區(qū)發(fā)病率較高;PVM和PLRV病毒在不同海拔地區(qū)和不同季節(jié)發(fā)病率最低,說明不同海拔對馬鈴薯6種主要病毒的發(fā)病情況有一定的影響,但季節(jié)對其影響不大。
2014-2015年,對四川省25個公司的4793份脫毒種薯樣品進行DAS-ELISA檢測,檢測結(jié)果顯示,PVS的檢出率最高,達到5.3%,其次是PVM和PVY,檢出率分別為2.09%和2.04%,PVA、PVX和PLRV的檢出率在1%以下;四川省脫毒種薯的生產(chǎn)主要采用基礎(chǔ)苗、原原
6、種、原種和生產(chǎn)種四代種薯繁育體系,檢測的樣品中基礎(chǔ)苗的合格率為96.75%,原原種合格率為99.53%,原種合格率為83.74%,生產(chǎn)種合格率52.24%,雖然基礎(chǔ)苗、原原種的合格率都相對較高,但并未達到純度100%的要求,因此,要從源頭上提高脫毒種薯種苗質(zhì)量,生產(chǎn)中要做到及時防控,降低病毒的發(fā)生。
目前,DAS-ELISA是檢測馬鈴薯病毒的主要方法,但因其存在成本高、靈敏度不足等缺點,近幾年,分子生物學(xué)的方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用到馬
7、鈴薯病毒的檢測中。本試驗研究并建立適合同時檢測PVA、PVM、PLRV、PVY、PVS和PVX6種主要馬鈴薯病毒的多重RT-PCR檢測體系,根據(jù)GenBank中公布的6種病毒(CP)基因序列設(shè)計特異性引物,并對反應(yīng)過程中的Taq酶濃度、dNTPs濃度、退火溫度和循環(huán)次數(shù)等主要影響因素進行優(yōu)化,結(jié)果表明在25ul的體系中Taq酶的終濃度為0.03U/ul、dNTPs的終濃度為0.16mmol/L,反應(yīng)程序中退火溫度為54℃,循環(huán)次數(shù)為35
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