熒光定量RT-PCR檢測(cè)埃博拉病毒方法的建立.pdf

1、埃博拉出血熱(EHF)是由埃博拉病毒(Ebolavirus，EBOV)引起的一種急性出血性傳染病，人感染后致死率高達(dá)90％，是人類(lèi)危害最嚴(yán)重的傳染病之一，對(duì)公共衛(wèi)生安全和人類(lèi)的健康有很大的威脅。到目前為止，EHF還沒(méi)有有效治療的藥物和疫苗，而且在我國(guó)尚無(wú)此病癥出現(xiàn)。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確和敏感的檢測(cè)方法顯得尤為重要。
　　 本文為了建立快速敏感的熒光定量RT-PCR檢測(cè)EBOV的方法，根據(jù)GenBank中公布的EBOVNP基因

2、序列，設(shè)計(jì)引物和MGB探針，通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件，建立了一種檢測(cè)EBOVS/Z的一步法MGB熒光定量RT-PCR方法和一種檢測(cè)EBOV的SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR方法。以體外轉(zhuǎn)錄的EBOVRNA為模板，該方法檢測(cè)的靈敏度可以達(dá)到1.0×103個(gè)拷貝／μl，檢測(cè)范圍達(dá)到8個(gè)數(shù)量級(jí)為103-1010。建立的方法對(duì)馬爾堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血熱病毒(XHFV)、乙型腦炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H

3、3N2)和豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV)E基因組RNA無(wú)非特異性擴(kuò)增。本文將熒光定量RT-PCR技術(shù)用于埃博拉病毒的定量檢測(cè)中，并且建立了OnestepMGB熒光定量RT-PCR檢測(cè)EBOVS/Z和SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR檢測(cè)EBOV的方法，具有一定的創(chuàng)新性。該方法的建立對(duì)加快我國(guó)EBOV診斷技術(shù)的研究具有重要推動(dòng)作用。
　　 用建立好的兩種方法對(duì)我國(guó)不同地區(qū)不同物種的易感動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示我國(guó)暫時(shí)還未