馬鈴薯卷葉病毒中國株基因組全序列及馬鈴薯S病毒內(nèi)蒙分離株3＇端序列的分析.pdf

1、NucleotidesequenceanalysisofthegenomeofPotatoleafrollvirusChinaand3endpartofPotatovirusS—InnerMongoliaThesissubmittedtoQ叼缸o(hù)AgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyAuthor：JunyingLi

2、u(CollegeofAgronomyandPlantProtection)Supervisor：ProfJianfengZhangQingdaoChmaJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要馬鈴薯卷葉病毒中國株基因組全序列及馬鈴薯S病毒內(nèi)蒙分離株3，端序列的分析摘要馬鈴薯卷葉病毒(Potatoleafrollvirus，PLRV)和馬鈴薯S病毒(Potatovirus墨PVS)是馬鈴薯上的兩種重要病害。馬鈴薯卷葉病毒中國分離株

3、(Potatoleafrollvirus—China，PLRVCH)至今未有全序列報(bào)道，在其他分離株的全序列報(bào)道中末端序列測(cè)定結(jié)果也存在較大差異，將影響對(duì)其功能的進(jìn)一步研究；而且PLRVCH必然存在與其他分離株不同的特性，也值得進(jìn)一步探究。PVS屬麝香石竹潛隱病毒，起初危害不顯癥狀，易造成病毒積累，造成馬鈴薯產(chǎn)量長期得不到提高，再加之其與其他多種病毒有協(xié)同作用關(guān)系，也可引起較大的危害。確定馬鈴薯S病毒內(nèi)蒙分離株(PotatovirusS

4、InnerMongolia，PVS—M的所屬株系，才能更有針對(duì)性的防治病害，培育抗病品種，和評(píng)估產(chǎn)量損失。本研究主要結(jié)果如下：1本研究獲得了完整的馬鈴薯卷葉病毒中國分離株基因全長序列5884nt。首次發(fā)現(xiàn)5’最末端第一個(gè)堿基U，為VPg與核酸鏈的連接機(jī)制研究提供參考；進(jìn)一步證明3’最末端為GU，豐富了馬鈴薯卷葉病毒屬末端堿基為GU的證據(jù)。2建立了兩套適用于低豐度馬鈴薯卷葉病毒RNA末端序列測(cè)定而且簡便易行成本低效率高的體系。設(shè)計(jì)了無po

5、lyA的RNA37末端用NH2修飾DNASplintPrimer搭橋的加尾方法。加尾產(chǎn)物可直接做下游反應(yīng)的模板是兩體系的共同特性。新技術(shù)更可以實(shí)現(xiàn)PLRVRNA3『末端特異性加尾，再配合特殊溫度控制的RTPCR，在5h內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)。兩體系的建立使本研究可以感染馬鈴薯卷葉病毒植物總RNA為模板，獲得馬鈴薯卷葉病毒非編碼區(qū)序列。3PLRVCH序列在可能存在的Rapl和ORF6區(qū)域中存在特有終止子突變，但是否存在這兩個(gè)蛋白還需要進(jìn)一步確定。