LRP16基因促進乳腺癌增殖、轉移分子機制的研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴重威脅婦女生命健康的惡性腫瘤，盡管其診治取得了重大的進展，但是發(fā)病率呈遞增趨勢。乳腺癌惡性演進相關基因的研究有望對提高治愈率、降低死亡率獲得新的突破。LRP16是從健康成人外周血淋巴細胞中克隆的人類基因，既往研究表明雌激素通過ERα上調該基因表達，該基因過表達促進乳腺癌MCF-7細胞增殖，但具體分子生物學機制并不明了。本研究探討了該問題，并證明該基因可以作為臨床乳腺癌預后評判的分子標記物。本研究共分為2部分： 一、

2、LRP16基因促進MCF-7細胞增殖、轉移分子生物學機制的研究 目的：研究LRP16基因促進ERα陽性乳腺癌MCF-7細胞增殖和轉移的分子生物學機制。 方法：(1)將ERα熒光素酶報告子3×ERE-Luc或LRP16啟動子S10熒光素酶報告子pGL-3-S10與ERα真核表達載體、pcDNh3.1-16[或者針對LRP16的小干擾RNA(LRP16-siRNA374、LRP16-siRNA668)及對照小干擾RNA(Co

3、ntrol-siRNA)]共轉染MCF-7細胞，測定3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對熒光素酶活性。(2)Northern Blot檢測經RNA干擾分別抑制了LRP16基因和GFPi基因表達的MCF-7細胞株(MPL-374、MPL-668、MPL-GFPi)中ERα下游靶基因E2F1、RARα、c-fos、MTA<,3>、cathepsIn D、Snail、Slug對雌激素刺激反應性的差異；Western Blot檢測3種胞

4、株中cyclin D1、E-cadherin蛋白對雌激素刺激的反應性。 結果：(1)雌激素刺激組3xERE-Luc和pGL-3-S10的相對熒光素酶活性隨轉染pcDNA3.1-16增加而增加，呈現(xiàn)劑量依賴性；而DMSO組3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對熒光素酶活性卻不隨轉染pcDNA3.1-16量的增加而增加。雌激素刺激組LRP16基因抑制率越高，3×ERE-Luc和pGL-3-S10的相對熒光素酶活性越低；而DMS

5、O組中沒有差異。(2)雌激素刺激后，MPL-374、MPL-668、MPL-GFPi細胞中ERα下游靶基因E2F1、RARα、c-fos、MTA<,3>的表達水平依次升高，但cathepsin D、Snail、Slug在三種細胞中表達沒有差異。(3)雌激素刺激后，MFL-374、MPL-668、MFL-GFFi細胞中cyclin D1表達依次升高，而E-cadherin表達依次降低。 結論：雌激素反應性靶基因LRP16反饋增強E

6、Rα介導的轉錄激活活性，是一個我們首次發(fā)現(xiàn)的新ERα下游靶基因作為共激活因子反饋增強其介導的轉錄激活活性的基因；LRP16通過主要通過改變cyclin D1的表達水平促進MCF-7細胞的增殖，通過改變E-cadherin的表達水平促進MCF-7細胞的的轉移。 二、臨床乳腺癌標本中LRP16基因表達與腫瘤大小、轉移相關性的研究 目的：探討臨床乳腺癌標本中LRP16基因表達與腫瘤大小、轉移之間的相關性。 方法：收集初

7、診乳腺癌患者組織標本及臨床資料，用免疫組化的方法檢測標本中LRP16及ER、PR、E-cadherin表達水平。 結果：臨床乳腺癌標本中，腫瘤直徑>2.0cm的例標本中LRP16的陽性率顯著高于腫瘤直徑≤2.0cm的標本；有腋窩淋巴結轉移的標本中LRP16的陽性率顯著高于無腋窩淋巴結轉移的標本；隨腫瘤TNM分期的增高，LRP16的陽性率也相應增高；有腋窩淋巴結轉移的標本中E-cadherin的陽性率顯著低于無腋窩淋巴結轉移的標本

8、；腫瘤TNM分期的增高，E-cadherin的陽性率相應減低。LRP16陽性率隨E-cadherin陽性率的降低而增高。差異均具有顯著統(tǒng)計學意義。 結論：臨床乳腺癌標本中LRP16表達與腫瘤大小、腋窩淋巴結轉移、腫瘤臨床分期呈正相關，與E-cadherin表達呈負相關，LRP16可以作為乳腺癌預后評判的分子標記物。 結論 1．雌激素反應性靶基因LRP16反饋增強ERα介導的轉錄激活活性，是一個我們首次發(fā)現(xiàn)的新ER