乳腺癌中LRP16基因的表達及功能研究.pdf

1、目的：①探索乳腺癌組織中的LRP16基因mRNA的表達水平及其臨床病理意義；②研究LRP16基因的表達與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移的相關性；③進一步探討LRP16基因在乳腺癌治療中潛在的靶向性意義。 方法：①收集乳腺癌手術切除的新鮮組織標本和部分臨床病理診斷資料，運用NorthernBlot方法檢測乳腺癌及癌旁臨床組織標本的LRP16基因mRNA的表達水平。②選擇雌激素受體陽性的并經(jīng)RNA干擾分別抑制了LRP16基因乖GFP基因表達的乳腺

2、癌MCF-7細胞株(M-pL374，M-pL668、M-pLGFPi)，建立腫瘤細胞Transwell運動、粘附和侵襲轉(zhuǎn)移模型和FVB小鼠肺轉(zhuǎn)移模型，并用WesternBlot或免疫組化的方法檢測細胞粘附分子E-cardherin、基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs的表達水平。③經(jīng)抗雌激素處理MCF-7細胞株后，用NorthernBlot檢測LRP16mRNA表達的時效性變化；觀察M-pL374、M-pL668、M-pLGFPi細胞對放療和化療的敏

3、感性差異。 結果：①以β-actin為內(nèi)參照，22例癌標本LRP16mRNA的表達較癌旁組織高2倍的有9例，過表達率約40％(9/22)，其中高2～3倍有4例，高3～5倍的也有4例，只1例存在6倍的差距。 ②腫瘤直徑小于3cm的9例，其中過表達LRP16僅1例；直徑3～5cm的13例中過表達LRP16就有8例，有統(tǒng)計學差異(Fish's檢驗，P=0.031)。22例中有12例腋窩淋巴結轉(zhuǎn)移，其中8例過表達LRP16，而無

4、轉(zhuǎn)移10例中只1例過表達，有顯著差異(Fish's檢驗，P=0.011)。過表達LRP16的9例臨床分期：Ⅰ期1例(T1N0M0)、Ⅱ期4例、Ⅲ期4例。 ③Ki-67、T0P0Ⅱα陽性率分別是82％(18/22)、72.7％(16/22)，Ki-67、T0P0Ⅱα均為陰性的只兩例，且LRP16均非過表達。Ki-67高表達(標記指數(shù)大于50％)與LRP16的過表達具有相關性(P=0.0467)。ER(estrogenrecepte

5、r)和PR(progestinrecepter)陽性均有13例(陽性率59％)。過表達LRP16的有7例ER陽性(7/9)；而非過表達LRP16的患者，ER陽性6例(6/13)，但無顯著差異(P=0.1380)。PR在LRP16過表達組陽性8例(8/9)，非過表達組5例(5/13)，統(tǒng)計差異明顯(P=0.0180)。④細胞粘附實驗，60min內(nèi)M-pLGFPi有約80％已經(jīng)粘附于matrigel膜，而M-pL374細胞不到60％，120

6、min兩種細胞約95％粘附貼壁，30min到90min的差異有統(tǒng)計學意義。細胞爬片劃痕實驗，48h內(nèi)M-pLGFPi細胞可生長鋪滿劃痕，而M-pL374細胞卻不能。Transwell細胞運動穿膜實驗，24hM-pLGFPi細胞比M-pL374細胞多45％左右。細胞侵襲實驗，M-pLGFPi細胞是M-pL374細胞浸潤數(shù)量的2倍以上。FVB小鼠肺表面的轉(zhuǎn)移腫瘤結節(jié)數(shù)：M-pLGFPi細胞21.8±4.45，M-pL374細胞9.6±2.0

7、8。 ⑤M-pL374或M-pL668細胞E-cadherind的mRNA和蛋白水平是M-pLGFPi細胞2～5倍，說明MCF-7細胞LRP16mRNA的表達與E-cadherin的表達呈反相關。而MMPs的表達水平卻沒有差異。 ⑥經(jīng)抗雌激素處理MCF-7細胞后，3h內(nèi)LRP16的表達即顯著下降，12h表達最低，24h恢復到處理前水平。20Gy的劑量照射細胞，3～10h時M-pL374細胞的死亡率高于M-pLGFPi細胞

8、。但是用化療藥5-氟尿嘧啶(5-FU)、大劑量環(huán)磷酰胺(CTX)處理后，M-pLGFPi細胞的死亡敏感性高于M-pL374細胞；化療藥物氨甲喋呤(MTX)、吡柔比星(THP)和順鉑(DDP)卻沒有明顯差異。 結論：①在乳腺癌組織中有約40％的過表達LRP16mRNA，LRP16mRNA的高表達與腫瘤直徑、腋窩淋巴結轉(zhuǎn)移、臨床分期和Ki-67、及ER、PR陽性率密切相關，提示LRP16基因可能在細胞增殖活躍、腫瘤直徑較大并有遠處淋

9、巴轉(zhuǎn)移的患者中表達增強。 ②在體外模型和動物模型上，抑制LRP16的表達可以降低MCF-7細胞運動、粘附和侵襲轉(zhuǎn)移的能力，可以提高細胞間粘附分子E-cardherin表達，提示LRP16是一個受雌激素調(diào)控的、并與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關基因。 ③抗雌激素處理MCF-7細胞后，LRP16mRNA表達水平降低。抑制LRP16基因的表達，可以提高MCF-7細胞對放療的敏感性，卻降低了部分化療藥物對MCF-7細胞殺傷活性，提示LRP