AIF-1調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究.pdf

1、同種異體移植炎癥因子-1(Allograft inflammatory factor-1，AIF-1）是由147個(gè)氨基酸組成的多肽，定位于胞漿，具有鈣離子結(jié)合能力的炎癥支架蛋白，主要由激活的巨噬細(xì)胞表達(dá)和分泌，是一種多功能的細(xì)胞因子，廣泛參與到炎癥和免疫相關(guān)的多種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，包括器官移植、心血管疾病、免疫應(yīng)答、自身免疫性疾病、生殖、腫瘤等疾病過(guò)程。
　　乳腺癌是危害女性健康的主要惡性腫瘤，其復(fù)雜的致病機(jī)理仍然不很清楚。越來(lái)

2、越多的研究表明，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所形成的腫瘤微環(huán)境里，腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞及其分泌的各種細(xì)胞因子廣泛參與到了腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸等方面。實(shí)驗(yàn)室前人在研究炎癥因子AIF-1與乳腺腫瘤的相關(guān)性時(shí)對(duì)乳腺癌臨床樣本分析發(fā)現(xiàn)AIF-1在乳腺導(dǎo)管癌中高表達(dá)，且與腫瘤的大小成正相關(guān)，同時(shí)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)上調(diào)AIF-1的表達(dá)，能夠促進(jìn)乳腺腫瘤的生長(zhǎng)。但是AIF-1調(diào)控乳腺癌增殖的具體分子機(jī)制和所涉及的信號(hào)通路尚不清楚。
　　AD

3、MA28（a disintegrin and metalloproteinase28）是一種解鏈蛋白-金屬蛋白酶，具有蛋白水解酶的功能，有兩種形式：分泌型（ADAM28s）和膜整合型（ADAM28m）。通過(guò)切割多種細(xì)胞因子或其復(fù)合物（vWF、IGFBP-3、CTGF）激活下游信號(hào)通路參與調(diào)控體內(nèi)多種腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。
　　本論文中，首先通過(guò)優(yōu)化rhAIF-1蛋白純化體系，獲得具有生物活性的高純度重組蛋白rhAIF-1，并以MDA-

4、MB-231和MDA-MB-361這兩株乳腺癌細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，直接在培養(yǎng)基中添加rhAIF-1后，發(fā)現(xiàn)rhAIF-1能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖且呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)性。將純化的蛋白rhAIF-1用羅丹明標(biāo)記后與細(xì)胞共孵育一段時(shí)間，共聚焦成像技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)這種外源的蛋白能夠穿過(guò)細(xì)胞膜定位在細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)rhAIF-1在細(xì)胞質(zhì)不均等分布，而且AIF-1雖然能夠聚集在細(xì)胞核的周?chē)?，但并不能進(jìn)入細(xì)胞核，這提示我們可能有其他因子參與到AIF-1調(diào)

5、控細(xì)胞增殖的過(guò)程。為了找到rhAIF-1可能的相互作用蛋白，我們采用蛋白質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)，銀染色后分析發(fā)現(xiàn)在70-100KDa有明顯的特異性條帶，通過(guò)質(zhì)譜分析比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列后，初步確定ADAM28m為rhAIF-1可能的相互作用蛋白。接著，我們?cè)俅瓮ㄟ^(guò)免疫共沉淀技術(shù)結(jié)合免疫印跡對(duì)rhAIF-1與ADAM28m兩者之間的相互作用進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)rhAIF-1能夠免疫沉淀出 ADAM28m。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)ADAM28m的表達(dá)，rhAI