PTAT-XIAP對(duì)AD病模型大鼠行為及神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷的影響.pdf

1、目的:聯(lián)合應(yīng)用Aβ(25-35)和D-半乳糖構(gòu)建AD大鼠模型,研究XIAP在AD大鼠模型神經(jīng)元表達(dá)的變化,以及PTAT-XIAP融合蛋白對(duì)Aβ(25-35)所致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及分子機(jī)制。
　　方法:采用Morris水迷宮法對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行篩選,將逃避潛伏期少于120s的大鼠40只用于實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分為四組,每組10只。Aβ模型組:用腦立體定位儀定位,每側(cè)海馬內(nèi)注射Aβ(25-35)2μL(5g/L);Aβ聯(lián)合D-半乳糖復(fù)合模型組:按

2、Aβ模型組的方法雙側(cè)海馬注射Aβ,在Aβ注射前28天開始,每天腹腔注射D-半乳糖一次(50mg/kg/d),連續(xù)42天;Aβ模型治療組:海馬注射 Aβ(25-35)后第5周開始經(jīng)尾靜脈注射TAT-XIAP融合蛋白(10mg/kg),每周兩次,連續(xù)4周,Aβ模型組尾靜脈注射等量生理鹽水作為藥物注射對(duì)照。對(duì)照組:雙側(cè)海馬注射等量生理鹽水。模型建立后(Aβ注射后)第8周,通過進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察 AD模型大鼠行為及學(xué)習(xí)記憶能力的變化,水迷宮實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)束后取眼球血、海馬和大腦皮質(zhì)。
　　用羥胺法、比色法檢測(cè)大鼠血清總超氧化物歧化酶(TSOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)的含量;用RT-PCR方法檢測(cè) AD模型大鼠海馬及皮質(zhì)半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA、XIAP mRNA的表達(dá)情況;制作腦組織石蠟包埋切片,做HE染色了解 AD大鼠模型神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)變化,做免疫組織化學(xué),研究Caspase-3蛋白在AD大鼠模型神經(jīng)元的表達(dá)。應(yīng)用SP

4、SS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P﹤0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、行為變化:Aβ(25-35)與 D-半乳糖復(fù)合老年性癡呆模型大鼠較正常對(duì)照組大鼠活動(dòng)及打斗減少,而復(fù)合模型組大鼠較 Aβ(25-35)組行為變化更為明顯。2、Morris水迷宮游泳結(jié)果顯示,大鼠搜索并找到安全平臺(tái)的逃避潛伏期及游泳路線各組間有顯著差異。3、HE染色結(jié)果顯示, Aβ模型組、復(fù)合模型組的海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞較對(duì)照組受損嚴(yán)重;復(fù)合模型組

5、大鼠較Aβ(25-35)組海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞受損顯著;PTAT-XIAP治療組的海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞較Aβ模型組受損減輕,細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)相對(duì)正常。4、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組的 Caspase-3蛋白活性較對(duì)照組增強(qiáng);復(fù)合模型組的Caspase-3蛋白活性較Aβ(25-35)組增強(qiáng)顯著;PTAT- XIAP治療組的Caspase-3蛋白活性較Aβ模型組降低。5、RT-PCR結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組與對(duì)照組比較

6、,各模型組大鼠海馬及皮質(zhì)組織XIAP mRNA水平顯著降低,而Caspase-3mRNA水平有明顯的上調(diào);復(fù)合模型組與Aβ模型組比較,海馬及皮質(zhì)組織XIAP mRNA水平顯著降低,而Caspase-3mRNA水平上調(diào)明顯。6、血清TSOD、GSH-PX、MDA檢測(cè)結(jié)果顯示,Aβ模型組、復(fù)合模型組TSOD、GSH-Px活力較對(duì)照組降低,而MDA含量較對(duì)照組提高;復(fù)合模型組的TSOD、GSH-Px活力較Aβ模型組顯著降低,MDA含量較Aβ模

7、型組顯著提高;PTAT- XIAP治療組的 TSOD、GSH-Px活力較Aβ模型組顯著提高,而MDA含量較Aβ模型組顯著降低,差異有顯著性。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功地復(fù)制了Alzheimer病大鼠動(dòng)物模型,且D-半乳糖協(xié)同Aβ(25-35)構(gòu)建的AD復(fù)合模型較單純海馬內(nèi)注射Aβ(25-35)模型能更好地復(fù)制出AD疾病模型;Aβ(25-35)可抑制XIAP,提高Caspase-3 mRNA的表達(dá),活化Caspase-3,可降低AD大鼠