先天性肛門直腸畸形相關基因篩選、表達及多態(tài)性研究.pdf

1、先天性肛門直腸畸形(anorectal malformations，ARMs)是小兒常見的消化道畸形，是世界衛(wèi)生組織常規(guī)監(jiān)測的先天畸形之一，占消化道畸形的1/4，發(fā)病率為1/5000～1/1500。術后有近1/3患兒合并不同程度的排便排尿功能障礙，嚴重影響患兒的生活質量，該病是主要危害我國兒童健康的先天畸形之一。 先天性肛門直腸畸形的病因仍不清楚。目前認為，肛門直腸畸形的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結果。流行病學和動物實驗

2、表明遺傳因素在其發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。最近國外學者利用肛門直腸畸形動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，Shh基因、Gli2基因、Gli3基因、Hox基因、Fgf10基因、Bmp4基因、Wnt5a基因、Eph和ephrin基因的B亞類、Sall基因在消化道末端發(fā)育中發(fā)揮重要作用。當上述基因異常均可導致動物出現(xiàn)肛門閉鎖、肛門開口異位等畸形。 由于肛門直腸畸形發(fā)病機制和病理改變十分復雜，多伴發(fā)其他畸形，遺傳方式和外顯率尚不清楚，涉及的相關基因較多，且

3、可供研究的家系和標本嚴重匱乏，因而對其致病基因的研究進展緩慢，短時間內難以有所突破。人類先天性肛門直腸畸形基因水平的研究國內外報道較少，至今尚無先天性肛門直腸畸形相關基因得到定位。因此從分子水平探索人類先天性肛門直腸畸形的發(fā)病機制具有十分重要的意義。 基因芯片也稱為基因微陣列，是指在有限的載體上加載大量基因信號，可以用有限的標本，在短時間內、條件幾乎一致的情況下，檢測大量基因的表達情況，從而提供全面可靠的基因表達譜。 應

4、用基因表達譜芯片對正常兒及肛門直腸畸形患兒消化道末端進行基因表達分析，篩選出差異表達基因。對差異表達較顯著的基因，擴大樣本量，經過RT-PCR驗證可靠，并且利用醫(yī)學生物信息學分析。實驗觀察所篩選的基因在大鼠胚胎中晚期消化道末端表達的時空性；并且應用免疫組織化學、RT-PCR和蛋白印記研究篩選基因在人類肛門直腸畸形的直腸末端的表達；在此基礎上應用限制性片段多態(tài)性(restriction fragment length polymorphi