厚莢相思離體培養(yǎng)及農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究.pdf

1、本文研究主要從繼代增殖、愈傷組織的誘導(dǎo)和分化和無菌苗的生根壯苗及移栽三個(gè)方面對(duì)厚莢相思的離體培養(yǎng)體系進(jìn)行研究，建立起較好的厚莢相思離體再生體系；從浸染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)厚莢相思農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的影響進(jìn)行了的研究，初步建立了厚莢相思的農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系，為今后的厚莢相思離體培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化研究提供重要的參考依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明： 1、單獨(dú)使用6-BA或KT對(duì)無菌苗的增殖效果不好，改良MS+6-BA0.5 mg/L+K

2、T1.0 mg/L為適宜的繼代增殖培養(yǎng)基，它能夠使無菌苗在以較高的倍數(shù)增殖的同時(shí)保持旺盛的生長(zhǎng)勢(shì)，無菌苗的增殖倍數(shù)達(dá)3.4倍。 2、2，4-D能有效地對(duì)厚莢相思不同的外植體部位誘導(dǎo)出愈傷組織，最高誘導(dǎo)率達(dá)100％；但誘導(dǎo)出的愈傷組織不能誘導(dǎo)分化形成不定芽。 3、6-BA能有效地對(duì)厚莢相思不同的外植體部位誘導(dǎo)出愈傷組織，也能直接在外植體上誘導(dǎo)分化出不定芽。最適宜的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良MS+6-BA2.5,mg/L，不定芽

3、的分化率最高，不同的外植體部位的分化率不同。最高的分化率為羽狀復(fù)葉在此培養(yǎng)基上的直接分化，分化率為55.86％。 4、NAA、IAA、IBA和ABT對(duì)厚莢相思無菌苗的生根均有較好的促進(jìn)作用，MET不適合用于厚莢相思無菌苗的生根誘導(dǎo)。 5、以不同的激素種類及其組合誘導(dǎo)生根所得組培生根苗的移栽成活率不同。以ABT0.5-2.0 mg/L+MET0.5 mg/L誘導(dǎo)生根的組培苗.在黃泥基質(zhì)進(jìn)行移栽的成活率最高，成活率達(dá)86.3

4、9％。 6、不同的移栽基質(zhì)對(duì)生根苗的移栽成活率有不同的影響。以黃泥：育苗介質(zhì)(1：1)進(jìn)行移栽時(shí)移栽苗的成活率較高，成活率為84.36％。 7、厚莢相思外植體對(duì)Km的有較高的基礎(chǔ)抗性，抗性濃度為100～125mg/L。 8、頭孢噻肟鈉濃度為300 mg/L時(shí)可以完全抑制農(nóng)桿菌At05、At06和A208SE的生長(zhǎng)，但外植體保持較高的分化率。 9、不同的菌株、菌液濃度、浸染時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)對(duì)厚莢相思遺傳