薄莢相思和流蘇相思離體培養(yǎng)與人工種子制作.pdf

1、本研究以薄莢相思(Acacia leptocarpa)組培苗為材料，以流蘇相思(A.fimbriata)未成熟種子、成熟種子為外植體，進行2種相思樹的離體培養(yǎng)與人工種子制作研究。主要研究了如下內(nèi)容：①薄莢相思高效離體再生體系的建立；②薄莢相思愈傷組織誘導與再生；③流蘇相思高效離體再生體系的建立：④薄莢相思和流蘇相思人工種子的制作；⑤薄莢相思愈傷組織再生試管苗，人工種子再生試管苗RAPD檢測等。主要研究結(jié)果如下： 1.薄莢相思高效

2、離體再生體系的建立。以薄莢相思無菌試管苗為材料，對薄莢相思增殖、生根壯苗與移栽方面進行研究，結(jié)果表明：薄莢相思在MS+0.3 mg·L-1 BA+0.15 mg·L-1NAA的培養(yǎng)基上增殖效果最好，增殖系數(shù)達到3.75，且玻璃化率也控制在最低水平(18.75％)。薄莢相思生根壯苗適宜的培養(yǎng)基為1/2MS+0.3 mg·L-1NAA+0.5 g·L-1活性炭+100g·L-1椰乳，生根率達到97.56％，苗長勢較好，苗高為4.68。沙子：

3、蛭石：泥炭土(2:1:1)的基質(zhì)最適宜薄莢相思移栽，成活率達到93.33％。 2.薄莢相思愈傷組織的誘導與再生。以薄莢相思組培苗的幼嫩莖段為材料，研究愈傷組織的誘導與再生，結(jié)果表明：MS+0.1～0.15mg·L-1NAA+1.0～2.0 mg·L-1BA的培養(yǎng)基較利于薄莢相思愈傷組織的誘導，出愈率都達到100％，且愈傷組織質(zhì)量較好。愈傷組織在MS+0.1 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1 BA的培養(yǎng)基上再生率達到50％

4、，且再生試管苗長勢較好。 3.預處理對流蘇相思未成熟和成熟種子萌發(fā)的影響。以流蘇相思未成熟和成熟種子為材料，對流蘇相思種子無菌萌發(fā)進行研究，結(jié)果表明：在遠胚端種脊處對未成熟進行切口處理，種子的萌發(fā)率可達100％。單獨使用濃硫酸處理流蘇相思成熟種子15 min，種子的萌發(fā)率可達100％。 4.流蘇相思高效離體再生體系的建立。以流蘇相思種子離體萌發(fā)的試管苗為材料，對流蘇相思增殖、生根以及移栽方面進行研究，結(jié)果表明：MS+0.

5、1 mg·L-1NAA+0.3 mg·L-1IBA+0.3 mg·L-1BA+30 g·L-1的白糖+6 g·L-1的瓊脂較利于薄莢相思增殖培養(yǎng)，增值系數(shù)為3.22。單獨使用0.3 mg·L-1的IBA有利于流蘇相思生根培養(yǎng)，生根率達到了94.17％。沙子：蛭石：泥炭土(2:1:1)的基質(zhì)最適宜流蘇相思移栽，成活率達到90.48％。 5.薄莢相思與流蘇相思人工種子的制作。以薄莢相思和流蘇相思微芽為繁殖體，對兩種相思非體胚人工種子

6、進行研究，結(jié)果表明：采用海藻酸鈣法包埋薄莢相思微芽時，2.0％海藻酸鈉交換20 min最好，萌發(fā)率高到85.93％，轉(zhuǎn)株率為79.69％；對流蘇相思來說，3.0％的海藻酸鈉交換15 min則更有利于人工種子的萌發(fā)，萌發(fā)率為85.71％。中空海藻酸鈣包埋法在兩種相思人工種子萌發(fā)方面都不如海藻酸鈣包埋法。在薄莢相思人工胚乳中添加0.05mg·L-1NAA、0.1 mg·L-1BA使得人工種子的萌發(fā)率提高了2.89％：通過對人工種子在自然條件

7、下失水與復水的研究確立了雙層海藻酸鈣包埋法、涂抹丙三醇、添加聚乙烯吡咯啉酮為較好的保水包埋方法；薄莢相思人工種子適宜的貯藏溫度為4℃：薄莢相思和流蘇相思適宜貯藏的包埋方法為雙層海藻酸鈉法(4℃下貯藏60 d后的萌發(fā)率分別為39.58％、30.3％)；薄莢相思有菌萌發(fā)適宜的包埋方法為MS+0.1％聚乙烯吡咯啉酮+0.05％ALCl3+0.05％MgCl2+0.05％CoCl2+0.2％的多菌靈+0.3％的苯甲酸鈉的處理，適宜的播種基質(zhì)為沙

8、子：蛭石： 泥炭土(2:1:1)，60 d后成苗率達到了25.56％。 6.薄莢相思愈傷再生苗、人工種子再生植株的RAPD檢測。對同一個外植體來源的薄莢相思組培苗、愈傷組織再生試管苗、人工種子再生植株進行RAPD分析。結(jié)果表明：薄莢相思愈傷組織再生苗與組培苗之間的RAPD圖譜存在著遺傳差異，說明愈傷組織再生途徑在遺傳上比較不穩(wěn)定；人工種子再生植株與組培苗之間的RAPD圖譜不存在遺傳差異，說明人工種子具有較高的遺傳穩(wěn)定性。