新霉胺原料藥的制備工藝及質(zhì)量研究.pdf

1、新霉胺是作為氨基糖苷類抗生素藥物新霉素的一種雜質(zhì)成分而被發(fā)現(xiàn)的。新霉胺通過有效抑制血管生成素在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)移來抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤生長，具有良好的抗腫瘤藥用開發(fā)前景。本課題按照新藥研究相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則，研究優(yōu)化新霉胺的合成工藝優(yōu)化，確證了新霉胺的結(jié)構(gòu)，以及進(jìn)行原料藥的質(zhì)量研究，為新霉胺的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　在新霉胺的制備工藝方法研究中，傳統(tǒng)的離子交換樹脂分離法及乙醚析出制備法，產(chǎn)物純度不高，而且不大適用于工

2、業(yè)化生產(chǎn)。本文在原有文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上，以硫酸新霉素的甲醇混懸液與鹽酸溶液為起始原料，利用新霉素的酸催化醇解反應(yīng)機(jī)理，使用旋蒸溶劑法替代乙醚析出法，降低了工藝危險(xiǎn)性，提高了目標(biāo)物純度，適合工業(yè)化生產(chǎn)。本文采用正交試驗(yàn)法分別對該工藝兩步反應(yīng)的影響產(chǎn)物純度和收率的反應(yīng)工藝條件進(jìn)行了研究，得到了新霉胺的最佳制備工藝參數(shù)和方法路線。首先將起始原料硫酸新霉素與甲醇（投料比1g硫酸新霉素:33ml甲醇）混合，滴入濃鹽酸使氯化氫在甲醇液中濃度為1.0m

3、ol/l，反應(yīng)溫度為68℃，攪拌回流10小時(shí)后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸發(fā)60﹪，抽濾得到鹽酸新霉胺黃白色粉末，真空干燥，收率89.1﹪。其次，在鹽酸新霉胺干燥粉末滴入濃氨水（投料比1g鹽酸新霉胺:1ml濃氨水），再滴入甲醇(投料比1g鹽酸新霉胺：120ml甲醇)，反應(yīng)溫度為25℃，通入干燥過量的氨氣，得到新霉胺白色沉淀物，用乙醇-水（9：1，v/v）混合溶劑重結(jié)晶3次，得到新霉胺針狀結(jié)晶，收率約為27.6﹪，新霉胺的終產(chǎn)物純度為99.48

4、％。對自主合成的新霉胺原料藥采用元素分析、熱分析、紫外-可見吸收光譜、紅外光譜、核磁共振譜、質(zhì)譜確證了新霉胺的分子式及結(jié)構(gòu)。
　　為了研究和控制自主合成的新霉胺原料藥的質(zhì)量，本論文主要從性狀、鑒別、檢查、含量測定幾方面對新霉胺原料藥進(jìn)行質(zhì)量研究。按照《中國藥典》2010版和藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則，從外觀、引濕性、溶解度、熔點(diǎn)、比旋度考察藥物的性狀，結(jié)果表明新霉胺原料藥為無臭的白色結(jié)晶性粉末，幾乎無引濕性，易溶于水、極微溶解于于甲醇、

5、乙醇和二甲基亞砜、不溶于丙酮和氯仿，熔點(diǎn)為256±2℃，在此溫度下熔融同時(shí)分解，比旋度為+109.5°。建立了化學(xué)鑒別法、色譜鑒別法、紅外光譜鑒別三種不同原理的鑒別方法?；瘜W(xué)鑒別法的原理是新霉胺的氨基能與茚三酮反應(yīng)而顯色。薄層色譜鑒別法如下：在硅膠H薄層板上，以氯仿-甲醇-25％濃氨水（2:3:2）為展開劑，0.1％茚三酮溶液顯色。高效液相色譜鑒別的色譜條件參照含量測定項(xiàng)下的色譜條件試驗(yàn)，供試品溶液主峰保留時(shí)間與對照品溶液主峰保留時(shí)間應(yīng)

6、保持一致。新霉胺供試品的紅外吸收光譜與對照品的圖譜一致。按照《中國藥典》2010版附錄方法，檢查新霉胺原料藥的一般雜質(zhì)，氯化物含量小于0.05％、硫酸鹽含量小于0.02％、銨鹽含量小于0.02％、重金屬含量小于0.002％、砷鹽含量小于0.001％、熾灼殘?jiān)s為0.1％，干燥失重約為0.60％；新霉胺原料藥水溶液澄清，無色，酸堿度為10.42～10.46；使用HPLC-ELSD法，采用不加校正因子的主成分自身稀釋對照法測定有關(guān)物質(zhì)，雜質(zhì)

7、總含量小于0.5％。建立了高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定新霉胺原料藥含量測定方法。色譜條件：YMC-Hydrosphere C18柱（4.6mm×250mm,5μm），流動(dòng)相:含40mM五氟丙酸25mM甲酸銨的水溶液-甲醇(60：40)，流速:1.0 mL/min;柱溫：35℃；漂移管溫度:100℃；載氣：氮?dú)?；氣體壓力：40psi；增益值：1。參照相關(guān)指導(dǎo)原則，通過了專屬性、系統(tǒng)適用性、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性、定量限和檢測限及線性