簡介：廣東醫(yī)學院碩士學位論文LMP1高及低表達的CNE2Z細胞系單克隆細胞株的建立及生物學特性姓名李青申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師胡新榮20080501LMP1高表達及低表達的CNE2Z細胞系單克隆細胞株的建立及生物學特性摘要【目的】從CNE2Z細胞系中建立LMP1穩(wěn)定的高及低表達的鼻咽癌單克隆細胞株并研究其生物學特性，為后續(xù)采用RNAI方法阻斷LMP1表達來治療鼻咽癌的研究提供更為合適的細胞模型。【方法】采用有限稀釋法，從人低分化鼻咽癌細胞系CNE2Z中分離出若干個單克隆細胞株，通過免疫細胞化學方法檢測各單克隆細胞株LMP1的表達情況，從中篩選出LMP1高表達及低表達的單克隆細胞株，連續(xù)傳代至30代。用光學顯微鏡觀察兩細胞株的形態(tài)學特征，結(jié)晶紫染色法和細胞有絲分裂指數(shù)法檢測兩者的增殖情況，流式細胞儀FCM檢測細胞周期、增殖指數(shù)PI和凋亡率，平板克隆形成實驗檢測克隆形成率，染色體分析法細胞株的核型特點。【結(jié)果】1細胞分離后經(jīng)過5個月的培養(yǎng)，成功獲得CNE2Z系的單克隆細胞株共12株，分別編號為L1L12。2通過免疫細胞化學染色法初步篩選出LMPL較高表達8796％細胞陽性和較低表達120％細胞陽性的兩株細胞為L12和L9，并且兩株細胞的第15代、第22代和第30代的LMPL表達無明顯改變。3光鏡下兩株細胞均呈人低分化鼻咽癌上皮樣細胞形態(tài)，具有和母系CNE2Z細胞相似的形態(tài)特點，但L12比L9的生長狀態(tài)更好。4結(jié)晶紫染色法檢測細胞生長曲線結(jié)果L12各天的A值均高于L9，但差別無統(tǒng)計學意義P叼05。5細胞有絲分裂指數(shù)曲線顯示L12分裂指數(shù)最高達3167‰，而L9最高只有2267‰，且每時段L12的有絲分裂指數(shù)均高于L9。6流式細胞儀檢I貝TJLL2和L9的增殖指數(shù)P1分別為46767％和40667％，凋亡率分別為0366％和2900％，差異均有統(tǒng)計學意義

簡介：分類號分類號R73941R73941學校代碼學校代碼1039210392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼100210100210學號21210031242121003124碩士學位論文下調(diào)下調(diào)PYGO2對U251及U251起源的膠質(zhì)瘤干細胞起源的膠質(zhì)瘤干細胞生物學特性的影響生物學特性的影響EFFECTIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFU251ANDU251DERIVEDTUMORSTEMCELLSAFTERINHIBITIONOFPYGO2EXPRESSION學位類型型醫(yī)學碩士醫(yī)學碩士所在學院院第一臨床第一臨床醫(yī)學院學院申請人姓名申請人姓名李明聰李明聰學科學科、專業(yè)專業(yè)外科學（神外）外科學（神外）導師師王占祥王占祥教授教授研究起止日期研究起止日期20142014年1月20152015年1月答辯委員會主席答辯委員會主席吳喜躍吳喜躍教授教授答辯日期期20152015年5月福建醫(yī)科大學碩士學位論文1目錄目錄附錄附錄1中文摘要中文摘要2ABSTRACT3前言前言5第一部分第一部分PYGO2SIRNA慢病毒載體制備、包裝與滴度檢測慢病毒載體制備、包裝與滴度檢測71．材料711實驗材料712試劑913主要儀器1014主要試劑配制102．方法1121PYGO2SIRNA慢病毒載體制備1122PYGO2SIRNA慢病毒載體包裝與滴度檢測143．結(jié)果1731靶點序列正確克隆1732制備高滴度病毒18第二部分第二部分PYGO2SIRNA對U251細胞增殖與凋亡的影響及機制細胞增殖與凋亡的影響及機制191．材料1911實驗材料19

簡介：背景間充質(zhì)干細胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是一類具有自我更新、多向分化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學特性的多能干細胞，為利用傳統(tǒng)療法治療效果不佳的難治性肺部疾?。ㄈ缏宰枞苑渭膊?、支氣管哮喘、急性肺損傷、肺動脈高壓等）提供了新的治療思路與手段。傳統(tǒng)MSCS來源于骨髓，骨髓源MSCS在骨髓中含量極少＜001％，且隨年齡的增長增殖與分化能力減弱，并不能滿足臨床需要。因而，細胞需要量與供應量間的矛盾成為制約MSCS臨床應用的首要問題。臍帶來源的間充質(zhì)干細胞UMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLS，UCMSCS憑借來源廣泛、含量豐富、獲取容易、不涉及倫理等優(yōu)勢為這一矛盾的解決帶來了新的希望，但傳統(tǒng)制備工藝獲取UCMSCS效率偏低，遠不能達到臍帶中所含UCMSCS的理論值，造成一定程度上生物資源的浪費。對現(xiàn)行的傳統(tǒng)制備工藝進行優(yōu)化，不僅有效節(jié)約資源，為UCMSCS規(guī)?；a(chǎn)提供可能，也為日益增長的臨床需求提供保障。MSCS治療已在肺部疾病的研究中廣泛開展，但MSCS在臨床應用前尚有許多問題需要解決。在MSCS移植治療中一直存在著一個突出的臨床困惑，即應用同一實驗室相同細胞源與細胞數(shù)量的MSCS進行移植時，不同的臨床前處理過程所獲得的治療效果差異很大。據(jù)文獻報道與我們前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)結(jié)束后到臨床使用前MSCS的制備過程、儲存條件等與治療效果有著密切的關系。移植用的MSCS從實驗室培養(yǎng)到臨床輸注，需要經(jīng)過標本采集、細胞培養(yǎng)、細胞傳代、細胞消化、細胞保存、細胞運輸?shù)榷鄠€環(huán)節(jié)，以上各個環(huán)節(jié)均可能會影響MSCS移植前細胞質(zhì)量。在眾多問題中，移植保存條件（包括移植保存介質(zhì)、保存時間與保存溫度）對細胞質(zhì)量的影響最為直接與關鍵，但目前并無相關指南及系統(tǒng)研究。雖然MSCS細胞進行治療時，新鮮分離的MSCS即刻進行移植可獲得最大的移植效果。但事實上，MSCS在臨床應用時并不能實現(xiàn)即刻輸注，運輸、手術等待等因素均需要將MSCS在美國食品藥物管理局FOODDRUGADMINISTRATION，F(xiàn)DA批準的，可被直接輸注于人體的移植介質(zhì)中保存一定時間，但目前尚無關于MSCS移植保存介質(zhì)的相關推薦。各個研究組通常采用O9％氯化鈉注射液、5％葡萄糖注射液、勃脈力A、1％人血白蛋白溶液與5％人血白蛋白溶液作為MSCS移植時的移植保存介質(zhì)，但關于這些移植保存介質(zhì)對保存后MSCS生物學特性的影響并無相關報道。而需特別注意的是，上述臨床常用的移植保存介質(zhì)相對于MSCS正常生長環(huán)境而言，缺乏必要的生存條件及營養(yǎng)成分，這很可能引起MSCS在保存過程中活性的下降，進而影響MSCS治療效果。這一點雖應在MSCS移植時引起高度注意，卻在臨床應用時常常被忽略。因此，評價現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對MSCS生物學特性及臨床治療效果的影響十分必要。因此，本研究綜合以上兩個MSCS臨床應用前的關鍵問題，首先對UCMSCS傳統(tǒng)分離工藝進行改良，旨在建立一種高效、快速獲取UCMSCS的方法，為生物資源的有效利用及UCMSCS規(guī)?；a(chǎn)提供可能。再以UCMSCS為研究對象，評價現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對細胞保存過程中體外生物學特性及體內(nèi)治療效果的影響。在體內(nèi)治療效果評價模型選擇方面，我們選擇了造模時間短且對MSCS治療效果較為肯定的急性肺損傷ACUTELUNGINJURY，ALI作為研究對象。由于實驗結(jié)果提示目前常用的移植保存介質(zhì)對UCMSCS短期保存即可引起細胞活性的快速下降，不能滿足FDA關于細胞移植的最低活性要求。因此，我們對目前臨床常用移植保存介質(zhì)引起UCMSCS活性下降的機制進行初步探討，以期一方面可以通過簡單改造提高現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對UCMSCS的保存效果，另一方面為最適移植保存介質(zhì)的配制提供實驗依據(jù)。目的1根據(jù)臍帶結(jié)構(gòu)特點，選擇相應消化酶，對UCMSCS分離制各工藝進行優(yōu)化，探尋一套高效、快速、大量獲取UCMSCS的分離方法2評價現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對UCMSCS體外生物學特性的影響3建立急性肺損傷模型，觀察UCMSCS對其治療作用，同時評價現(xiàn)行移植保存介質(zhì)引起的活性細胞數(shù)量下降對UCMSCS體內(nèi)治療效果的影響4探討氧化應激在UCMSCS保存過程中對其保存效果的影響5探討能量缺乏在UCMSCS保存過程中對其保存效果的影響。方法1UCMSCS分離制備工藝的優(yōu)化及UCMSCS的培養(yǎng)與鑒定根據(jù)臍帶中束縛UCMSCS的基質(zhì)成分，選擇膠原酶Ⅰ、Ⅲ及透明質(zhì)酸酶、胰蛋白酶、DNA酶作為改良消化液組分，對改良酶消化法與傳統(tǒng)酶消化法（膠原酶Ⅱ與胰蛋白酶）在不同時間收獲的細胞數(shù)量、細胞活性、原代貼壁細胞出現(xiàn)時間、首次傳代時間方面進行比較，同時對兩種方法所獲得的第三代細胞在增殖能力、表面標記、多向分化潛能方面進行鑒定。2現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對UCMSCS體外生物學特性影響的研究將脫離正常培養(yǎng)環(huán)境的UCMSCS重懸保存于臨床常用的移植保存介質(zhì)O9％氯化鈉注射液5％葡萄糖注射液，勃脈力A，1％人血白蛋白溶液和5％人血白蛋白溶液中，在4℃或24℃（室溫）條件下保存24，6H，觀察上述移植保存條件對保存后UCMSCS細胞活性、凋亡死亡率、保存后細胞增殖能力、表面標記、免疫調(diào)節(jié)能力、多向分化潛能及DNA損傷的影響。3移植保存介質(zhì)對UCMSCS體內(nèi)治療效果影響的研究ALI是呼吸系統(tǒng)疾病危重癥之一，MSCS在ALI中治療效果較為肯定，造模容易且周期較短。為了評價臨床常用移植保存介質(zhì)引起活性細胞數(shù)量下降對體內(nèi)效果的影響，我們選擇ALI模型作為觀察對象。在這部分研究中，我們將大鼠隨機分為3組，正常對照組、ALI組與UCMSCS移植組。ALI組和UCMSCS移植組采用經(jīng)氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素建立急性肺損傷模型。成功造模1H后，UCMSCS移植組經(jīng)尾靜脈輸注不同存活細胞數(shù)量的UCMSCS懸液，正常對照組和急性肺損傷組同法予以等量生理鹽水。各組在UCMSCS及生理鹽水輸注后24和72H，觀察肺組織病理改變，檢測病理組織評分、干濕重比、肺組織髓過氧化物酶活性及血漿IL6、IL1O、TNFΑ水平。4UCMSCS保存過程中氧化應激水平變化的觀察現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對UCMSCS在4℃與24℃條件下保存24，6H后測定細胞內(nèi)活性氧及細胞裂解液丙二醛含量，評價氧化應激水平。在各種現(xiàn)行移植保存介質(zhì)中添加不同濃度自由基清除劑N乙酰半胱氨酸NACETYLCYSTEINE，NAC觀察其對UCMSCS活性的影響，從而篩選出最佳添加濃度。此外，進一步觀察添加NAC后的各種移植保存介質(zhì)對保存效果的改善情況。5UCMSCS保存過程中能量缺乏對其保存效果作用的研究現(xiàn)行移植保存介質(zhì)對UCMSCS在4℃與24℃條件下保存24，6H后測定細胞內(nèi)ATP水平及上清乳酸脫氫酶釋放量，評價能量缺乏情況。在各種現(xiàn)行移植保存介質(zhì)中添加腺苷觀察其對UCMSCS保存效果的影響。另外，利用腺苷廣譜受體拮抗劑與轉(zhuǎn)運體抑制劑進一步評價腺苷發(fā)揮作用的途徑。結(jié)果1改良酶消化法較傳統(tǒng)酶消化法相比，臍帶消化后所獲得的總細胞量從258±032X105G提高至178±106X106G原代貼壁細胞出現(xiàn)時間從24H縮短至12H首次傳代時間從95±11天縮短至58±12天改良酶消化法所獲得的P3代UCMSCS在增殖能力、表面標記及多向分化能力方面與傳統(tǒng)酶消化法相似，符合MSCS鑒定標準。2UCMSCS保存于各種移植保存介質(zhì)中，細胞活性與貼壁能力隨時間延長而明顯下降。經(jīng)上述移植保存介質(zhì)保存6H，UCMSCS活性降至83～53％，細胞貼壁率降至72％～38％。并且，經(jīng)過上述保存介質(zhì)保存后的UCMSCS不同程度的出現(xiàn)了DNA損傷。仍可貼壁的細胞增殖能力、表面標記、免疫調(diào)節(jié)及多向分化能力未受明顯影響，仍可貼壁細胞未見明顯DNA損傷。3UCMSCS對ALI有明顯的治療效果。與損傷組相比，UCMSCS治療組可改善肺組織損傷程度、降低損傷評分、肺組織干濕重比及血漿IL6和TNFΑ水平及升高血漿LL1O水平。不同存活細胞數(shù)量的UCMSCS與UCMSCS治療組相比，病理觀察肺組織損傷程度差別不明顯，病理損傷評分、干濕重比無顯著差別，肺組織髓過氧化物酶活性、血漿IL6、IL10和TNFΑ水平均差別顯著。4UCMSCS在所評價的各種移植保存介質(zhì)中保存，細胞內(nèi)活性氧均在保存2H達到最高峰。細胞裂解液丙二醛含量呈時間依賴性增加。不同濃度NAC對UCMSCS活性的影響呈鐘形曲線。5MMNAC為現(xiàn)行移植保存介質(zhì)中最適的添加濃度，添加后可將UCMSCS貼壁率提高8％～1O％。UCMSCS多向分化能力未受明顯影響。5UCMSCS在所評價的各種移植保存介質(zhì)中保存，細胞內(nèi)ATP水平呈時間依賴性下降。添加1MM腺苷可維持UCMSCS在保存過程中細胞內(nèi)ATP水平的穩(wěn)定，減緩細胞活性下降速度。此外，腺苷在保存過程中發(fā)揮細胞保護作用是通過直接升高細胞內(nèi)ATP水平而非受體途徑來實現(xiàn)的。添加腺苷后未明顯影響UCMSCS分化能力。結(jié)論1改良后的酶消化法可明顯提高UCMSCS產(chǎn)量，縮短培養(yǎng)時間，所培養(yǎng)UCMSCS符合鑒定標準2現(xiàn)行的臨床常用移植保存介質(zhì)對UCMSCS保存6H即引起存活細胞數(shù)量的明顯下降且保存后UCMSCS出現(xiàn)不同程度的DNA損傷。這一點，在臨床應用中，應引起特別關注。貼壁能力測定較其他檢測指標簡單、敏感、可靠，可較好評價保存效果3存活細胞數(shù)量的不同影響ALI體內(nèi)治療效果，主要表現(xiàn)在對ALI體內(nèi)炎性介質(zhì)和抗炎介質(zhì)的平衡調(diào)節(jié)能力下降，而炎癥介質(zhì)失衡可能影響預后4臨床常用移植保存介質(zhì)對UCMSCS保存過程中明顯增高細胞內(nèi)活性氧水平，降低氧化應激水平可一定程度上提高保存過程中活性細胞數(shù)量5臨床常用移植保存介質(zhì)對UCMSCS保存過程中明顯降低細胞內(nèi)ATP水平，維持細胞內(nèi)ATP水平可一定程度上改善保存效果。

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簡介：天津醫(yī)科大學碩士學位論文滑膜肉瘤中細胞黏附分子和腫瘤侵襲相關蛋白酶的表達及其生物學意義姓名孫燕申請學位級別碩士專業(yè)病理學指導教師孫保存20040501硬士研究生學位論文2ECD、0一CATENIN、CD44V6表達與臨床病理資料之間的關系①雙相分化型滑膜肉瘸這三個指標的陽性表達率、標記指數(shù)均明顯高于單相梭形細胞為主型滑膜肉瘤均P005；0CATENIN在雙相分化型滑膜肉瘤中的異常表達率明顯低于單相梭形細胞為主型滑膜肉瘤PO01，提示細胞黏附分子的陽性表達主要位于雙相分化型滑膜肉瘤。②CD44V6在原發(fā)組中的陽性表達率明顯高于復發(fā)、轉(zhuǎn)移組P003；ECD和BCATENIN在原發(fā)組中的陽性表達率有高于復發(fā)、轉(zhuǎn)移組的趨勢，但無統(tǒng)計學意義；另外，原發(fā)組的13CATENIN異常表達率明顯低于復發(fā)、轉(zhuǎn)移組P001，可見在復發(fā)、轉(zhuǎn)移性滑膜肉瘤中細胞黏附分子表達下調(diào)并出現(xiàn)異常表達。⑤ECD標記指數(shù)與分級之間存在顯著的負相關關系PO。00，提示ECD隨滑膜肉瘤分化程度降低級別升高而表達下調(diào)6CATENIN標記指數(shù)與分級之間有負相關趨勢，但無統(tǒng)計學意義；CD44V6標記指數(shù)與分級之間無相關性。④ECD標記指數(shù)與分期之間存在顯著的負相關關系P001；而BCATENIN和CD44V6標記指數(shù)與分期無相關性。⑤ECD表達與CYTOKERATIN表達之間存在正相關關系P002；ECD標記指數(shù)、CD44V6標記指數(shù)與CYTOKERATIN標記指數(shù)之間呈正相關關系分別P000，P005，T3CATENIN陽性表達與CYTOKERATIN陽性表達之間無明顯相關關系，提示ECD、CD44V6可能與滑膜肉瘤上皮分化有關。3ECD、PCATCNIN和CD44V6表達與生存率之間的關系滑膜肉瘤中ECD陽性組的生存情況優(yōu)于陰性組PO05，口CATENIN非異常表達組的生存情況優(yōu)于異常表達組PQ00，CD44V6陽性組和陽性組的生存曲線無統(tǒng)計學差別，提示ECD、岱一CATENIN可能與滑膜肉瘤預后有關。2

簡介：學校代碼10571學號2012010126密級公開0ENPK基因?qū)Ω伟┘毎飳W行為的影響THEINFLUENCEOFCENPKGENEONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFHEPATOMACELLS學科門類學科、專業(yè)研究方向年級研究生姓名導師姓名起止日期醫(yī)學內(nèi)科學傳染病學肝癌的基礎與臨床研究二O一二級吳偉剛周伯平教授20129～20156二。一五年六月目錄中文摘要1英文摘要31前言511研究背景512研究目的613研究內(nèi)容62材料與方法621實驗材料622實驗方法93結(jié)果184討論25參考文獻27綜述28綜述參考文獻一33致謝36附錄一縮寫詞中英文對照37附錄二在讀碩士期間的科研情況38

簡介：點擊查看更多p27基因轉(zhuǎn)染對血管平滑肌細胞生物學行為的影響和p27基因啟動子活性的干預性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權(quán)對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學所有0≯一≯．、否則，承擔相應法律責任。，。L一‘’?、J、．一{．，F(xiàn)研究生簽名自瓣帝師簽章錙德基F二級學院領導蓋章≮轟，．≯≯件年專月2了曠一”河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責ILL負。研究生簽名弘舔雨導師簽章藹參霸導師簽章㈣砌，千年≥月刁日中文摘要血管緊張素Ⅱ?qū)w外培養(yǎng)人牙髓細胞生物學特性影響的實驗研究摘要目的通過組織塊酶消化法進行人牙髓細胞的原代培養(yǎng)以獲得大量可供實驗用的牙髓細胞，建立人牙髓細胞的體外研究模型。研究不同濃度的ANGII對體外培養(yǎng)人牙髓細胞增殖效應、細胞周期進程、遷移等一系列生物學活性的影響。方怯1選取符合納入標準的新鮮拔除健康牙均經(jīng)患者知情同意，在無菌條件下拔出牙髓組織，通過組織塊酶消化法進行牙髓細胞的原代培養(yǎng)，顯微鏡下觀察組織塊的解離情況，細胞的形態(tài)學表現(xiàn)和生長狀態(tài)，待細胞生長融合達80％鋪滿瓶底后，用O．25％胰酶消化按11進行細胞首次傳代，以后傳代按13比例進行，取生長狀況良好的第4代人牙髓細胞，胰酶消化后制備成細胞懸液進行細胞爬片，用SABC法進行波形蛋白和角蛋白免疫組化染色鑒定細胞來源。HE染色觀察細胞的組織學形態(tài)。2取生長狀態(tài)良好的第4代人牙髓細胞，0．25％胰酶消化，用含15％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液重懸細胞，調(diào)整細胞懸液的濃度為2X104個／ML，接種于96孔板，每孔加液量200“L。隨機分為五個實驗組和一個對照組，每組復五孔。恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24H，棄孔內(nèi)原培養(yǎng)液，PBS緩沖液沖洗3遍。在相應實驗組的孔內(nèi)加入200止含5％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液配制的ANGII溶液10’9MOL／L、10一MOL／L、10。7MOL／L、10氣NOⅥ。、10≤MOL／L，對照組加入等量的含5％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液。放入培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，于24H、48H、72H各取出一塊96孔板，加入CCK8溶液，370C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2H，酶標儀上450NM波長處測各孔吸光度值OD值。3取生長狀態(tài)良好的第4代人牙髓細胞，用0．25％的胰蛋白酶消化后，1000R／MIN離,C．,5MIN，棄上清液，加完全培養(yǎng)液重懸細胞，調(diào)整細胞懸液的濃度為2104個／ML，接種在25ML的培養(yǎng)瓶中，每瓶加液量3ML。隨機分為兩組，每組復三瓶，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24H。棄瓶內(nèi)原培養(yǎng)液，PBS緩沖液沖洗3遍，實驗組相應的瓶內(nèi)加入3ML含5％胎牛血清DMEM培養(yǎng)液配制的

簡介：碩士學位論文炎癥刺激對人牙齦間充質(zhì)干細胞和炎癥刺激對人牙齦間充質(zhì)干細胞和牙周膜干細胞生物學性能的影響牙周膜干細胞生物學性能的影響楊昊培養(yǎng)類別全日制學位類型專業(yè)學位一級學科專業(yè)類口腔醫(yī)學二級學科專業(yè)口腔醫(yī)學研究方向牙周組織再生指導教師陳發(fā)明副教授（副主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位口腔醫(yī)院牙周黏膜病科二O一三年五月分類號R7814UDC61631密級公開第四軍醫(yī)大學THEFOURTHMILITARYMEDICALUNIVERSITY第四軍醫(yī)大學碩士學位論文目錄縮略語表1中文摘要3英文摘要6前言10文獻回顧11一、組織工程技術在牙周再生領域的應用11二、牙組織工程相關干細胞12三、炎癥因子17正文19第一部分人牙齦間充質(zhì)干細胞和牙周膜干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定191實驗材料192實驗方法213實驗結(jié)果264討論32第二部分炎癥刺激對人牙齦間充質(zhì)干細胞和牙周膜干細胞生物學性能的影響341實驗材料342實驗方法353實驗結(jié)果394討論46小結(jié)48參考文獻50臨床病例59附圖61個人簡歷和研究成果63致謝64

簡介：論文題目置帕墨素慰皇盤鯉黃囊疽細胞生物堂在為髭喧及扭熊隨進撒答辯委員會主席廑達星熬援浙江太堂隘屆』L童醫(yī)隨答辯委員會成員王夏迭塾援濕刖醫(yī)型太堂基礎醫(yī)堂院塞王副教援濕劃醫(yī)科太堂隘屆箍三醫(yī)陵中英文縮略詞對照表英文縮寫英文名稱中文名稱AFPALPHAFETOPROTEIN甲胎蛋白FCMFITCRAPAMTOR4EBPLP70S6KDMSOODSDSNSPBSPIPMSFTBST6CTSTYSTNSPBSPITRISNMFLOWCYTOMETRYFLUORESCEINISOTHIOCYANATERAPAMYCIL3MAMMALIANTARGETOFRAPAMYCIN4EBINDINGPROTEIN1RIBOSOMALPROTEINS6KINASE70KDADIMETHYLSULFOXIDEOPTICALDENSITYSODIUMDODECYISULFATENORMALSALINESOLUTIONPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPROPIDIUMIODIDEPHENYLMETHANESULFONYLFLUORIDETRISBUFFEREDSALINETESTICULARGERMCELLTUMORSTESTICULARYOLKSACTUMORNORMALSALINESOLUTIONPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPROPIDIUMIODIDETRIHYDROXYMETHYLAMINOMETHANENMOL／L流式細胞術異硫氰酸熒光素雷帕霉素哺乳動物雷帕霉素靶蛋白真核細胞始動因子4E結(jié)合蛋白核糖體蛋白S6激酶，70道爾頓二甲基亞砜光密度值十二烷基硫酸鈉生理鹽水磷酸鹽緩沖液碘化丙啶苯甲基磺酰氟三乙醇胺緩沖鹽溶液睪丸生殖細胞腫瘤睪丸卵黃囊瘤生理鹽水磷酸鹽緩沖液碘化丙啶三羥甲基氨基甲烷納摩爾每升

簡介：脊髓壓迫、脊柱外傷、脊髓組織供血動脈疾患、外科手術中胸腹相關動脈的阻斷、損傷或循環(huán)血容量的急劇減少等因素均可引起脊髓缺血，從而導致脊髓損傷SPINALCDINJURYSCI。當涉及的相關缺血因素去除后，脊髓組織雖可恢復灌注，但功能卻得不到改觀，反而進一步加重先前由于缺血造成的損害，形成脊髓缺血再灌注損傷SPINALCDISCHEMIAREPERFUSIONINJURYSCII。長期以來，脊髓缺血再灌注損傷后的高致殘率和高死亡率嚴重影響著患者的生存質(zhì)量。如何恢復損傷后神經(jīng)元功能并改善局部微環(huán)境已成為國內(nèi)外研究的熱點。由于造成SCII的病理生理機制復雜，治療難度高，目前尚未有一個高效的治療方法，對其治療仍處于探索階段。目前SCII的研究已深入到基因和細胞水平，基因治療、細胞移植是全新的治療途徑，近年來發(fā)展迅速，主要針對神經(jīng)功能的修復和微環(huán)境的改善，技術關鍵是選擇有效的目的基因和載體細胞，這些治療方式有望在治療脊髓缺血再灌注損傷領域中取得突破。研究表明，低氧誘導因子1Α（HYPOXIAINDUCIBLEFACT1ΑHIF1?。┰跈C體低氧應答中可大量產(chǎn)生，并處于關鍵環(huán)節(jié)，并與DNA特定序列結(jié)合而調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄及翻譯，在缺氧后細胞凋亡及微循環(huán)的改善等方面起重要作用。骨髓間充質(zhì)干細胞（BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS）在神經(jīng)元的增殖、分化和遷移方面起促進作用，有助損傷神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能的恢復。因此我們設想通過合理有效的方式把兩者結(jié)合起來。企望采取細胞移植與基因治療相結(jié)合技術，發(fā)揮HIF1Α基因調(diào)節(jié)缺氧應答和BMSCS細胞移植的雙重作用，為SCII救治探索新的策略。實驗一大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及HIF1Α基因轉(zhuǎn)染后的相關檢測目的分離并培養(yǎng)BMSCS，并完成HIF1Α基因轉(zhuǎn)染后的相關檢測。方法選擇全骨髓貼壁篩選法分離、培養(yǎng)BMSCS，采用倒置相差顯微鏡、流式細胞儀、誘導成骨、成脂肪細胞的方法鑒定所培養(yǎng)細胞；利用電穿孔技術將前期構(gòu)建成功的帶有熒光標記的基因表達載體PCDNA31HIF1Α轉(zhuǎn)染入BMSCS，熒光顯微鏡觀察是否成功轉(zhuǎn)染。結(jié)果培養(yǎng)的細胞經(jīng)過一系列鑒定符合骨髓間充質(zhì)干細胞特點，BMSCS經(jīng)過轉(zhuǎn)染后，細胞核內(nèi)出現(xiàn)紅色熒光顆粒。結(jié)論全骨髓貼壁篩選法可成功分離并獲取實驗所需BMSCS，電穿孔方法可將HIF1Α基因表達載體轉(zhuǎn)染入BMSCS。實驗二經(jīng)基因修飾后低氧條件下BMSCS生物學特性的實驗研究目的探討低氧條件下經(jīng)基因修飾后BMSCS生物學特性。方法建立物理性低氧環(huán)境，將基因成功轉(zhuǎn)染后的BMSCS、單純BMSCS、僅轉(zhuǎn)染PCDNA31質(zhì)粒的BMSCS在該環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)8天，分別命名為BMSCSHIF1Α組，BMSCS組，BMSCSPCDNA31組。采用WESTERNBLOT檢測HIF1Α基因蛋白水平表達；流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡；MTT法測定細胞生長曲線，觀察細胞生物學特性。結(jié)果WESTERNBLOT顯示BMSCSHIF1Α組的蛋白表達量明顯高于其余兩組，BMSCSPCDNA31、BMSCS組的蛋白表達較低，兩兩比較沒有明顯差異，流式細胞儀檢測表明BMSCSHIF1Α組細胞增殖指數(shù)（PI）高于其余兩組凋亡率明顯小于其他組MTT結(jié)果提示相同條件下，BMSCSHIF1Α組細胞生長狀態(tài)明顯好于其他兩組。結(jié)論大鼠BMSCS經(jīng)HIF1Α基因轉(zhuǎn)染后，低氧環(huán)境下生物學特性在一定程度上得到增強。實驗三COCL2誘導的化學性低氧對基因修飾后BMSCS生物學特性的影響目的探討氯化鈷（COCL2）在模擬化學性缺氧中對基因修飾后BMSCS生物學特性的影響。方法將化學性低氧誘導劑COCL2加入到基因轉(zhuǎn)染后的BMSCS、單純BMSCS細胞培養(yǎng)基中模擬低氧環(huán)境，保持終濃度為150ΜM，連續(xù)觀察8天。（細胞分組記為BMSCSHIF1ΑCOCL2組、BMSCSCOCL2組）。并同物理性缺氧誘導的細胞（記為對照組）進行比較，（細胞分組為BMSCSHIF1Α組、BMSCS組）。WESTERNBLOT測定細胞內(nèi)HIF1Α基因的蛋白表達；流式細胞儀觀察各組細胞周期以及凋亡；MTT法繪制細胞生長曲線，觀察細胞增殖。結(jié)果與BMSCSHIF1Α組比較，BMSCSHIF1ΑCOCL2組細胞內(nèi)HIF1Α表達上調(diào)，G2期以及S期細胞比例及增值指數(shù)PI升高，G1期細胞比例降低，細胞數(shù)目增多；細胞凋亡率降低；與BMSCS組比較，BMSCSCOCL2組細胞表現(xiàn)出上述相同趨勢。結(jié)論氯化鈷（COCL2）在模擬化學性缺氧中對基因修飾后BMSCS生物學活性有一定的增強作用。

簡介：分類號R7336密級公開蔚J匆Z鱸單位代碼10427學號2011010437碩士學位論文乳酸脫氫酶抑制劑GALLOFLAVIN，對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學特性影響及其機制的研究研究生姓名韓曉運導師姓名學科領域所在學院申請學位級別盛修貴研究員腫瘤學羹南量蘭醫(yī)學與生命科學學院山東省醫(yī)學科學院’。。一’臨床醫(yī)學碩士答辯時間2014年5月導師介紹研究生導師和課題指導小組介紹盛修貴，男，1967年5月生，中共黨員。腫瘤學博士，主任醫(yī)師、研究員，博士研究生導師。山東省腫瘤醫(yī)院副院長兼婦科主任，中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會主任委員、山東省抗癌協(xié)會常務副理事長兼秘書長、山東省抗癌協(xié)會婦科腫瘤分會主任委員、山東省醫(yī)學會婦產(chǎn)科專業(yè)委員會副主任委員、山東省醫(yī)師學會婦產(chǎn)科專業(yè)委員會副主任委員，中華腫瘤防治雜志副主編、中華腫瘤雜志編委、中華婦產(chǎn)科雜志編委、現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展編委、國際婦產(chǎn)科雜志中文版編委、腫瘤學雜志編委等。山東省衛(wèi)生系統(tǒng)中青年重點科技人才。從事婦科腫瘤臨床、科研和教學第一線工作25年。近5年承擔科研課題為首承擔的省級以上項目有1糖代謝異常促進肥胖型卵巢癌發(fā)生發(fā)展的機制研究及靶向治療探討；2早期子宮頸癌前哨淋巴結(jié)系列研究的臨床應用；3一體化后裝治療系統(tǒng)的開發(fā)及在婦科腫瘤中的臨床應用研究。多次獲得國家及省級科技進步獎。課題指導小組成員盛修貴，男，1967年5月生，研究員，山東省腫瘤醫(yī)院，從事婦科腫瘤研究和臨床工作。周春曉，男，1963年10月生，助理教授，美國北卡羅萊那大學婦科腫瘤實驗室，從事婦科腫瘤基礎研究工作。宋現(xiàn)讓，男，1965年10月出生，研究員，山東省腫瘤醫(yī)院，主要從事腫瘤基礎研究與檢驗診斷。劉乃富，男，1972年2月出生，副主任醫(yī)師，山東省腫瘤醫(yī)院，主要從事婦科腫瘤研究和臨床工作。袁令芹，女，1966年9月出生，副主任醫(yī)師，山東省腫瘤醫(yī)院，從事婦科腫瘤基礎研究和臨床工作。杜雪蓮，女，1977年2月出生，副主任醫(yī)師，山東省腫瘤醫(yī)院，主要從事婦科腫瘤的診斷與綜合治療。

簡介：中山大學碩士學位論文調(diào)控MIR141，MIR205表達對宮頸癌細胞株生物學特性影響的實驗研究姓名孫小麗申請學位級別碩士專業(yè)婦科腫瘤指導教師林仲秋20090525中山大學調(diào)控MIR141，MIR205表達對宮頸癌細胞株生物學特性影響的實驗研究PCR法分別檢測轉(zhuǎn)染后SIHA細胞中MIR141表達和HELA細胞中MIR205表達。3、轉(zhuǎn)染后MTT法檢測細胞生長。4、平板克隆形成實驗檢測細胞增殖。5、TRANSWELL小室法檢測轉(zhuǎn)染后細胞遷移能力。6、流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞凋亡率。7、流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細胞周期分布。結(jié)果L、SIHA細胞轉(zhuǎn)染ANTIMIR141后，MIR141表達下降為068倍。細胞克隆形成率及轉(zhuǎn)染后24、48、72小時各組活細胞數(shù)與陰性對照組比較無差異。實驗組GO／GL期細胞比例較陰性對照組降低7244％士217％，7975％士323％，G2／M期細胞比例升高1141％士136％，643％士118％，兩組細胞的凋亡率、細胞遷移能力無明顯差異。2、HELA細胞轉(zhuǎn)染MIR205PRECURSOR后，MIR205表達增高30615倍。細胞克隆形成率增加，為陰性對照組的125倍。但轉(zhuǎn)染后24、48、72小時，各組間活細胞數(shù)無差異。實驗組S期細胞比例較對陰性照組降低1917％士200％，2338％士156％，GDGL期比例升高6438％Q214％，5863％士271％，而細胞凋亡率、細胞遷移能力無明顯改變。結(jié)論1、成功地在宮頸癌細胞株中調(diào)控MIRNAS的表達。2、在宮頸鱗癌中下調(diào)RNIR141表達后，細胞周期分布改變，未觀察到細胞生長、增殖、凋亡和遷移能力的變化。3、在宮頸腺癌中上調(diào)MIR。205表達后，細胞增殖能力和細胞周期分布發(fā)生改變，未觀察到細胞生長、凋亡和遷移能力的變化。關鍵詞宮頸癌MIR141；MIR205；生物學；調(diào)控Ⅱ

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