簡介：1研究目的和背景種子細(xì)胞是組織工程化組織、器官構(gòu)建干細(xì)胞移植的基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。心血管領(lǐng)域目前研究應(yīng)用的種子細(xì)胞以胚胎干細(xì)胞ESC和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSC為主但前者誘導(dǎo)分化條件復(fù)雜、易于成瘤后者屬于成體干細(xì)胞的范疇壽命有限、活力較差；且作為自體來源的細(xì)胞BMSC必須在發(fā)現(xiàn)病例后才可進(jìn)行繁瑣的體外細(xì)胞培養(yǎng)、擴(kuò)增其時效性和有限的生長潛能限制了臨床的廣泛應(yīng)用。此外已有的研究均表明上述兩種細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心血管細(xì)胞的比率較低因此都不是理想的種子細(xì)胞。尋找適宜的種子細(xì)胞是開展心血管組織工程、和干細(xì)胞移植治療心血管疾患必須解決的首要問題。從理論上推測胚胎心臟干祖細(xì)胞發(fā)育時序上更接近心臟的組織細(xì)胞且具有較強(qiáng)的分化增殖能力因而誘導(dǎo)分化為心臟的組織細(xì)胞更容易。近來研究較多的心臟干祖細(xì)胞主要有三種來源分別是早期胚胎心臟或心管、成體心臟、ESC所形成類胚體中的心臟原基。后兩者來源的心臟干祖細(xì)胞其分離培養(yǎng)和生物學(xué)特性的研究已有較多報道而從早期胚胎心管分離培養(yǎng)的心臟干祖細(xì)胞生物學(xué)特性的研究目前則尚未見報道。從心臟發(fā)育的角度粗略講早期胚胎心管中存在心肌源性祖細(xì)胞和心內(nèi)膜源性的祖細(xì)胞前者構(gòu)成了心臟的絕大部分最終形成各種類型的心肌細(xì)胞和傳導(dǎo)細(xì)胞；后者在心臟中只占很小一部分最終分化形成心內(nèi)膜、瓣膜、隔膜等組織。本課題擬對胚胎心臟祖細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究以便為心臟組織工程、細(xì)胞移植治療心肌梗死、生物心臟起搏器的構(gòu)建等研究尋找一種理想的新型種子細(xì)胞。2材料和方法21人胚胎心臟祖細(xì)胞的生物學(xué)特性211細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定2111胚胎心臟祖細(xì)胞的培養(yǎng)取4周胚齡的藥物流產(chǎn)人胚胎在解剖顯微鏡下分離心管將心管在025％胰酶中消化分散為單細(xì)胞懸液；上述得到的單細(xì)胞懸液離心并去上清使用含15％胎牛血清、0375％碳酸氫鈉、10UGLVEGF、106ULLIF、106UL青霉素、106UL鏈霉素、2MMOLL谷安酰氨的高糖DMEM培養(yǎng)液重懸；將重懸的單細(xì)胞懸液接種于六孔細(xì)胞培養(yǎng)板或者十二孔細(xì)胞培養(yǎng)板細(xì)胞長滿后進(jìn)行傳代擴(kuò)增。2112胚胎心臟祖細(xì)胞的鑒定人胚胎心臟祖細(xì)胞的鑒定包括①形態(tài)學(xué)的觀察；②采用免疫熒光的方法檢測NKX25、IS11分子標(biāo)志物的表達(dá)③采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測平滑肌肌動蛋白、細(xì)胞角蛋白、VⅢ因子CKIT的表達(dá)；④RTPCR檢測GATA4心臟特異轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。212胚胎心臟祖細(xì)胞的生物學(xué)特性2121胚胎心臟祖細(xì)胞的基本生物學(xué)特性通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；通過生長曲線和分裂指數(shù)曲線的繪制檢測細(xì)胞的生長特性。2122胚胎心臟祖細(xì)胞的分化特性21221向心肌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化利用5氮胞苷誘導(dǎo)第15代胚胎心臟祖細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化分別在誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)后10天、15天三個時相RTPCR檢測心肌源性特異基因GATA4、ΑMHC的表達(dá)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的方法檢測心肌肌動蛋白的表達(dá)倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變WESTERNBLOT的方法檢測誘導(dǎo)前后細(xì)胞心肌肌動蛋白的表達(dá)。21222向平滑肌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化與家犬血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)胚胎心臟祖細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞方向分化對誘導(dǎo)前后的細(xì)胞免疫熒光檢測ΑSMA和MHCSM的表達(dá)WESTEMBLOT的方法檢測誘導(dǎo)前后細(xì)胞ΑSMA的表達(dá)。22胚胎心臟祖細(xì)胞向心臟起搏細(xì)胞的誘導(dǎo)分化221大鼠胚胎心臟祖細(xì)胞的培養(yǎng)250G雌雄SD大鼠配對合籠喂養(yǎng)第二天觀察糞盤是否有陰栓確定雌鼠受孕開始時間；于受孕后105天斷頸處死母鼠取出子宮在無菌PBS中洗滌用鑷子撕開子宮和羊膜分離得到心管；將心管在025％胰酶中消化分散為單細(xì)胞懸液后采用與人胚胎心臟祖細(xì)胞相同的操作接種、培養(yǎng)、傳代擴(kuò)增大鼠胚胎心臟祖細(xì)胞。222大鼠胚胎心臟祖細(xì)胞的鑒定大鼠胚胎心臟祖細(xì)胞的鑒定包括①形態(tài)學(xué)的觀察鑒定；②采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細(xì)胞NKX25分子標(biāo)志物的表達(dá)；③采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細(xì)胞OCT4分子標(biāo)志物的表達(dá)；④采用免疫熒光的方法檢測原代、第5代、第20代細(xì)胞階段特異性胚胎抗原SSEA4分子的表達(dá)。223大鼠胚胎心臟祖細(xì)胞向起搏細(xì)胞的誘導(dǎo)分化胚胎心臟祖細(xì)胞接種培養(yǎng)兩天后更換培養(yǎng)基為含有內(nèi)皮素1的DMEM送孵箱進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)三天后換回正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的搏動情況并錄像。誘導(dǎo)前后的細(xì)胞通過免疫熒光的方法檢測HCN2、HCN4、CONNEXIN43、CONNEXIN45、心肌肌動蛋白、NKX25、OCT4的表達(dá)通過HE染色和電鏡觀察檢測其形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變通過膜片鉗技術(shù)檢測其電生理情況。3結(jié)果在本研究中胚胎心臟祖細(xì)胞經(jīng)內(nèi)皮素1誘導(dǎo)五天后光鏡下直接觀察或HE染色觀察其基本形狀與誘導(dǎo)前相比無明顯改變；但透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)證實(shí)誘導(dǎo)后細(xì)胞有了較為明顯的分化；證據(jù)之一是誘導(dǎo)后出現(xiàn)較誘導(dǎo)前為多的簡單細(xì)胞器結(jié)構(gòu)包括少量的線粒體、尚不發(fā)達(dá)的高爾基體和較不完整的肌絲樣結(jié)構(gòu)證據(jù)之二是誘導(dǎo)后細(xì)胞之間可見有連接樣的結(jié)構(gòu)增多。這一超微結(jié)構(gòu)上的變化在免疫熒光染色上得到了進(jìn)一步的證實(shí)心肌肌動蛋白細(xì)肌絲的主要組成成分的染色在誘導(dǎo)前后由陰性變?yōu)榱岁栃钥p隙連接蛋白43和45在誘導(dǎo)后也出現(xiàn)了多量的表達(dá)。肌動蛋白的表達(dá)或肌絲樣結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)是誘導(dǎo)后細(xì)胞搏動更為明顯的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)而縫隙連接蛋白的表達(dá)則表明誘導(dǎo)后細(xì)胞之間更易建立肌電偶聯(lián)?？傊珓忧闆r和形態(tài)結(jié)構(gòu)上的變化為誘導(dǎo)后細(xì)胞已經(jīng)向起搏細(xì)胞方向發(fā)生轉(zhuǎn)變給出了初步的證據(jù)。起搏細(xì)胞之所以具有自動興奮性是由于在動作電位四期激活產(chǎn)生一種稱為IF的內(nèi)向離子流導(dǎo)致了細(xì)胞的自動除極。編碼IF離子流的通道分子稱為超級化激活的環(huán)核苷酸門控的離子通道HYPERPOLARIZATIONACTIVATEDCYCLICNUCLEOTIDEGATEDCHANNELHCN由于HCN與心臟起搏的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)關(guān)系密切所以被稱為起搏基因。在本研究中我們通過免疫熒光染色和RTPCR檢測了誘導(dǎo)后細(xì)胞起搏基因HCN2和HCN4的表達(dá)結(jié)果證明了誘導(dǎo)后細(xì)胞存在上述兩種起搏離子通道具備了起搏細(xì)胞產(chǎn)生自動興奮的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。進(jìn)一步我們利用單細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測誘導(dǎo)后胚胎心臟祖細(xì)胞的電生理情況顯示誘導(dǎo)后細(xì)胞出現(xiàn)了連續(xù)的自發(fā)性動作電位竇房結(jié)樣起搏動作電位和心房肌樣起搏動作電位這一結(jié)果最終證明了誘導(dǎo)后細(xì)胞可以自發(fā)產(chǎn)生起搏動作電位自動興奮性具備了起搏細(xì)胞最基本的電生理特征。結(jié)論人早期胚胎心管來源的心臟祖細(xì)胞具有幼稚型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和旺盛的生長特性誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞和平滑肌樣細(xì)胞的誘導(dǎo)率高、誘導(dǎo)分化條件簡單是心血管組織工程和干細(xì)胞移植研究較理想的種子細(xì)胞。大鼠胚胎心管來源的胚胎心臟祖細(xì)胞易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增利用內(nèi)皮素1可將其誘導(dǎo)成為具有穩(wěn)定起搏活性的心臟起搏細(xì)胞是生物心臟起搏器構(gòu)建較理想的細(xì)胞來源。

簡介：研究生個人簡介姓名顏丙超性別男年齡29學(xué)習(xí)及工作經(jīng)歷時間單位及職務(wù)200907畢業(yè)于濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)，獲醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué)位201009～201307徐州醫(yī)學(xué)院攻讀神經(jīng)外科碩士學(xué)位研究生期間臨床、科研成果及獲獎情況時間項(xiàng)目2010年通過國家執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格考試20112012年臨床培訓(xùn)12個月，通過CET62013年研究生期間修滿32學(xué)分，核心期刊發(fā)表文章一篇徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文縮略詞心BC口CCK8CDNADDH20DMSOFBSHMGA2HSMABNCODOEPLAGEPBSPMSFSDSTEM匣DWB縮略詞表ABBREVIATIONALKALINEPHOSPHATASE5BROMO4CHLORO3INDOLYLPHOSPHATECELLCOUNTINGKIT8COMPLEMENTARYDNADOUBLEDISTILLEDWATERDIMETHYLSULFOXIDEFATALBOVINESERUMM曲MOBILITYGROUPA2HORSESERUM中文全稱堿性磷酸酶5溴_4氯3吲哚磷酸細(xì)胞增殖毒性檢測法互補(bǔ)脫氧核糖核苷酸雙蒸水二甲基亞砜胎牛血清高遷移族率蛋白A2馬血清MONOELONALANTIBODY單克隆抗體NITROCELLULOSEOPTICALDENSITYOVEREXPRESSIONPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFERSALINEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDESODIUMDODECYLSULFATETETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEWESTERNBLOTTING醋酸纖維素光密度值過表達(dá)聚丙烯酰胺凝膠電泳磷酸鹽生理鹽水緩沖液苯甲基磺酰氟十二烷基硫酸鈉四甲基乙二胺免疫印跡

簡介：中山大學(xué)博士后學(xué)位論文血中不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞生物學(xué)特性及其基因差異表達(dá)姓名張剛慶申請學(xué)位級別博士后專業(yè)外科學(xué)普通外科指導(dǎo)教師陳規(guī)劃20080510中文摘要只能間接推斷血液中存在轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，不能進(jìn)一步研究判斷血液中轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。免疫磁珠IMMUNOMAGNETICBEAD，IMB技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新的免疫學(xué)技術(shù)，其基本原理在于用單克隆抗體與磁性微珠結(jié)合，在磁場作用下，使與免疫磁珠特異性相連的細(xì)胞分離開來，簡便易行、分離純度高、同時保留細(xì)胞活性的優(yōu)點(diǎn)。利用免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)檢測腫瘤患者外周血液或骨髓中的轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，它能在100萬個單核細(xì)胞中分離檢測出一個腫瘤細(xì)胞，其敏感性與RTPCR方法相同，假陽性率卻比RTPCT明顯降低。TAUBERT等成功地從乳腺癌患者外周血中分離出轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞，ZIGEUNER在分離LO‘個單位單核細(xì)胞中懸浮一個腫瘤細(xì)胞的研究中，對免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)與其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行了比較，后者的檢出率為23％，而免疫磁珠技術(shù)的檢出率可達(dá)933％，同時分離純化后的癌細(xì)胞活性高，達(dá)85％以上。WAGUNI等運(yùn)用該技術(shù)富集血中肝癌細(xì)胞，結(jié)果顯示，可在每2ML血中檢測出110個肝癌細(xì)胞，在55例肝細(xì)胞癌患者中，29例53％可檢測出循環(huán)肝癌。血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離富集后進(jìn)行培養(yǎng)，可使其異質(zhì)性減至最低，轉(zhuǎn)移能力表達(dá)穩(wěn)定，有利于比較研究循環(huán)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性，深入了解腫瘤血液轉(zhuǎn)移的機(jī)制。隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其相關(guān)的基因表達(dá)及蛋白質(zhì)功能同樣處于量變和質(zhì)變的動態(tài)過程中。自1995年第一塊CDNA芯片問世以來，它已成為研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中基因開關(guān)及表達(dá)程度是最重要的、強(qiáng)有力的工具。OKABE等采用包含23040個基因的芯片分析的20例原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達(dá)差異，證明原發(fā)性肝癌和癌旁組織基因表達(dá)譜具有較大差異，并篩選出多個上調(diào)和下調(diào)基因?；蛐酒夹g(shù)對在整體上了解在癌轉(zhuǎn)移狀態(tài)下瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜的變化、分析不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株的基因表達(dá)譜差異，發(fā)現(xiàn)更多與肝癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因和特異信息通路、探索肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制方面，具有十分重要的意義。如能研究發(fā)現(xiàn)從血液中分離克隆培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞株的基因表達(dá)差異，有利于深入了解肝癌血液播撤的機(jī)制。目前國內(nèi)外對實(shí)體瘤患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究，多局限于利用細(xì)II

簡介：目的1探討補(bǔ)腎中藥骨靈丸血清的最優(yōu)提取方法；2觀察補(bǔ)腎中藥血清對體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞骨吸收功能的影響；3探討補(bǔ)腎中藥血清對破骨細(xì)胞RANK基因表達(dá)水平的影響；4探討補(bǔ)腎中藥對成骨破骨細(xì)胞共育體系中護(hù)骨素護(hù)骨素配體的蛋白及基因表達(dá)水平的影響及與破骨細(xì)胞活性的相關(guān)性。方法1按處方配制補(bǔ)腎中藥，傳統(tǒng)方法熬煮中藥，水浴鍋濃縮至252ML，SD大鼠36只隨機(jī)分成空白組生理鹽水2ML、低劑量組生藥177G次、中劑量組生藥354G次、高劑量組生藥708G次，每日早晚2次灌胃，共3天，第4日末次灌胃后1小時采血，離心，吸取血清，大部分血清56℃，30分鐘滅活保存，部分用于干預(yù)成骨細(xì)胞試驗(yàn)；取SD胎鼠的頭蓋骨分離培養(yǎng)獲得純化的成骨細(xì)胞，使用MTT比色分析方法在酶標(biāo)儀上測試滅活前后血清干預(yù)的成骨細(xì)胞增殖情況，記錄每組A570值；對硝基苯磷酸鹽法PNPP測各組堿性磷酸酶活性，使用SPSS100軟件包的配對T檢驗(yàn)比較滅活前后血清對成骨細(xì)胞生物學(xué)作用的差別2取SD大鼠的胎鼠四肢骨分離培養(yǎng)破骨細(xì)胞OC，差異貼壁法獲得純度在95％以上的破骨細(xì)胞，分成低、中、高、空白對照四組，每組6孔，施加相應(yīng)濃度的補(bǔ)腎中藥血清，對照組采用無中藥血清，培養(yǎng)24小時，酶動力學(xué)法測定培養(yǎng)上清中抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP的活性，甲苯胺藍(lán)染色骨吸收陷窩并在圖像分析儀下測定骨吸收陷窩的面積和數(shù)目，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析比較補(bǔ)腎中藥血清對破骨細(xì)胞生物學(xué)作用的差別；3取SD大鼠的胎鼠四肢骨分離培養(yǎng)破骨細(xì)胞OC，差異貼壁法獲得純度在95％以上的破骨細(xì)胞，分成低、中、高、空白及陽性對照5組，每組6孔，施加相應(yīng)濃度的補(bǔ)腎中藥血清，空白組采用無中藥血清，陽性對照組使用17Β雌二醇，在培養(yǎng)的破骨細(xì)胞中施加不同濃度的補(bǔ)腎中藥血清培養(yǎng)24小時，收集破骨細(xì)胞使用TRIZOL方法提取總RNA，使用DNAMAN軟件設(shè)計引物序列，RTPCR方法擴(kuò)增目標(biāo)片段，使用HEMA凝膠圖像分析系統(tǒng)檢測條帶OD值，比較各組目標(biāo)帶與內(nèi)參的比值，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析反應(yīng)破骨細(xì)胞中RANKMRNA表達(dá)水平的變化；4取SD大鼠的胎鼠顱骨與四肢骨分別分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，利用復(fù)合培養(yǎng)系統(tǒng)使二者生活在同一環(huán)境中，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化；在復(fù)合培養(yǎng)體系中施加不同濃度的補(bǔ)腎中藥血清，并與空白組及雌激素組對照，培養(yǎng)24小時后收集成骨細(xì)胞，采用WESTERNBLOT方法及RTPCR雜交法測定OB細(xì)胞中OPGOPGL蛋白的改變及基因表達(dá)的變化，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析反應(yīng)成骨細(xì)胞中OPGOPGL蛋白及MRNA表達(dá)水平的變化；酶動力學(xué)法測定培養(yǎng)上清中抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP的活性，利用甲苯胺藍(lán)對骨吸收陷窩染色并在圖像分析儀下測定骨吸收陷窩的面積和數(shù)目，使用SPSS100軟件包的單因素方差分析比較補(bǔ)腎中藥血清對共培體系中破骨細(xì)胞生物學(xué)作用的差別，最后使用SPSS100統(tǒng)計分析軟件對OPGOPGL的比值與破骨細(xì)胞的活性關(guān)系進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果1補(bǔ)腎中藥在末次灌胃后1小時達(dá)高峰，滅活前補(bǔ)腎中藥低、中、高濃度組及空白對照組A570增殖率％的值分別為0809±0261、0876±0274、0851±0299、0711±0248滅活后各組A570增殖率％的值分別為0669±0179、0751±0211、0725±0209、0454±0154，各組成骨細(xì)胞的增殖率、ALP的活性在滅活前后的血清干預(yù)下有顯著性差異，P＜001，但滅活血清與對照組比較仍有明顯作用，P＜001；2單獨(dú)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞在加入補(bǔ)腎中藥血清后培養(yǎng)上清中TRAP活力低、中、高與空白對照組分別是136±014UL、129±018UL、131±024UL、175±014UL補(bǔ)腎中藥組與對照組相比P＜001，補(bǔ)腎中藥組間比較P＞005；骨吸收陷窩的面積低、中、高與空白對照組分別是29323±19045ΜM2、33540±20233ΜM2、36570±18947ΜM2、49525±21037ΜM2補(bǔ)腎中藥組與對照組相比，P＜001，補(bǔ)腎中藥組間比較P＞005，骨吸收陷窩數(shù)目分別是1140±150個、1250±180個、1440±242個、1840±232個補(bǔ)腎中藥組與對照組相比，P＜001，補(bǔ)腎中藥組間比較P＞005；3RTPCR顯示，補(bǔ)腎中藥血清能下調(diào)破骨細(xì)胞中RANKMRNA的表達(dá)，低濃度的補(bǔ)腎中藥血清即可降低RANKMRNA表達(dá)，但無明顯劑量相關(guān)性補(bǔ)腎中藥組與對照組相比，P值均小于005，補(bǔ)腎中藥組間比較P＞005，E2下調(diào)RANKMRNA的表達(dá)更為明顯P＜001；4復(fù)合培養(yǎng)體系中WESTERNBLOTTING及RTPCR顯示補(bǔ)腎中藥血清能上調(diào)成骨細(xì)胞中OPG蛋白及OPGMRNA的表達(dá)，下調(diào)細(xì)胞中OPGL蛋白及OPGLMRNA的表達(dá)，低濃度即有效與對照組吸光度相比P＜005，不同中藥濃度組無明顯差異P＞005；E2上調(diào)成骨細(xì)胞中OPG蛋白及OPGMRNA降低OPGL蛋白及OPGLMRNA的表達(dá)最為明顯與對照組吸光度相比P＜001；補(bǔ)腎中藥血清能降低復(fù)合培養(yǎng)體系破骨細(xì)胞的TRAP的活力，減少骨磨片陷窩吸收面積補(bǔ)腎中藥組與對照組相比，P值均小于005，但亦無明顯劑量相關(guān)性，不同中藥濃度組無明顯差異P＞005，E2下調(diào)TRAP活性及減少骨磨片陷窩吸收面積更為明顯P＜001；統(tǒng)計學(xué)處理提示TRAP活力與骨磨片陷窩吸收面積服從正相關(guān)線性分布；骨磨片陷窩吸收面積和OPGOPGL服從負(fù)相關(guān)線性分布。結(jié)論1補(bǔ)腎中藥在末次灌胃后1小時采血此時的血清含藥物有效成分最高，滅活后血清能滿足試驗(yàn)要求；2補(bǔ)腎中藥血清可抑制體外單獨(dú)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞的骨吸收功能3補(bǔ)腎中藥血清可抑制破骨細(xì)胞的RANK基因表達(dá)水平；4補(bǔ)腎中藥血清可抑制體外共育體系中的破骨細(xì)胞的骨吸收功能OPGOPGL是調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞活性的關(guān)鍵性因素，OPGOPGL的比值與破骨細(xì)胞的活性呈負(fù)相關(guān)。

簡介：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文細(xì)胞色素P450芳香化酶在大鼠多囊卵巢中的表達(dá)及其生物學(xué)意義姓名劉秀蘭申請學(xué)位級別碩士專業(yè)人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師閆曉紅博曉真20060501OABSTRACT嘲娌T主VETBS敦茹Y如REATIONSH呈P熟瞪ENTHEEXPRE胬ONLEVDOFAROMATASECY∞D(zhuǎn)蚴EF1450王U50AROMMFATO、阻RYANDMEC如舡LISMOFP枷TICO、，ARIANSYND】伽P∞S，METHO凼ES協(xié)B在出啦ANIMALMO甜OFP。LY螄ICOV撕ANSYND姍EBYTHE。。MBIN矗婦METHODPR。G鍘噬黔誠THCHO奶MC舭地DOT∞PMHO黜H℃1TOMEASURETHEIEVELSOFSENⅡNTESTOSTERONET，HNE此INGH。肌ONELH，F(xiàn)OUICIESTIRNUIATINGHORN∞NE磷辯璐INGANAUT。MATEDJMMJM。ASS韙YCH獻(xiàn)證衄LINESC∞TTEC函IQUE2TOTCLOR地A醚SEQUENCETHECYPL9GENEFRAGRNENTFROMRATOVARY，3TODETECTTHEEXPRESSIONLE詘OFCYPL9MRNAMRATOVARYBYS∞_LIQUANTITATIVEREVER8ETRANSCRIPTASEP。LYMERASECHAINRE粒TION雌一融4STREPT捌DINPER戚D85ES一功WASP酞燃EDTODETEET氐鑷一PRESSIONLEVELOFP450AROMINRATOVARYRESILLTS王THELEVELSOFSER吼TANDK料WEREHIGHERINP妁SG矧JPAS∞MPAREDWITHM。DELCONTR0IGROUP；2THEANALYSISOFCYPL9GENES幻WEDTHATTHESEQU髑CESOFDI、JAFRA酗ENTWERE研NOLOGY塒TH∞RRESPONDINGSEQUENCESPUBLISHEDINGTNEBANK3THERELATIVEE坤RESSIONDEGREEOFP450蚴MRNA吣O138O072AILDO759O236INOVARYOP∞SGR。UPANDN。RTNAJ∞NTR。LGR。UPRE，S∞NSIBIY，SIGILIF遷ANT矗FFE溜L(fēng)CE、張SFOUNDBE七WE獻(xiàn)P∞SGROUP姐DN∞M丑LGROUP；4RES山TSOF醅MUNOC蛾STRYMEASURINGTHE耵EYVALUEOF鯽ULOSECEUSINFOUICLEBYJD801IFNAGEAN由SISSYST踟，礎(chǔ)PARING壬XSGROUPWITHNONNALGROUP詆THTT鸛T，THEEXPRESSIONOFP450黝WASDECREASESPO05INPRIRR施ALANDP血NARYANDMATUREFONIC【EOFPO。6拳OUP；№SI鯛I6∞NTDI玨嘲CE雌HMD惻捌FER甑T曲羽叩MENT渤靜OFD琶蹴齜一豳婦煳鯽，H刪向喇矗嘲耐槲瞧卿D№洫曲唧ANDSEC洳銣IDE哪蛐‰咖妯DEPO05C0眥L磷I她THE唧眺KVDOFP450AR僦MRNAW黔BWTHANNOMALGROUP；P4508IOM觸IN吣BWERMPRIIR埽礙AILD刪拄URE蛐DEOF溯G捌PT婦測。URRESDTS盤OWEDTHATHA即ENINGF琰SH越RELATIONSHIP、RIDLEXPRESSIONOFP450AR。MD。CREASINGM州州AANDPRDTEN聊WORDSPOLYCYS如偽撕ANSYN融NE；A煳ATASE回TOCHROMEP450；RTP隙；I勰疆賦H燃痘建RY

簡介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得壺量盤堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫沙FJ年。其7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名手寫槲期沙侔6月I蘆日導(dǎo)師簽名手寫私簽字日期加B年6月’摘要5流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組胃癌細(xì)胞SGC7901凋亡率分別為795008％、901003％、3698013％，STIML沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組細(xì)胞凋亡率明顯增加均P005。6流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示各組胃癌細(xì)胞SGC7901培養(yǎng)48H后，空白對照組和陰性對照組胃癌細(xì)胞周期分布情況G0／G1期為3563107％、S期為5130071％、G2／M期為1314081％；G0／G1期為3746067％、S期為5089087％、G2／M期為1164030％；沉默組胃癌細(xì)胞G0／G1期為6238O91％、S期為2953071％、G2／M期為809065％；沉默組胃癌細(xì)胞大多數(shù)處于G0／G1周期，而S期和G2／M期的水平明顯下降，其SPF值、PI值明顯小于空白對照組及陰性對照組均P005。7體外遷移實(shí)驗(yàn)TRANSWELL實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)分別為4467153、41OO202、1450229，沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少P005。提示沉默STIML可明顯抑制胃癌細(xì)胞SGC7901體外遷移能力。8體外侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空白對照組、陰性對照組、STIML沉默組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)分別為2633153、2167252、733123，沉默組與空白對照組及陰性對照組比較，沉默組穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)明顯減少PO05。提示沉默STIML可明顯抑制胃癌細(xì)胞SGC7901體外侵襲能力。結(jié)論STIML基因抑制后，胃癌細(xì)胞鈣內(nèi)流減少，增殖能力減緩、細(xì)胞周期阻滯于G0／G1期、凋亡率增加、遷移、侵襲能力減弱。表明STIML是調(diào)控胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲過程中的重要蛋白。關(guān)鍵詞STIML；胃癌細(xì)胞；腫瘤生物學(xué)行為SOCC鈣離子

簡介：點(diǎn)擊查看更多胰島素對糖尿病大鼠下頜骨成骨細(xì)胞體外生物學(xué)活性的影響.pdf精彩內(nèi)容。

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簡介：石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文LICADHERIN基因表達(dá)水平的變化對胃癌細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響研究姓名奚海林申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師牛建華201004012ABSTRACTOBJECTIVESTHEINCIDENCERATEOFGASTRICCARCINOMAISALSOINTHEFIRSTPOSITIONAMONGMANLIGNANTTUMORSINOURCOUNTRY,ANDTHEMORTALITYISABOUTONEQUARTEROFGLOBALONESMOSTPATIENTSHAVEBEENPROGRESSINGTOADVANCEDSTAGEATTHETIMEOFDIAGNOSISTHERATEOFRADICALRESECTIONISLOWER,TREATMENTSINCLUDINGRADIATION,CHEMOTHERAPYORPREOPERATIVECHEMOTHERAPYHAVELITTLEINFUENCE,EVENEXERTGREATSIDEEFFECTTOPATIENTSANDATPRESENTHAVINGNONORMATIVECHEMOTHERAPY,THEREFORETHEGENETHERAPYHASBEENINTRODUCEDANDDISPLAYEDITSPROMISINGTWOIMPORTANTPROPERTIESOFCANCERSAREABLETODEREGULATECELLPROLIFERATIONANDSUPPRESSCELLDEATHLIVERINTESTINECADHERINCDH17ASONEPROTEINWHICHHAVEINTIMATECORRELATIONWITHINVASIONANDMETASTASISOFTUMOR,WHICHASWELLASHIGHLYEXPRESSESININTESTINALMUCOSATHISSTUDYEXTRACTEDANDIDENTIFIEDCDH17/PCDNA31EUKARYOTICEXPRESSINGPLASMID,ANDTRANSFECTEDITINTOBGC826CELLBYLIPOFECTMINE2000,THEPURPOSEISOBSERVINGWHETHERTHEEXTRANEOUSCDH17GENECANTRANSFECTBGC826EFFECTIVELYASAANTITUMORFACTORITPROVIDESTHEEXPERIMENTALFOUNDATIONFORFURTHERSTUDYINGTHATTRANSFECTIONOFTHISPLASMIDALONEORCOMBINEDWITHOTHERPLASMIDSTOBLOCKTHESTOMACHNEOPLASMSINDIFFERENTSTEPSMETHOD1TRANSIENTTRANSFECTIONANDEXPRESSIONOFGASTRICTUMORCELLSGASTRICCARCINOMABGC826CELLSWERETRANSFECTEDWITHLIPOFECTAMINE2000PROTEINOFCELLSWEREEXTRACTEDATTHETIMEOF48HAFTERTRANFECTED,THEMETHODOFWESTERNBLOTWASUSEDTOIDENTIFYTHEEXPRESSIONOFCDH172THEASSAYSAFTERTRANSIENTTRANSFECTIONINVITROTHEASSAYSWEREDIVIDEDINTOTHREEGROUPS,THECELLSTRANSFECTEDBYCDH17/PCDNA31WASEXPERIMENTALGROUPS,THECELLSTRANSFECTEDBYPCDNA31WASBLANKCONTROLANDBGC826CELLSUNTRANSFECTEDWASNEGATIVECONTROLCELLMATRIGELINVASIONASSAY,SCRATCHINGASSAYWEREUSEDTOSTUDYTHEEFFECTSOFCDH17GENERESULTS1TRANSIENTEXPRESSIONOFCDH17AFTERTRANSFECTEDAFTERTRANSFETED48H,PROTEINOFCDH17WASDETECTEDWITHWESTERNBLOT2ALLASSAYSSHOWEDTHATTHEINVASIVENESSANDMIGRATIONOFBGC826CELLSTRANSFECTEDBYCDH17/PCDNA31WERELESSTHANTHOSEOFBGC826CELLSTRANSFECTEDBYPCDNA31ANDUNTRANSFECTEDCELLSCONCLUSIONCDH17HASBEENSUCCESSFULLYTRANSFECTED,THEYCANBEEXPRESSEDINTHEGASTRICCARCINOMACELLSALLASSAYSSUGGESTTHATCDH17CANAFFECTBIOLOGICALCHARACTERSOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINEBGC826THEYMAYDEPRESSTHEINVASIONANDMETASTASISOFGASTRICCARCINOMACELLLOCALCANCERVIOLATIONSORDISTANTMETASTASISOFTENLEADTOTREATMENTFAILUREOFTHEMAINREASONS,THEINCIDENCEOFGASTRICCANCERONTHEMOLECULARMECHANISMOFTHEBIOLOGICALBEHAVIORANDTHESEARCHFORNEWANTITRANSFERMEASURESISCRUCIALKEYWORDSCDH17TRANSFECTIONGASTRICNEOPLASMINVASION

簡介：研究背景與目的吸煙與環(huán)境氡是誘發(fā)人類肺癌的兩大重要因素，單獨(dú)吸煙和氡誘發(fā)肺癌的研究廣泛而深入，但兩者聯(lián)合作用及其機(jī)制研究報道很少。本研究觀察Q粒子和煙草代表性致癌物4甲基亞硝胺13吡啶基1丁酮NNK聯(lián)合作用體外培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制，并探索兩者作用順序的差異，為環(huán)境氡與吸煙的聯(lián)合危害評價提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法永生化的人支氣管上皮細(xì)胞BEP2D分為正常對照組NC、單純Α粒子照射組Q、單純NNK染毒組NNK、NNK100GG／M1染毒后Q粒子照射組NNKΑ和Α粒子照射后NNK100TG／M1染毒組QNNK。觀察Α粒子和NNK誘發(fā)的細(xì)胞存活率、細(xì)胞內(nèi)活性氧水平、膜通透性損傷、DNA損傷、HPRT基因突變、微核形成、細(xì)胞轉(zhuǎn)化及染色體和相關(guān)基因表達(dá)。結(jié)果1Q粒子和NNK聯(lián)合作用對BEP2D細(xì)胞存活的影響具有明顯的協(xié)同作用，并與兩者作用順序有關(guān)。2Q粒子和NNK聯(lián)合作用誘發(fā)BEP2D細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的活性氧水平、細(xì)胞膜損傷、DNA損傷、HPRT基因突變以及細(xì)胞微核形成率等多種生物學(xué)效應(yīng)具有明顯的協(xié)同作用，但兩者作用不同順序間沒有觀察到有明顯差異。3Q粒子015GY和NNK100TG／M1單獨(dú)或聯(lián)合染毒的細(xì)胞長期培養(yǎng)，NNK、NNKA、ANNK三組細(xì)胞具有惡性轉(zhuǎn)化特征，轉(zhuǎn)化細(xì)胞的染色體出現(xiàn)數(shù)目和結(jié)構(gòu)的異常，HPRT基因突變率和轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白PCNA、P53表達(dá)顯著增高。結(jié)論證實(shí)Α粒子和NNK對細(xì)胞損傷具有協(xié)同作用，觀察到A粒子和NNK不同作用順序?qū)?xì)胞存活效應(yīng)有明顯差異；反應(yīng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程的部分指標(biāo)觀察到A粒子和NNK的聯(lián)合作用及兩者作用順序的差異。

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文低頻超聲聯(lián)合微泡劑對血管內(nèi)皮細(xì)胞和肝癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)姓名房良華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（腫瘤學(xué)）指導(dǎo)教師姜藻20060606東南大學(xué)碩士學(xué)位論文為8331459U／ML，肝癌細(xì)胞為1107331175U／ML，與對照組比較差異顯著儼OOD；SOD活力明顯降低血管內(nèi)皮細(xì)胞為69524281U／ML，肝癌細(xì)胞為58874191U／ML，與對照組比較差異顯著PO05。5血管內(nèi)皮細(xì)胞和肝癌細(xì)胞超聲聯(lián)合微泡劑組NFRB蛋白灰度值明顯高于其他各組，與對照組比較差異有顯著性尸0OD。與單純超聲組比較差異顯著伊005，與單純微泡荊組比較妒001。結(jié)論L超聲聯(lián)合微泡劑具有明顯的抑制離體血管內(nèi)皮細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)其損傷和凋亡的作用；2超聲聯(lián)合微泡劑所致的細(xì)胞外活性氧的活力增高，SOD活力的降低，NFKB的表達(dá)增高等與細(xì)胞的損傷和凋亡作用相關(guān)。關(guān)鍵詞低頻超聲；微泡劑；活性氧自由基；EVC304；SMMC一7721Ⅱ

簡介：神經(jīng)營養(yǎng)因子是一類促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活、生長、分化的多肽分子，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化和損傷修復(fù)過程中起著非常重要的作用。NEURITIN是一種新近發(fā)現(xiàn)的與神經(jīng)可塑性相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)因子。研究表明NEURITIN在神經(jīng)再生的領(lǐng)域中具有較廣泛的生物學(xué)活性，可促進(jìn)神經(jīng)突起的快速生長和分支，并參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元突觸活動，因而對多種因素引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷后軸突和突起的生長具有潛在的治療與預(yù)防作用。由于NEURITIN體內(nèi)含量低，提取與純化困難，難以滿足研究和臨床治療需要，因此以基因工程的方法制備重組人的NEURITIN將是獲取NEURITIN有效的手段。本論文就NEURITIN在原核表達(dá)、純化及生物學(xué)活性測定等進(jìn)行了研究，這為臨床上用基因治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)是以NEURITINCDNA為模板，PCR擴(kuò)增NEURITIN基因后，克隆于原核表達(dá)載體PET32A，分別用NOCI和NOTI雙酶切鑒定。鑒定正確的重組子PET32NEURITIN轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，測序正確的陽性轉(zhuǎn)化子用IPTG誘導(dǎo)后獲得了融合NEURITIN蛋白；SDSPAGE分析表明大腸桿菌表達(dá)菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，可表達(dá)分子量為30KD的融合NEURITIN蛋白質(zhì)并且在4小時時表達(dá)量最大；WESTEMBLOT檢測表明該表達(dá)產(chǎn)物具有NEURITIN免疫活性；經(jīng)NINTA純化系統(tǒng)及尿素分步透析，表達(dá)蛋白得到了有效的純化和復(fù)性。最后，對重組NEURITIN的活性進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明與陰性和空白組對照后，大腸桿菌表達(dá)的融合的NEURITIN在體外能促進(jìn)培養(yǎng)的PC12細(xì)胞和雞胚背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)突起的生長并能延長它們的存活時間。本研究首次報道了重組人NEURITIN在大腸桿菌的表達(dá)以及在體外實(shí)驗(yàn)中促進(jìn)雞胚神經(jīng)節(jié)和PC12細(xì)胞突起的生長，這項(xiàng)工作為神經(jīng)營養(yǎng)因子NEURITIN在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療的應(yīng)用中奠定了良好的基礎(chǔ)。

簡介：學(xué)位論文不同HER2水平的人乳腺癌BT474細(xì)胞內(nèi)MIRNAS表達(dá)譜及相關(guān)MIRNAS對癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響MICRNASEXPRESSIONPROFILEINHUMANBREASTCANCERBT474CELLSOFDIFFERENTHER2LEVELSEFFECTOFMICRNASONTUMCELLBIOLOGICALBEHAVI朱桂璐朱桂璐指導(dǎo)教師姓名吳強(qiáng)教授安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室吳正升副教授安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室申請學(xué)位級別碩士專業(yè)名稱病理學(xué)與病理生理學(xué)提交論文日期20150310論文答辯日期20150508學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)201506答辯委員會主席孟剛評閱人2015年05月安徽醫(yī)科大學(xué)ANHUIMEDICALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文不同HER2水平的人乳腺癌BT474細(xì)胞內(nèi)MIRNAS表達(dá)譜及相關(guān)MIRNAS對癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響MICRNASEXPRESSIONPROFILEINHUMANBREASTCANCERBT474CELLSWITHDIFFERENTLEVELOFHER2EFFECTOFMICRNASONTUMCELLBIOLOGICALBEHAVI作者姓名作者姓名朱桂璐朱桂璐指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師吳強(qiáng)教授吳正升吳正升副教授副教授學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向研究方向乳腺腫瘤病理乳腺腫瘤病理論文工作論文工作時間時間2013年04月至月至2015年05月

簡介：目的探討慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長因子Β3（TGFΒ3）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP1）聯(lián)合感染對體外培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細(xì)胞的影響，從而最終實(shí)現(xiàn)延緩甚至逆轉(zhuǎn)椎間盤退變的目的。方法單層培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細(xì)胞，采用綠色熒光蛋白標(biāo)記慢病毒（GV287EGFP）評價其對髓核細(xì)胞的感染效率。應(yīng)用構(gòu)建的TGFΒ3P2ATIMP1慢病毒載體感染髓核細(xì)胞，在倒置纖維鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，通過REALTIMEQPCR技術(shù)檢測感染后TGFΒ3、TIMP1、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的MRNA表達(dá)量，通過WESTERNBLOT技術(shù)檢測感染后Ⅱ型膠原和蛋白多糖含量，最終評價應(yīng)用攜帶TGFΒ3P2ATIMP1的慢病毒載體體外感染人退變椎間盤髓核細(xì)胞后對其細(xì)胞外基質(zhì)代謝的影響。結(jié)果感染復(fù)數(shù)（MOI）為60時可獲較滿意感染效率。REALTIMEQPCR示目的基因感染組的TGFΒ3、TIMP1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖MRNA表達(dá)量均明顯高于空病毒感染組及空白對照組（F＝16350～74378，Q2010～10620，P結(jié)論慢病毒載體介導(dǎo)的TGFΒ3和TIMP1雙基因聯(lián)合感染人椎間盤髓核細(xì)胞可長時間穩(wěn)定表達(dá)，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，促進(jìn)蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成，并最終改善髓核細(xì)胞外基質(zhì)的代謝。

簡介：分類號R651密級科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼10062學(xué)號2011602261學(xué)科門類醫(yī)學(xué)又坪鼉科矢號TLA棚麓■纛DH搿瞧VN霸鑲礴目N愕碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目敲低亮氨酰TRNA合成酶表達(dá)對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響的體外研究TITLEASTUDYABOUTTHEEFFECTOFDOWNREGULATIONOFLEUCYITRNASYNTHETASEONMALIGNANTGLIOMACELLBIOLOGICALBEHAVIOR／NVITRO一級學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科外科學(xué)神經(jīng)外科論文作者譚富強(qiáng)指導(dǎo)教師鐘躍教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要膠質(zhì)瘤是臨床上最常見的原發(fā)性惡性腦腫瘤，其中多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤GLIOBLASTOMAMULTIFORME，GBM是最常見、惡性程度最高的膠質(zhì)瘤。雖然在過去幾年膠質(zhì)瘤的研究取得了很大進(jìn)步，但惡性膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后仍然很差。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是一種多基因和多信號通路異常的疾病，目前對其發(fā)病機(jī)制仍不是很清楚。近來研究發(fā)現(xiàn)，亮氨酰TRNA合成酶1EUCYLTRNASYNTHETASE，LARS除其催化亮氨酰TRNA合成的經(jīng)典功能外，還具有非經(jīng)典功能，是腫瘤相關(guān)基因。但LARS在膠質(zhì)瘤中的研究鮮有報道。MICRORNASMIRS是一類小的非編碼RNA，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達(dá)。研究表明MIRS在多種腫瘤包括膠質(zhì)瘤中異常表達(dá)，扮演癌基因或抑癌基因的作用。目前尚不清楚LARS是否與MIRS存在關(guān)系。本課題研究的主要目的是探討LARS基因在惡性膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響以及MIR451與LARS基因表達(dá)關(guān)系，為揭開膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制、開拓新的治療策略和靶點(diǎn)提供線索。第一部分應(yīng)用熒光實(shí)時定量PCRREALTIMEPCR和蛋白印跡法WESTERNBLOT檢測了9個惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和1例正常腦組織的LARS表達(dá)量，結(jié)果顯示LARS在9個惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和L例正常腦組織均有表達(dá)且在9個惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)量明顯高于正常腦組織P005。由此，我們得出結(jié)論LARS在人腦膠質(zhì)瘤中過表達(dá)，可能參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進(jìn)展。第二部分利用LARS小干擾RNALARSSIR技術(shù)探討了敲低LARS表達(dá)對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和SNBL9生物學(xué)行為的影響及可能的機(jī)制。首先，利用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT實(shí)驗(yàn)方法檢測了轉(zhuǎn)染LARSSIR后LARS基因的表達(dá)變化，結(jié)果顯示LARSSIR可以有效敲低LARS表達(dá)。緊接著敲低LARS表達(dá)后，利用MTT法分析了細(xì)胞增殖活性，細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析了細(xì)胞群體依賴性和增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)分析了細(xì)胞周期分布，劃痕、TRANSWELL實(shí)驗(yàn)