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簡(jiǎn)介:能干細(xì)胞IPSCS物學(xué)特性研究論文作者簽名亟墮}指導(dǎo)教師簽名&型論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5答辯委員會(huì)主席黃扭教援濫江太堂醫(yī)堂院附屬簋二醫(yī)院委員I匭匿塞值F敦援塹塹友堂醫(yī)堂瞳基礎(chǔ)匡堂委員2掛童生F教授逝江盍堂醫(yī)堂院阻屆』L童匡院2委員3直強(qiáng)蘭£教授塹江省主匡瞳2委員4錢差垡圭住醫(yī)』匝逝塹省厶民匡瞳2委員5■期一日一辯一STUDYONTHEGENERATIONANDCHARACTEHZAFIONOFPEDIATRICLEUKEMIAPATIENTSSPECIFICIPSCSLIKECELLLINE⑧舢也”’5酊卿觚坐幽絲8“P。州80?!?519NATURE皇立THESISREVIEWER1THESISREVIEWER2THESISREVIEWER3THESISREVIEWER4THESISREVIEWER5CHAIR坐墊墮墜堡塑墅型型型竺型型竺型COMMITTEEOFORALDEFEACECOMMITTEEMAN1HO∞GWD呻?yún)sG毋蜥B商CM觸甜丑呵衄G”型塑蘭塑11竺些型COMMITTEEMAN2.LPD啪GDLIM虹呱1BCO曲面SHOSPITALOF213EJIANGUMV商WSCHOOLOFMEDICINECOMMITTEEMAN3“乜GAOMK瓤刪婭GNDVM瀏OF抽刪。刪CBI嘣EMCDIC批H呷岫COMMITTEEMAN4坐型塑型墼型型坐型COMMITTEEMAN5DATEOFORALDEFENCEMAY30“2012..........................................................................................一
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簡(jiǎn)介:目的骨創(chuàng)傷后的再生能力提示有能夠自我復(fù)制并能多向分化的干細(xì)胞存在。一般認(rèn)為,干細(xì)胞存在于骨、骨膜、骨髓及其他由中胚層發(fā)育來的組織中,在出生后仍然有少量干細(xì)胞繼續(xù)存在,在機(jī)體損傷時(shí)參與組織的修復(fù)。組織工程的基礎(chǔ)是有功能的細(xì)胞,骨組織工程需要大量的成骨細(xì)胞。十多年來,國內(nèi)外學(xué)者和臨床工作者對(duì)各種組織的細(xì)胞成骨能力進(jìn)行了大量的研究,提出了定向性骨祖細(xì)胞、誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞和基質(zhì)干細(xì)胞的概念。目前,在研究中使用的作為種子細(xì)胞的成骨細(xì)胞來源有以下幾種骨、軟骨、骨外膜、骨髓和骨外組織。越來越多的證據(jù)表明,骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BMSCS有多分化潛能,移植人體內(nèi)后可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、血管內(nèi)皮、肝臟、神經(jīng)等多種細(xì)胞。能夠作為組織工程中不同細(xì)胞的來源在體內(nèi)正常循環(huán)中能夠分布于多種組織和器官,可以用于細(xì)胞和基因治療。而且取材、分離培養(yǎng)、擴(kuò)增以及導(dǎo)入外源基因也相對(duì)方便。BMSC。通過抽取自體骨髓得到,對(duì)病人造成創(chuàng)傷較少,且無免疫排斥反應(yīng)。因此,BMSCS在實(shí)際應(yīng)用時(shí)將具有潛在的優(yōu)勢(shì)。本試驗(yàn)?zāi)康氖墙⒁环N簡(jiǎn)單有效的骨髓基質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)及成骨誘導(dǎo)方法,并探討在體外培養(yǎng)中其增殖和分化的相互關(guān)系,總結(jié)骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)規(guī)律,為將來在體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出大量的有成骨活性的細(xì)胞以滿足再造骨組織的需要提供了美好的前景。方法沖洗法獲取WEISTAR大鼠骨髓,用貼壁法分離提純骨髓基質(zhì)細(xì)胞BONEMARROWSTROMALCELLSBMSCS,傳至第3代細(xì)胞后分組1分別用普通培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)基DMEM加入地米松10MMOLL,Β甘油磷酸鈉10MMOLL,維生素C50MGL培養(yǎng)10天,每3天換液1次。繪制各自細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。2分別用普通培養(yǎng)基和誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15天,每3天換液1次,于第4、7、10、13、16天,檢測(cè)兩組的堿性磷酸酶表達(dá)量。3以510ML密度接種于6孔培養(yǎng)板各1板,各孔放置載玻片,分別加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液和誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng),每3天換液,20天后分別取出各自細(xì)胞爬片行VONKOSSA染色。結(jié)果1普通培養(yǎng)基中細(xì)胞的生長(zhǎng)速度明顯快于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的細(xì)胞。2細(xì)胞堿性磷酸酶表達(dá)量?jī)山M有顯著性差異P005,普通培養(yǎng)基組明顯低于誘導(dǎo)組。3對(duì)照組細(xì)胞YONKOSSA染色陽性,試驗(yàn)組為陰性。結(jié)論1貼壁篩選法是一種簡(jiǎn)單有效的骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離純化方法。2骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,可作為骨組織工程中種子細(xì)胞的來源。3骨髓基質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化存在相關(guān)抑制的關(guān)系。
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簡(jiǎn)介:椎間盤細(xì)胞基質(zhì)包括膠原、蛋白聚糖等。椎間盤退行性病變表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞基質(zhì)代謝的改變。生長(zhǎng)因子有調(diào)整細(xì)胞增殖、分化及細(xì)胞基質(zhì)代謝的作用,可用于椎間盤退變的生物學(xué)治療。目前有關(guān)生長(zhǎng)因子對(duì)纖維環(huán)細(xì)胞作用的研究偏少,本研究考察體外培養(yǎng)條件下IGF1胰島素樣生長(zhǎng)因子1、PDGF血小板源性生長(zhǎng)因子、TGFΒ1轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Β1對(duì)人退變纖維環(huán)細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,以深入及擴(kuò)展生長(zhǎng)因子對(duì)人類椎間盤退變的生物學(xué)治療的研究。方法結(jié)合酶消化法和組織塊培養(yǎng)法,體外單層培養(yǎng)人退變纖維環(huán)原代細(xì)胞。傳代后通過免疫組織化學(xué)染色鑒定細(xì)胞。對(duì)傳3代細(xì)胞分別采用不同生長(zhǎng)因子干預(yù),根據(jù)文獻(xiàn)所查,選用相應(yīng)生長(zhǎng)因子最佳作用濃度,分對(duì)照組、IGF1組、PDGF組、TGFΒ1組、IGF1PDGF組、IGF1TGFΒ1組、PDGFTGFΒ1組、IGF1PDGFTGFΒ1組等8組。干預(yù)后第3、6D,采用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖,ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中Ⅰ、Ⅱ型膠原和AGGRECAN含量。用CURVEEXPERT13軟件將所測(cè)的OD值轉(zhuǎn)算為濃度值,數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件分析。結(jié)果傳3代細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色陽性。IGFI具有促人退變纖維環(huán)細(xì)胞增殖作用,輕度抑制細(xì)胞合成Ⅰ型膠原,促進(jìn)細(xì)胞合成II型膠原和AGGRECAN,促Ⅱ型膠原合成作用強(qiáng)于TGFΒ1。PDGF具有明顯促人退變纖維環(huán)細(xì)胞增殖作用,促增殖作用強(qiáng)于IGFI,抑制細(xì)胞合成I型膠原,輕度促進(jìn)細(xì)胞合成Ⅱ型膠原,無明顯促細(xì)胞合成AGGRECAN作用。TGFΒ1抑制人退變纖維環(huán)細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞合成Ⅰ、Ⅱ型膠原,AGGRECAN,促AGGRECAN合成作用強(qiáng)于IGFI。多種因子聯(lián)合作用較單種未見明顯優(yōu)勢(shì),未能呈現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)。結(jié)論IGFI、TGFΒ1、PDGF明顯改變?nèi)送俗兝w維環(huán)細(xì)胞的生物學(xué)活性。三種因子可以應(yīng)用于對(duì)人類椎間盤退變的生物學(xué)治療。
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簡(jiǎn)介:分類號(hào)73941密級(jí)公開UDC610編號(hào)201310001攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文RNA干擾下調(diào)CIB1表達(dá)對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞生物學(xué)特性的影響THEEFFECTOFCELLBIOLOGICALACTERISTICSOFGLIOBLASTOMAU87THATCIB1DOWNREGULATEBYRNAINTERFERENCETOUCHDOWN指導(dǎo)教師呂同德主任技師惠玲副主任技師學(xué)生姓名閆蔚論文類型基礎(chǔ)研究學(xué)科專業(yè)名稱基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)(免疫學(xué))研究方向腫瘤生物學(xué)學(xué)院(系、部)醫(yī)學(xué)院論文起止時(shí)間201112201303青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明54學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明55
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簡(jiǎn)介:該文應(yīng)用細(xì)胞力學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、分子免疫學(xué)等方法和技術(shù)從細(xì)胞層次上的應(yīng)力生長(zhǎng)關(guān)系著手重點(diǎn)就人肺上皮細(xì)胞對(duì)周期性機(jī)械拉伸刺激的響應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了初步的探索主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下1應(yīng)用周期性基底膜拉伸應(yīng)變裝置建立了人肺上皮細(xì)胞的體外加載模型并應(yīng)用生物化學(xué)方法和流式細(xì)胞技術(shù)探討該模型的可行性2應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)研究周期性機(jī)械拉伸應(yīng)變對(duì)人肺上皮細(xì)胞增殖的影響探討此類細(xì)胞在其力學(xué)生理背景下的生長(zhǎng)行為3應(yīng)用胞外基質(zhì)蛋白如纖粘連蛋白FN、膠原蛋白ⅣCOLⅣ裱襯基底膜激光共聚焦顯微鏡分析周期性機(jī)械拉伸應(yīng)變下人肺上皮細(xì)胞表面Α、Α和Β三種整聯(lián)蛋白的分布狀況4應(yīng)用膠原蛋白ⅣCOLⅣ裱襯基底膜微管吸吮技術(shù)研究周期性機(jī)械拉伸應(yīng)變對(duì)人肺上皮細(xì)胞粘附和鋪展的影響并結(jié)合前面膜受體整聯(lián)蛋白和骨架肌動(dòng)蛋白的變化探討人肺上皮細(xì)胞力學(xué)性質(zhì)對(duì)拉伸刺激的響應(yīng)及其機(jī)理5應(yīng)用膠原蛋白ⅣCOLⅣ裱襯基底膜激光共聚焦技術(shù)研究周期性機(jī)械拉伸應(yīng)變對(duì)人肺上皮細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白FACTIN的影響6胞內(nèi)鈣離子在細(xì)胞的機(jī)械信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起了重要的作用應(yīng)用熒光分光光度法研究了人肺上皮細(xì)胞響應(yīng)拉伸應(yīng)變時(shí)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化
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簡(jiǎn)介:安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IL6在膽管癌細(xì)胞株QBC939中的生物學(xué)效應(yīng)及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑的實(shí)驗(yàn)研究姓名韓寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師黃強(qiáng)許戈良20080501安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文韓寧2008IGIL6IL6RIMMUNOGLOBININTERLEUKIN6免疫球蛋白白細(xì)胞介素一6INTERLEUKIN6RECEPTOR白細(xì)胞介素一6受體IL6I己EINTERLEUKIN6ELEMEMTIPJAKSPTYRS仉虹TYR“IRISⅣⅣDLVDVEGFEDL’AGELSOCS3NMPTKIMMUNOPRECIPITATIONJANUSKINASESPHOSPHOTYROSINE白細(xì)胞介素一6反應(yīng)元件免疫沉淀JANUS激酶磷酸酪氨酸SIGNALTRANSDUCERANDACTIVATOROFTRANSCRIPTIOIL信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活因子TYROSINETRIHYDROXYMETHYLAMINOMETHANEMICROVESSELDENSITYLYMPHATICVESSELDENSITYVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORETHYLENEDIAMINETERAACETICACIDGELATINSUPPRESSOROFCYTOKINESIGNALING3NONTRANSMEMBRANEPROTEINTYROSINEKINASE3酪氨酸三羥甲基氨基甲烷微血管密度淋巴管微密度血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子乙二胺四乙酸明膠細(xì)胞因子信號(hào)抑制物3非跨膜型蛋白酪氨酸激酶
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簡(jiǎn)介:復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文PC12細(xì)胞缺糖損傷的分子細(xì)胞生物學(xué)特征姓名宋曉冬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師左伋劉雯20030501復(fù)里大學(xué)2000級(jí)磋士擻學(xué)鏈論文ABSTRACTBRAINISCHEMIAISONEOFTHEMOSTSERIOUSANDFATALDISEASESTOPROBEINTOTHEPATHOLOGICALMECHANISMOFTHEINJURYWI1LCONTRIBUTETOUNDERSTANDTHESESDISEASESBYAPPLYINGGLUCOSEDEPRIVATIONANINSULTRELEVANTTOTHEBRAINISCHEMIAMEDIA,PCI2CELLSTRAINWASEVALUATEDBYVARIABLECELLULARANDMOLECULARBIOLOGICALTECHNIQUESINCLUDINGMICROSCOPY,ELECTRONMICROSCOPY,F(xiàn)IOWCYTOMETRYANALYSIS,鞘渾,LDHLEAKAGEANDSODMEASUREMENT。RTPCR。THERESULTSREVEALEDTHATTHETREATEDPEL2CELLSWHICHDEPRIVEDGLUCOSEUNDERWENTTHEMORPHOLOGICALANDFUNCTIONALALTERATIONSINCLUDINGAPOPTOSISANDNECROSISAFTER24HOURFORGLUCOSEDEPRIVATION,THEAPOPTOSISPCI2CELLSINCREASEDTOTHEPEAKLEVELTHERNALEVELSOFGRP75、BCL一2、CMYC、BCLXL、BAXWEREMEASUREDBYRTPCRIN懟12CELLSEXPOSEDTOGLUCOSEDEPRIVATIONFORVARIOUSTIMEINTERVALSTHEDATADEMONSTRATEDTHATGRP75UPREGULATEDIN24HOURFORGLUCOSEDEPRIVATIONBCL~2、BCLXL、CMYCRNALEVELSEXPRESSEDTOPEAKLEVELS6一16HOURSAFTERGLUCOSEDEPRIVATIONTREATMENTTHENDECLINEDGRADUALLY。UNDERPARALLEDCONDITIONS,BAXINDUCED。KEYWORDSGLUCOSEDEPRIVATION,APOPTOSISISCHEMICINJURY4
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簡(jiǎn)介:目的了解癌睪丸抗原OYTES1對(duì)人間充質(zhì)干細(xì)胞MSCS生物學(xué)行為的影響。方法1運(yùn)用不連續(xù)密度梯度離心法從人骨髓中分離MSCS,然后使用含10%FBS的LDMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),聯(lián)合使用胰蛋白酶TRYSIN和EDTA對(duì)MSCS進(jìn)行消化傳代以獲得較單一的干細(xì)胞群通過以下方法鑒定MSCS顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分子標(biāo)志物(CD105、CD90、CD44、CD29、CD45、CD14和HLADR)、用條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)MSCS向成骨和成脂肪方向分化采用5%DMSO凍存MSCS,并比較凍存前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征、存活率、生長(zhǎng)情況和表面分子標(biāo)志物的表達(dá)以了解凍存效果。2采用RTPCR、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法、細(xì)胞免疫熒光染色法及免疫印跡法WESTERNBLOT檢測(cè)MSCS,從MRNA水平和蛋白質(zhì)水平了解OYTES1的表達(dá)用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染OYTES1SIRNA,RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)MSCS中OYTES1基因的最佳干擾時(shí)間及干擾效率觀察OYTES1基因干擾后MSCS的形態(tài)學(xué)特征,并了解MSCS相關(guān)表面分子標(biāo)志物的表達(dá)情況。3通過CCK8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡用WESTERNBLOT檢測(cè)周期相關(guān)調(diào)控蛋白CYCLINE和凋亡相關(guān)蛋白CASPASE3用劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)和TRANSWELL遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。結(jié)果1通過不連續(xù)密度梯度離心法體外獲得了來源于骨髓的MSCS,經(jīng)培養(yǎng)及傳代后MSCS得到較好的純化,具有MSCS典型的形態(tài)學(xué)特征,表達(dá)系列MSCS相關(guān)表面分子標(biāo)志物(CD105、CD90、CD44和CD29),并呈現(xiàn)出向成骨和成脂肪方向的分化潛能。采用5%DMSO凍存MSCS的效果良好,復(fù)蘇后的細(xì)胞其形態(tài)特性、存活率及生長(zhǎng)情況與凍存前相比無明顯改變,仍表達(dá)系列MSCS相關(guān)表面分子標(biāo)志物(CD105、CD90、CD44和CD29)。2在MSCS中均檢測(cè)到OYTES1MRNA和蛋白,OYTES1蛋白分布于MSCS的胞質(zhì)和胞核。MSCS中OYTES1表達(dá)的下調(diào)不影響MSCS的形態(tài)學(xué)特征和MSCS相關(guān)表面分子標(biāo)志物的表達(dá)。3OYTES1下調(diào)后,細(xì)胞增殖能力減弱、G1期細(xì)胞增多、S期和G2期細(xì)胞減少并伴隨CYCLINE表達(dá)的下降、細(xì)胞凋亡率增加且伴隨CASPASE3表達(dá)增強(qiáng),以及細(xì)胞遷移能力下降等,與其余實(shí)驗(yàn)組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<005,這些結(jié)果表明MSCS中OYTES1的下調(diào),影響了MSCS的增殖、周期分布、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞的遷移能力,提示OYTES1可能參與MSCS的這一系列生物學(xué)行為,但具體機(jī)制尚不清楚。結(jié)論1體外對(duì)MSCS進(jìn)行培養(yǎng)、連續(xù)傳代、鑒定及凍存,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了大量的種子細(xì)胞。2證實(shí)了MSCS中OYTES1的表達(dá)所建立的RNAI方法能有效地下調(diào)MSCS中的OYTES1。3OYTES1參與MSCS的增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移等生物學(xué)行為。
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簡(jiǎn)介:鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文野生型和突變型DNA聚合酶Β的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及對(duì)CHO細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名趙繼敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理生理學(xué)指導(dǎo)教師董子明20040501郊州大學(xué)2004年碩士畢業(yè)論文野生型和突變型DNA壤臺(tái)酶B的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及對(duì)CTTO細(xì)胞生物學(xué)特性的影響介導(dǎo)轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHINESEHAMSTEROVARYCELLS,CLIO細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,通過RTPCR方法檢測(cè)重組基因MRNA水平的表達(dá),MTT測(cè)法生長(zhǎng)曲線、漉式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞周期,以觀察轉(zhuǎn)染的DNAPOL13對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。MTT法測(cè)得的轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組0D值的比較采用雙因素方差分析,各組細(xì)胞周期中S期的比例的比較采用單因素方差分析。均以NO05為顯著性水準(zhǔn)。結(jié)果穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和突變型DNAPOL13的CHO細(xì)胞株中,都有外源基因MRNA水平;轉(zhuǎn)染突變型58BP缺失POL13基因的細(xì)胞增殖速度和S期比例增高均高于未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05。結(jié)論高表達(dá)外源性野生型和突變型DNAPOL13,對(duì)CHO細(xì)胞生長(zhǎng)具有不同的影響,為進(jìn)一步探討POL0與基因組穩(wěn)定性的關(guān)系及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用打下了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞DNAPOLB轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞RTPCR流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線2
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簡(jiǎn)介:目的研究臍血間充質(zhì)干細(xì)胞MSC的體外分離、純化、擴(kuò)增及其部分生物學(xué)特征為臍血干細(xì)胞定向分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞提供充分的前期理論依據(jù)和技術(shù)方法結(jié)論認(rèn)為臍血中富含造血干祖細(xì)胞是骨髓和外周血后的第三種造血干細(xì)胞的來源臍血干細(xì)胞的分離提純及擴(kuò)增培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)的研究分析揭示了我們培養(yǎng)的臍血MSC能很好地貼附生長(zhǎng)增殖分化程度很低有多向分化的潛能并能分泌細(xì)胞因子以調(diào)節(jié)自身生長(zhǎng)從而揭示了體外分離擴(kuò)增分離臍血干細(xì)胞及其培養(yǎng)擴(kuò)增的可行性并且由于分化程度低抗原表達(dá)弱細(xì)胞毒性低因此免疫應(yīng)答弱臍血的低免疫應(yīng)答性使得同胞間或非血緣供者移植后的GVHD發(fā)生率和嚴(yán)重性均低于骨髓移植臍血間充質(zhì)干細(xì)胞取材容易采集方便在組織工程中將有著廣泛的應(yīng)用前景
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簡(jiǎn)介:我們的實(shí)驗(yàn)選擇非病毒的質(zhì)粒介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BMP2轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS研究其轉(zhuǎn)染后外源基因表達(dá)情況及對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS成骨特性的影響并以新西蘭白兔為動(dòng)物模型研究其在活體內(nèi)的成骨效應(yīng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS中包括了誘導(dǎo)性骨祖細(xì)胞IOPC和確定性骨祖細(xì)胞DOPC后者無需誘導(dǎo)因子的作用本身就具備了成骨分化的能力而前者在骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BONEMPHOGEICPROTEIN2BMP2等成骨刺激因子作用下也向成骨分化2730利用脂酯體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將人BMP2基因?qū)牍撬杌|(zhì)干細(xì)胞MSCS使骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS在發(fā)揮基因治療的細(xì)胞載體的同時(shí)利用自體分泌的活性BMP2蛋白促進(jìn)其向成骨細(xì)胞系的分化是我們實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思想之一在對(duì)人和兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS體外培養(yǎng)擴(kuò)增的過程中我們也著重觀察了不同年齡供體的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)特性為今后進(jìn)一步進(jìn)行以骨髓基質(zhì)干細(xì)胞作為細(xì)胞載體的基因治療研究打下基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)一構(gòu)建真核細(xì)胞表達(dá)載體PCDNA3HBMP2目的為了研究人類骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BONEMPHOGEICPROTEIN2BMP2轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS的穩(wěn)定表達(dá)以及對(duì)轉(zhuǎn)染后骨髓基質(zhì)干細(xì)胞MSCS生物學(xué)特性的影響為了進(jìn)一步研究非病毒載體介導(dǎo)的BMP2轉(zhuǎn)染MSCS在動(dòng)物體內(nèi)成骨修復(fù)的作用構(gòu)建真核表達(dá)載體PCDNA3HBMP2實(shí)驗(yàn)二人骨髓基質(zhì)細(xì)胞的獲取、體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性的觀察目的體外培養(yǎng)了不同年齡段的人骨髓基質(zhì)細(xì)胞HMSCS對(duì)其不同的生物學(xué)特性進(jìn)行觀察為進(jìn)一步了解人骨髓基質(zhì)細(xì)胞作為基因轉(zhuǎn)載和表達(dá)的細(xì)胞載體和可作為外源性組織細(xì)胞的可行性奠定基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)三脂酯體介導(dǎo)HBMP2轉(zhuǎn)染人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和對(duì)其生物學(xué)特性的影響目的證實(shí)人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞HMSCS作為良好的基因治療骨缺損的細(xì)胞載體和觀察人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BMP2在HMSCS內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)的可行性并觀察外源性HBMP2對(duì)HMSCS成骨分化能力的影響實(shí)驗(yàn)四兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞的獲取、體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性的觀察目的為進(jìn)一步了解BMP2基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細(xì)胞在活體內(nèi)促進(jìn)骨修復(fù)重建的作用我們進(jìn)行了兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞RMSCS的體外培養(yǎng)研究快速大量提取培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞RMSCS的方法實(shí)驗(yàn)五HBMP2轉(zhuǎn)染自體兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞的成骨實(shí)驗(yàn)研究目的探討人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2HBMP2轉(zhuǎn)染兔自體骨髓基質(zhì)細(xì)胞RMSCS和兔自體骨髓基質(zhì)細(xì)胞單純體內(nèi)植入的骨生成誘導(dǎo)及促進(jìn)骨缺損修復(fù)的作用
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