簡介：目的本研究探討臍帶血表型為CD3CD56的NK細(xì)胞以及經(jīng)IL2、IL15誘導(dǎo)擴(kuò)增后免疫表型與細(xì)胞毒活性等生物學(xué)改變的特性。方法使用FICOLL淋巴細(xì)胞分離液分離出臍帶血單個(gè)核細(xì)胞在無血清培養(yǎng)的條件下分別加入IL2、IL15、IL2聯(lián)合IL15在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天流式細(xì)胞儀檢測CD3CD56NK細(xì)胞亞群含量以及NK細(xì)胞上CD16、CD62L、NKG2D、NKG2A、NCR44、NCR46、顆粒酶B、穿孔素的表達(dá)情況并且使用WST1法檢測培養(yǎng)后的NK細(xì)胞對K562細(xì)胞毒活性。結(jié)果經(jīng)過14天的培養(yǎng)擴(kuò)增后的IL2、IL15、IL2IL15三組NK細(xì)胞分別擴(kuò)增了1078±251、1042±372、1054±624倍這三組之間無顯著差異擴(kuò)增后的CD3CD56NK細(xì)胞表達(dá)CD16的比例有顯著減低IL2和IL15組之間差異顯著使用細(xì)胞因子擴(kuò)增后的NK細(xì)胞中CD62L的表達(dá)未曾改變使用IL2擴(kuò)增后NKG2A、NCR46表達(dá)有所下調(diào)而使用IL15擴(kuò)增后則發(fā)生相反的作用IL2和IL15兩種細(xì)胞因子均有上調(diào)NKG2D、穿孔素、NCR44表達(dá)的作用且細(xì)胞因子之間也存在差異IL15有上調(diào)NK細(xì)胞顆粒酶B的表達(dá)作用細(xì)胞因子擴(kuò)增的NK細(xì)胞毒活性顯著增高但細(xì)胞因子之間無顯著差異。結(jié)論在無血清培養(yǎng)條件下IL2和IL15都能使臍帶血中NK細(xì)胞出現(xiàn)有效地?cái)U(kuò)增。雖然CD3CD56NK細(xì)胞經(jīng)過兩種細(xì)胞因子擴(kuò)增后與其功能相關(guān)的免疫表型呈現(xiàn)出不同的改變特征但其細(xì)胞毒活性均顯著增加且兩種細(xì)胞因子之間無顯著差別協(xié)同作用不明顯NK細(xì)胞毒活性是各種活性分子共同作用的結(jié)果。

簡介：目的探討使用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCS）作為細(xì)胞載體搭載包埋缺氧誘導(dǎo)因子1?。℉IF1?。㏒IRNA的聚乳酸聚乙醇酸納米粒（PLGANPS）對模擬糖尿病微環(huán)境刺激下視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞的影響。（1）原代培養(yǎng)人MSCS并鑒定，在低氧高糖環(huán)境下對MSCS的生物學(xué)特性進(jìn)行觀察；（2）使用PLGA包載人HIF1ΑSIRNA并評測納米粒相關(guān)指標(biāo)以及觀察MSCS的入胞情況；（3）檢測PLGA納米粒對RPE細(xì)胞HIF1Α的沉默情況；（4）觀察載有包埋HIF1ΑSIRNA納米粒的MSCS對低氧高糖環(huán)境下RPE細(xì)胞生物學(xué)特性以及HIF1Α的MRNA表達(dá)的影響。方法（1）使用密度離心法提取人MSCS，通過成骨和成脂誘導(dǎo)后分別使用茜素紅和油紅O進(jìn)行染色鑒定。流式細(xì)胞術(shù)鑒定其表面標(biāo)記物。通過物理性缺氧模型（低氧CO2培養(yǎng)箱）以及葡萄糖建立低氧高糖模型，按照氧濃度及糖濃度將實(shí)驗(yàn)分為A常氧常糖組（21％O2556MMOLL葡萄糖DMEM培養(yǎng)液）；B常氧高糖組（21O230MMOLL葡萄糖DMEM培養(yǎng)液）；C低氧常糖組（5O2556MMOLL葡萄糖DMEM培養(yǎng)液）；D低氧高糖組（5O230MMOLL葡萄糖DMEM培養(yǎng)液）。使用CCK8在12H、24H和48H分別檢測MSCS的增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)在24H檢測MSCS凋亡情況，TRANSWELL在24H檢測MSCS移行情況；（2）由上海吉?jiǎng)P公司構(gòu)建針對人NM_001530（HIF1?。┗虻馁|(zhì)粒和慢病毒，乳化揮發(fā)法制備載HIF1ΑSIRNA的PLGA納米粒，激光粒度分析及ZETA電位分析檢測PLGA納米粒的粒度分布范圍，掃描電鏡觀察納米粒表面形態(tài)；使用流式細(xì)胞術(shù)對轉(zhuǎn)染載有HIF1ΑSIRNA的MSCS的入胞率進(jìn)行檢測；（3）將實(shí)驗(yàn)分為A陰性對照組（不做任何處理）；B慢病毒組（使用構(gòu)建好的慢病毒對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染）；C裸質(zhì)粒組（使用構(gòu)建好的質(zhì)粒對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染）；D空白PLGA組（使用Γ射線消毒過的，不含質(zhì)粒的PLGA納米粒對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染）；EPLGASIRNA組（使用Γ射線消毒過的，包埋有HIF1ΑSIRNA的納米粒對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染）。實(shí)時(shí)定量PCR檢測1D、3D、7D時(shí)RPE細(xì)胞中HIF1ΑMRNA的相對表達(dá)量；（4）使用TRANSWELL建立MSCSRPE細(xì)胞共培養(yǎng)體系，將實(shí)驗(yàn)分為ARPE組（在低氧高糖環(huán)境下對單純的RPE細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并檢測）；B共培養(yǎng)組（在低氧高糖環(huán)境下對MSCSRPE細(xì)胞共培養(yǎng)模型進(jìn)行培養(yǎng)并檢測）；C載PLGASIRNA共培養(yǎng)組（在低氧高糖環(huán)境下對搭載有含HIF1ΑSIRNA納米粒的MSCSRPE細(xì)胞共培養(yǎng)模型進(jìn)行培養(yǎng)并檢測）。使用CCK8在12H、24H和48H分別檢測RPE細(xì)胞的增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)在24H檢測RPE細(xì)胞的凋亡情況，TRANSWELL在24H檢測RPE細(xì)胞的移行情況；實(shí)時(shí)定量PCR檢測1D、3D、7D時(shí)RPE細(xì)胞中HIF1ΑMRNA的水平。結(jié)果（1）提取的人MSCS呈貼壁生長，經(jīng)鑒定具有向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞多向分化的潛能。流式細(xì)胞術(shù)檢測表面標(biāo)記物顯示CD29（），CD34（－），CD45（－）。低氧高糖組較常氧常糖組MSCS的增殖能力（225±014VS128±016；314±019VS188±011）在24H和48H時(shí)和移行（130±707VS72±566）能力在24H均增強(qiáng)（P005）；（2）納米粒呈窄分布，平均粒徑為3141NM，ZETA電位為﹣036MV。掃描電鏡觀察納米粒表面光滑，呈球形。流式細(xì)胞術(shù)檢測納米粒入胞率為（673±52）；（3）相較慢病毒組（005）。（4）在體外共培養(yǎng)體系中，與單純RPE細(xì)胞組及不載藥的共培養(yǎng)組相比，載藥的共培養(yǎng)組對低氧高糖環(huán)境下RPE細(xì)胞的增殖，凋亡及移行的影響均沒有差異（P005）；1D、3D和7D時(shí)，載有PLGA緩釋載藥系統(tǒng)的MSCS作為載體可較長期、有效的沉默RPE細(xì)胞中HIF1ΑMRNA的表達(dá)（F4522，P結(jié)論使用MSCS作為細(xì)胞載體搭載包埋HIF1ΑSIRNA的PLGA可安全有效的抑制低氧高糖環(huán)境下RPE細(xì)胞HIF1ΑMRNA水平，從而對CNV起到治療作用。

簡介：多囊卵巢綜合征是是婦女常見的內(nèi)分泌疾病，它不僅出現(xiàn)內(nèi)分泌失調(diào)，也同時(shí)伴有生殖障礙。目前認(rèn)為，多囊卵巢綜合征的卵巢功能異常與胰島素抵抗有關(guān)，但現(xiàn)有的對胰島素抵抗的研究都集中在胰島素作用的靶組織骨骼肌、脂肪、肝臟等，很顯然，用卵巢組織以外的胰島素抵抗和高胰島素血癥來解釋卵巢本身的功能障礙是不確切的，而且卵巢功能障礙僅存在于多囊卵巢綜合征患者而不常見于Ⅱ型糖尿病患者，這也說明多囊卵巢綜合征患者卵巢本身的糖代謝異常和胰島素抵抗與卵巢功能障礙有密切的關(guān)系。卵巢是女性生殖功能的基本單位，也是能量代謝的活躍器官。它含有介導(dǎo)胰島素所有作用的信號蛋白和代謝酶。因此本研究建立了體外的卵巢胰島素抵抗模型，從卵巢內(nèi)分子水平探討胰島素信號傳導(dǎo)和促性腺激素信號傳導(dǎo)的相互關(guān)系，揭示多囊卵巢綜合征患者糖代謝異常和生殖功能障礙的關(guān)系。祖國醫(yī)學(xué)對多囊卵巢綜合征早有認(rèn)識，其癥狀類似于痰濕型不孕和閉經(jīng)，痰濁是引起其病的關(guān)鍵因素；并且中醫(yī)所說胞宮相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的子宮和卵巢，因此吳效科課題組認(rèn)為痰濁是多囊卵巢綜合征患者生殖障礙和代謝異常的共同病機(jī)，多囊卵巢綜合征即痰壅胞宮所致。因此本研究建立了體外的卵巢胰島素抵抗模型，從卵巢內(nèi)分子水平探討胰島素信號傳導(dǎo)和促性腺激素信號傳導(dǎo)的相互關(guān)系，即模擬了痰壅胞宮的模型，從而揭示多囊卵巢綜合征患者糖代謝異常和生殖功能障礙的關(guān)系。目的探索痰壅胞宮對卵巢自身的影響，以及它與多囊卵巢綜合癥的關(guān)系。因此用地塞米松人工誘導(dǎo)豬卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗，以及中藥小檗堿、葛根素對胰島素抵抗的卵泡膜細(xì)胞功能調(diào)控。方法收集新鮮豬卵泡膜細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，經(jīng)地塞米松作用48H后，檢測豬卵泡膜細(xì)胞對糖利用率情況。同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR、蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)WB和激素水平測定，檢測小檗堿和葛根素對卵泡膜細(xì)胞內(nèi)胰島素信號傳導(dǎo)分子和甾體激素合成的影響。結(jié)論1地塞米松能夠誘導(dǎo)卵巢卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗；并且卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗后雄激素合成能力顯著增強(qiáng)。而胰島素抵抗和高雄激素血癥正是多囊卵巢綜合征功能障礙特征之一，說明此模型基本構(gòu)建成功。2回答了痰壅胞宮對卵巢本身的影響是卵巢自身的胰島素抵抗和高雄激素合成亢進(jìn)。3中藥小檗堿和葛根素能降低卵泡膜細(xì)胞的胰島素抵抗程度和雄激素合成，并且證明小檗堿和葛根素的增敏作用類似于二甲雙胍而不同于曲格列酮。提示中藥增敏劑可以用于多囊卵巢綜合征的治療，可以起到類似胰島素增敏劑的作用，并且可以起到改善生殖功能的作用。作為中藥增敏劑有良好研究和開發(fā)前景。

簡介：本研究工作分為三部分第一部分豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)生物支架材料的制備及其相關(guān)生物學(xué)特性研究。目的通過檢測豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)PBAM的物理和生物學(xué)特性及其有關(guān)組成成分的含量，探討PBAM作為膀胱替代生物支架材料或組織工程用支架材料的可行性。方法采用低滲去污劑洗滌核酸酶消化脫細(xì)胞方法去除豬膀胱中的細(xì)胞成分，制備成膀胱無細(xì)胞基質(zhì)，通過HE染色及MASSONS染色光鏡檢查觀察去細(xì)胞效果；分子生物學(xué)方法測定PBAM中DNA含量；采用ELISA方法測定PBAM中轉(zhuǎn)化生長因子Β1TGFΒ1的含量；應(yīng)用萬能電子拉伸機(jī)進(jìn)行PBAM生物力學(xué)測定。結(jié)果經(jīng)脫細(xì)胞處理后，光鏡觀察無細(xì)胞殘留，基質(zhì)三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)完整，但PBAM中DNA的含量僅減少至2％～5％，后經(jīng)進(jìn)一步重復(fù)雙核酸酶消化及加強(qiáng)換液次數(shù)后，DNA的含量均低于1％。PBAM中仍含有一定量的生長因子TGFΒ1；生物力學(xué)性能基本穩(wěn)定，仍有一定的彈性和韌度。結(jié)論1、所制備的PBAM物理性狀及生物力學(xué)性能穩(wěn)定。2、國內(nèi)外首次采用ELISA方法檢測到PBAM中仍含有一定量的生長因子TGFΒ1，表明其在組織工程膀胱的構(gòu)建中具有潛在的積極作用。3、所制備的PBAM具有無菌、無毒和良好的組織相容性，能長期儲存，可以作為“現(xiàn)成品”用于組織工程、器官替代及修補(bǔ)用生物支架材料的應(yīng)用研究。第二部分豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)在異種移植中的免疫原性及生物安全性研究。目的進(jìn)一步對所制備的豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)移植物進(jìn)行免疫原性及生物安全性檢測。方法通過采用免疫組化方法檢測此去細(xì)胞過程對豬膀胱中結(jié)構(gòu)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合體ⅠMAJHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEX，MHCⅠ抗原和Α半乳糖基抗原ΑGALACTOSYLRESIDLLES，ΑGAL表達(dá)情況的影響；通過分子生物學(xué)方法觀察此去細(xì)胞過程對豬膀胱中的PERV的影響，以及把PBAM作為支架材料進(jìn)行犬膀胱替代修復(fù)實(shí)驗(yàn)，觀察異種移植前后PERV的表達(dá)情況。結(jié)果新鮮豬膀胱有豬ΑGAL和MHCⅠ抗原的高表達(dá)，經(jīng)脫細(xì)胞處理后，PBAM中ΑGAL和MHCⅠ抗原的活性表達(dá)均明顯降低或基本無表達(dá)；新鮮豬膀胱基因組內(nèi)存在PERV基因序列，經(jīng)去細(xì)胞處理所制備的PBAM未發(fā)現(xiàn)有PERV基因序列。應(yīng)用PBAM進(jìn)行異種移植或者說作為支架材料進(jìn)行異種膀胱替代沒有發(fā)現(xiàn)活性PERV傳染的證據(jù)。結(jié)論1、新鮮豬膀胱存在有與異種移植免疫排斥反應(yīng)直接有關(guān)的主要抗原ΑGAL和MHCⅠ，PBAM中ΑGAL和MHCⅠ抗原的活性表達(dá)均明顯降低或基本無表達(dá)。2、新鮮豬膀胱基因組內(nèi)存在PERV基因序列，PBAM中無PERV基因序列。3、應(yīng)用PBAM進(jìn)行異種移植或作為支架材料制備組織工程膀胱進(jìn)行異種膀胱替代可能具有良好的免疫耐受性及可靠的生物安全性。第三部分豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)在異種動物犬體內(nèi)進(jìn)行膀胱修補(bǔ)替代性實(shí)驗(yàn)研究。目的觀察PBAM在異種動物體內(nèi)的生物相容性、生物降解情況及生物安全性問題，同時(shí)觀察單純應(yīng)用PBAM進(jìn)行膀胱替代修補(bǔ)實(shí)驗(yàn)是否可行，修補(bǔ)面積大小對膀胱再生是否有影響，為下一步構(gòu)建組織工程膀胱及尿路組織缺損的修復(fù)和替代提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法雜種犬分四組，A組為對照組，切除50％膀胱后原位直接縫合，B組、C組和D組為實(shí)驗(yàn)組，分別切除50％膀胱后用用PBAM替代修補(bǔ)修補(bǔ)面積約為原膀胱的30％、40％、50％，PBAM大小分別約為16CM、30CM、64CM。術(shù)前及術(shù)后查血常規(guī)、電解質(zhì)及血肌酐情況。術(shù)前及PBAM移植后1個(gè)月檢測PERV。術(shù)前及術(shù)后12周行膀胱測壓及膀胱順應(yīng)性的檢查，并行腹部平片及膀胱造影檢查。術(shù)后12周及24周每組分別處死一條犬進(jìn)行大體標(biāo)本及病理學(xué)檢查。結(jié)果有8條犬安全度過圍手術(shù)期，術(shù)后血常規(guī)及腎功能檢查對照組與實(shí)驗(yàn)組無差別；其中D組兩條犬分別在術(shù)后28天和34天時(shí)死亡，尸體解剖死亡原因均為修補(bǔ)中心處膀胱穿孔、漏尿、腹腔內(nèi)感染所致。術(shù)后12周時(shí)，A組、B組和C組膀胱容量分別恢復(fù)到術(shù)前63％，85％，89％，膀胱順應(yīng)性分別恢復(fù)到原來的67％，88％，87％。腹平片均未見有明顯膀胱結(jié)石形成；12周時(shí)的膀胱標(biāo)本很難找到支架與膀胱吻合處，支架明顯萎縮，面積減小至7585％，已經(jīng)被新生的膀胱組織取代，但壁較薄，已修復(fù)如正常的膀胱外觀。組織學(xué)檢查顯示基質(zhì)支架替代部分膀胱區(qū)域基本形成多層移行上皮細(xì)胞，與正常的泌尿上皮細(xì)胞差異不大，有少量白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，可見散在平滑肌肌束。24周的標(biāo)本，已經(jīng)找不到支架，支架已經(jīng)被完全吸收，支架內(nèi)表面光滑，有肉眼可見的血管網(wǎng)，外表面觸之較粗糙。組織學(xué)檢查顯示膀胱各層組織基本完全再生，基本完成膀胱組織替代重建。對照組的標(biāo)本觀察符合切口愈合過程。在12周時(shí)分別處死的B組和C組1條犬的膀胱標(biāo)本修補(bǔ)處膀胱發(fā)現(xiàn)有泥沙樣顆粒附著，24周時(shí)所有膀胱標(biāo)本均未見有結(jié)石形成。結(jié)論1、PBAM作為生物支架材料生物相容性良好，支架材料可完全吸收，并可基本完成膀胱組織替代重建。2、PBAM異種移植生物安全性良好。3、初步大動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)所制備PBAM可用于膀胱的修補(bǔ)替代治療，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。4、較大面積的PBAM用于膀胱替代治療可能會出現(xiàn)膀胱穿孔、支架材料萎縮及微結(jié)石形成等并發(fā)癥，期待構(gòu)建組織工程膀胱用于實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用研究。

簡介：【研究背景】隨著全民健身運(yùn)動的推廣普及運(yùn)動系統(tǒng)損傷正呈現(xiàn)逐年增加的趨勢其中關(guān)節(jié)軟骨損傷的發(fā)生率很高對2479例膝關(guān)節(jié)手術(shù)患者流行病學(xué)分布統(tǒng)計(jì)1其中關(guān)節(jié)軟骨損傷者占551％年齡分布范圍大中青年為主要人群性別構(gòu)成比相近。關(guān)節(jié)軟骨損傷常導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛、活動障礙嚴(yán)重者可喪失關(guān)節(jié)功能成為肢體殘障的重要原因24。目前臨床上常用且較有效治療軟骨損傷的方法是關(guān)節(jié)鏡下微骨折術(shù)通過刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS生成來修復(fù)軟骨且修復(fù)結(jié)果多為纖維組織其抗壓能力較正常軟骨差組織工程方法治療費(fèi)用昂貴、周期長難以廣泛應(yīng)用因此軟骨修復(fù)目前仍是臨床最棘手的難題。我們前期研究中將微骨折術(shù)結(jié)合關(guān)節(jié)腔內(nèi)沖擊波修復(fù)兔股骨遠(yuǎn)端軟骨缺損結(jié)果顯示有類透明軟骨形成明顯優(yōu)于單純微骨折術(shù)5。但對沖擊波修復(fù)軟骨損傷的機(jī)理尚不清楚。實(shí)驗(yàn)室研究表明RESWT對軟骨損傷有修復(fù)作用6。臨床研究表明RESWT對肱骨外上髁炎、岡上肌鈣化、跟腱炎、軟組織損傷、慢性疼痛的緩解等具有肯定效果7。RESWT的臨床應(yīng)用過程中存在影響指標(biāo)多而雜缺乏一個(gè)統(tǒng)一的指標(biāo)來衡量和評價(jià)其作用效果。在臨床應(yīng)用過程中會面對很多不同的疾病具體使用何種沖擊波探頭、多大的壓力和頻率進(jìn)行對癥治療才能達(dá)到最佳效果國內(nèi)外一直都沒有相關(guān)研究來解決這個(gè)問題8?！狙芯磕康摹刻剿骱饬縍ESWT作用效果的統(tǒng)一指標(biāo)初步研究RESWT刺激軟骨細(xì)胞和軟骨前體細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)為進(jìn)一步探索RESWT修復(fù)軟骨損傷的最佳方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！静牧吓c方法】采用發(fā)散式?jīng)_擊波儀器測試直徑為15MM和6MM兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)探頭觀察兩個(gè)探頭在不同壓力、頻率變化時(shí)的輸出能量EFD的變化規(guī)律。使用紋影成像系統(tǒng)觀察36MM平面狀沖擊頭、15MM標(biāo)準(zhǔn)治療頭、10MM標(biāo)準(zhǔn)治療頭、15MM長形治療探頭在壓力為2105PA3105PA4105PA頻率為10HZ時(shí)使用高速數(shù)據(jù)采集儀觀察發(fā)散式?jīng)_擊波儀器輸出波形。觀察RESWT不同的探頭在不同工作壓力時(shí)在空氣中沖擊波的傳播形態(tài)和作用距離。我們使用新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨分離培養(yǎng)出軟骨細(xì)胞和軟骨前體細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)傳代至P2代使用RESWT對其進(jìn)行刺激壓力分組08105PA15105PA25105PA35105PA頻率10HZ沖擊600次。觀察兩種細(xì)胞在RESWT刺激后24H時(shí)增殖情況差異使用增殖活性最高的實(shí)驗(yàn)分組的壓力刺激進(jìn)行下步實(shí)驗(yàn)。組化染色觀察RESWT刺激細(xì)胞后三系分化情況QPCR測試兩種細(xì)胞在RESWT刺激后的細(xì)胞內(nèi)軟骨分化相關(guān)MRNA水平的變化。【結(jié)果】在測量RESWT輸出能量時(shí)發(fā)現(xiàn)相同的頻率時(shí)不同壓力對輸出能量的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P15MM長形治療探頭10MM標(biāo)準(zhǔn)治療頭15MM標(biāo)準(zhǔn)治療頭。15MM長探頭與15MM標(biāo)準(zhǔn)探頭相比具有更遠(yuǎn)的作用距離和更大角度的作用范圍。RESWT刺激軟骨細(xì)胞和軟骨前體細(xì)胞后24HCCK8法測試細(xì)胞增殖活性結(jié)果表明刺激后兩種細(xì)胞的增殖活性均增加P【結(jié)論】本研究中提出了一種對發(fā)散式?jīng)_擊波輸出能量EFD進(jìn)行測量的方法有益于更加精確化研究沖擊波修復(fù)軟骨損傷的機(jī)理。沖擊波可促進(jìn)軟骨損傷的修復(fù)在其過程中軟骨前體細(xì)胞比軟骨細(xì)胞可能發(fā)揮著更重要的作用。

簡介：石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文食管癌TE1細(xì)胞生物學(xué)特性相關(guān)性研究姓名李步強(qiáng)申請學(xué)位級別碩士專業(yè)人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師慕曉玲201106IIABSTRACTOBJECTIVESTUDYTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFESOPHAGEALCANCERCELLSMETHODS1THEMPHOLOGICALACTERISTICASWASOBSERVEDINHESTAINING（2）THECELLGROUTHCURVEWASANALYSEDBYMTTMETHOD（3）THEIMMUNOCYTOCHEMICALMETHODWASEMPLOYEDTODETECTTHESPECIFICCELLPHENOTYPE（4）THECELLCYCLEWASANALYSEDBYFCM（5）THETOXICITYOFCISPLATINPACLITAXELMETHOTREXATEFLUOURACILTOTE1CELLSWEREANALYSEDBYMTTTHELC50OFPACLITAXELWASCALCULATEDRESULTSTHECELLSGREWWELLINTHEHIGHGLUCOSEDMEMTHECELLSCANBEDIVIDEDINTOTHREEOFKINDSINHESTAINING，THEFIRSTCELLSWEREOVALSHAPEDNUCLEUSLARGESMALLCYTOPLASMTHESECONDWERETRIANGULARPOLYGONALTHETHIRDHAVEDUALNUCLEUSMULTINUCLEUSNUCLEUSMITOTICFIGURESWERECOMMONAFTERTHECELLSWEREPLANTEDTHECELLSINTHEFIRSTSECONDDAYWEREINTHEINCUBATIONPERIODTHETHIRDFIFTHDAYWASINPROLIFERATIVEINDEXPERIODINTHESEVENTHDAYTHECELLSWEREINTOTHEPLATEAUGROWTHPERIODTHECK7EXPRESSIONWASPOSITIVEINTHECYTOPLASMKI67POSITIVEEXPRESSIONWEREINTHENUCLEUSP53POSITIVEEXPRESSIONWEREINTHENUCLEUSTOOHALFOFTHECELLSWEREINTHEPROLIFERATIVEPHASEOFCELLCYCLEHALFINTHEQUIESCENTPHASETHEEFFECTSTYLEOFDIFFERENTCHEMICALSTOESOPHAGEALTE1CELLSWEREDIFFERENTTHETOXICITYOFTAXOLTOTE1CELLSDEPENDEDONITSCONCENTRATIONTIMETHETE1CELLCOULDACQUIREDTHERESISTANCEOFTAXOLCONCLUSIONS（1）TE1CELLSLINEHAVETHEBIOLOGICALACTERISTICSOFESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMA（2）DIFFERENTCHEMOTHERAPYDRUGSEFFECTSONESOPHAGEALTE1CELLSINDIFFERENTWAYS，PACLITAXELEFFECTSTE1INCONCENTRATIONTIMEDEPENDENTSTYLEKEYWDSESOPHAGEALCANCERTE1CELLSLINEBIOLOGICALACTERISTICSCHEMOTHERAPYPACLITAXELTYPEOFTHESISA（BASICRESEARCH）

簡介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是一類具有跨胚層分化潛能和高度自我復(fù)制能力的組織干細(xì)胞，具有取材方便、易分離純化、免疫原性低、能夠向腫瘤遷移等特性。MSCS最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，本世紀(jì)初有研究者從皮膚真皮組織中分離得到了MSCS，并將其命名為真皮間充質(zhì)干細(xì)胞DERMISMESENCHYMALSTEMCELLS，DMSCS，DMSCS具有取材方便、來源廣泛和促進(jìn)造血恢復(fù)等獨(dú)特優(yōu)勢，而且DMSCS具有廣泛的潛在的臨床應(yīng)用前景，不僅可以用于皮膚和神經(jīng)損傷的修復(fù)，還可應(yīng)用于抗皮膚衰老及皮膚組織工程，更利于自體移植，使其成為干細(xì)胞治療的重要的種子細(xì)胞?；诖?，本實(shí)驗(yàn)旨在建立小鼠DMSCS體外快速分離、穩(wěn)定擴(kuò)增體系，并探索其多向分化潛能，為DMSCS的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。取新生23D的ICRINSTITUTEOFCANCERRESEARCCH，ICR小鼠背部皮膚，通過機(jī)械分離和酶消化相結(jié)合的方法獲取DMSCS，采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基加細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系進(jìn)行擴(kuò)增利用免疫組織化學(xué)方法鑒定不同代數(shù)DMSCSCD44、CD29和CD45的表達(dá)，RTPCR鑒定SCA1、CD29、CD90、CD34、OCT4、SOX2、CMYC、KIF4基因的表達(dá)；摸索誘導(dǎo)DMSCS向脂肪、成骨、神經(jīng)、心肌、汗腺細(xì)胞分化的方法，并采用細(xì)胞化學(xué)和RTPCR法鑒定；將不同比例20％、40％、60％、80％、100％的成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用于DMSCS，用MTT法檢測作用后DMSCS的活性，進(jìn)而尋求對DMSCS增殖有促進(jìn)作用的條件培養(yǎng)液的合適濃度；取不同濃度20NM、300NM、1ΜM、5ΜM、10ΜM的REVERSINE作用于不同代數(shù)DMSCS，探討REVERSINE對DMSCS增殖和分化能力的影響。結(jié)果顯示，在以往培養(yǎng)條件基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，成功獲得DMSCS體外快速分離、穩(wěn)定擴(kuò)增體系；免疫組織化學(xué)鑒定表明DMSCS強(qiáng)表達(dá)CD44，弱表達(dá)CD29，不表達(dá)CD45；RTPCR鑒定結(jié)果表明DMSCS表達(dá)SCA1、CD29、CD90、CD34、CMYC、KIF4，不穩(wěn)定表達(dá)OCT4；成功誘導(dǎo)DMSCS向脂肪、成骨分化；20％、40％、80％濃度的成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液對DMSCS的增殖有促進(jìn)作用；REVERSINE對DMSCS的增殖無顯著影響；但對DMSCS成脂分化有促進(jìn)作用。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文他卡西醇對體外培養(yǎng)人黑素細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響姓名白雪飛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師鄧軍20090501第二軍醫(yī)人學(xué)碩士學(xué)位論文能刺激黑素細(xì)胞增賄，10。8和10～MOL／L能促進(jìn)黑素合成，10～～10MOL／L的他卡西醇能顯著增強(qiáng)J下常人黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性。2運(yùn)用半定量RTPCR法檢測TYR、TRP一1MRNA的表達(dá)。結(jié)果10一～10一MOL／L的他卡西醇能顯著上調(diào)TYR、TRPLMRNA的表達(dá)。三、結(jié)論他卡西醇可促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖，并提示該藥物可能通過上調(diào)酪氨酸酶家族中關(guān)鍵基因TYR、TRP1MRNA的表達(dá)來提高酪氨酸酶活性，最終增加黑素合成。通過以上實(shí)驗(yàn)，為研究他卡西醇促進(jìn)白癜風(fēng)皮損區(qū)復(fù)色中的作用機(jī)制提供了初步的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞他卡西醇；黑素細(xì)胞；增殖；黑素合成；酪氨酸酶；酪氨酸酶相關(guān)蛋白一L；白癜風(fēng)6

簡介：分類號學(xué)號學(xué)號M201275648學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級密級碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文AKT1磷酸化磷酸化PMS2T156及其對卵巢癌細(xì)胞及其對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究生物學(xué)功能影響的研究學(xué)位申請人高芳芳學(xué)位申請人高芳芳學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師張媛指導(dǎo)教師張媛副教授副教授答辯日期答辯日期2015年4月

簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文來源于肝癌門靜脈癌栓的肝癌細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究姓名胡華生申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)（普通外科學(xué)）指導(dǎo)教師程樹群吳孟超20090401第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文第二部分人肝癌細(xì)胞系CSQT1的生物學(xué)特性鑒定細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察采用光鏡觀察；超微結(jié)構(gòu)用電鏡觀察；胎盤藍(lán)染色計(jì)數(shù)檢測凍存后復(fù)蘇存活率；細(xì)胞計(jì)數(shù)法測定貼壁率；MTR法測細(xì)胞生長期曲線；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和DNA組成；常規(guī)制備染色體標(biāo)本，拍照分析核型；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞克隆形成率；裸鼠皮下接種CSQT1細(xì)胞懸液，接種后觀察成瘤情況，計(jì)算異種移植率；透射電子顯微鏡鑒定細(xì)胞系的污染情況。第三部分構(gòu)建人肝癌門靜脈癌栓裸鼠模型及細(xì)胞系CSQT2的建立和特點(diǎn)分析將人肝癌門靜脈癌栓新鮮組織接種到裸鼠肝臟包膜下，形成移植瘤，然后利用移植瘤過繼傳代到裸鼠肝臟，經(jīng)過5次傳代后，移植瘤生長比較穩(wěn)定。取裸鼠移植瘤，采用膠原酶消化法以及挑取克隆細(xì)胞島擴(kuò)大培養(yǎng)、自然純化法行單一肝癌細(xì)胞純化新建細(xì)胞系。對該新建細(xì)胞系進(jìn)行生物學(xué)特性分析，將裸鼠成瘤的肝臟用石蠟包埋后制成標(biāo)本，并使用HE染色后觀察有無裸鼠門靜脈鏡下微癌栓的出現(xiàn)。結(jié)果第一部分細(xì)胞原代培養(yǎng)早期，生長比較不穩(wěn)定，10代以前細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)需要較高的接種密度，而且細(xì)胞倍增時(shí)間不同。到第15代時(shí)細(xì)胞生長已比較穩(wěn)定。細(xì)胞呈上皮樣，大小不一，以多角形、多邊形為主，占90％以上。細(xì)胞在高密度時(shí)2X106／ML可見重疊及堆積生長。傳代時(shí)間一般為23天。第二部分CSQT1細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定利用人肝癌門靜脈癌栓新鮮組織塊進(jìn)行原代培養(yǎng)起來的細(xì)胞系CSQT1，掃描電鏡顯示細(xì)胞表面豐富微絨毛，細(xì)胞大小不等，直徑在1020URN之間，透射電鏡下見細(xì)胞以不規(guī)則型為主，細(xì)胞間有橋粒緊密連接等，有少量連接復(fù)合；細(xì)胞間有形成腺結(jié)構(gòu)及條索結(jié)構(gòu)傾向，可形成類似膽小管結(jié)構(gòu)；細(xì)胞質(zhì)豐富，有大量糖原顆粒形成糖原湖樣結(jié)構(gòu)；線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較發(fā)達(dá)，有豐富的游離核糖體；細(xì)胞長滿瓶底后，有重疊現(xiàn)象細(xì)胞失去接觸抑制生長核質(zhì)比例倒置等。凍存后復(fù)蘇成活率為95％。細(xì)胞生長曲線顯示上皮樣惡性腫瘤生長特性，細(xì)胞群體倍增時(shí)間為48H，4H后貼壁率已超過90％，細(xì)胞軟瓊脂中生長，克隆形成率為20％。DNA周期分析G0／G1為64％，G2／M為19％，S為10％。染色體眾數(shù)以亞四倍體為主。細(xì)胞培養(yǎng)上清液AFP陰性，HBSAG陰性。CSQT1細(xì)胞能在裸鼠中的成瘤。透射電鏡檢CSQT1細(xì)胞無支原體污染。第三部分通過裸鼠皮下移植瘤及外科原位接種的方法建立了人肝癌門靜脈癌栓裸鼠皮下移植瘤模型和人肝癌門靜脈癌栓原位移植模型，并且在該肝臟腫瘤組織中成功培養(yǎng)出CSQT2細(xì)胞系。通過對該細(xì)胞系進(jìn)行核型分析及光電鏡分析顯示其起源于人肝癌門靜脈癌栓組織，并且從其成瘤的肝臟中找到了鏡下門靜脈微癌栓的證據(jù)。

簡介：分類號密級UDC學(xué)號416523211537南昌大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文LSD1抑制劑抑制劑TCP體外對體外對腎癌腎癌786O細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響行為的影響THEEFFECTSOFLSD1INHIBITTCPONTHECYTOBIOLOGICALBEHAVISOFHUMANRENALCARCINOMA786OCELLSINVITRO王戰(zhàn)士王戰(zhàn)士培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱孫庭教授、主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱外科學(xué)（泌尿外科）論文答辯日期2014年6月答辯委員會主席史子敏評閱人王金根孫強(qiáng)2014年6月摘要摘要目的目的初步研究賴氨酸特異性脫甲基酶1LSD1抑制劑反苯環(huán)丙胺對腎透明細(xì)胞癌786O細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響，并初步探討其機(jī)制。方法方法1、細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)成功后行MTT實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度梯度下的反苯環(huán)丙胺（TCP）干預(yù)對數(shù)生長期的786O細(xì)胞24H、48H和72H后的細(xì)胞生長抑制率，并設(shè)調(diào)零孔和對照組，計(jì)算50％致死濃度IC50，然后繪制濃度時(shí)間抑制率曲線圖；實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。2、采用流式細(xì)胞儀（ANNEXINVPI雙染法）分析、計(jì)算細(xì)胞凋亡率，并繪制曲線圖。3、TRIZOL法提取實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞總RNA，應(yīng)用分光光度計(jì)法檢測RNA濃度、純度，瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性，使用半定量RTPCR檢測LSD1基因MRNA的表達(dá)量變化。4、WESTERNBLOT檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞LSD1蛋白表達(dá)量變化。5、采用劃痕試驗(yàn)觀察TCP對786O細(xì)胞遷移力的影響，拍照觀察12H、24H和48H細(xì)胞遷移距離。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。6、TRANSWELL細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度梯度的TCP作用對數(shù)生長期的786O細(xì)胞24H侵襲到TANSWELL小室下室面的數(shù)目，同時(shí)設(shè)立對照組，予以01％的結(jié)晶紫染色后拍照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。7、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差XS表示，采用SPSS190統(tǒng)計(jì)軟件包的單因素方差分析，P005為差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果結(jié)果1、不同濃度0、10、20、40、80、160和320UM的TCP作用于786O細(xì)胞24H、48H和72H后，MTT法檢測結(jié)果顯示，1‰的DMSO溶液對786O細(xì)胞無影響，TCP對786O細(xì)胞的增殖有抑制作用，10UM以上隨藥物濃度的增大、作用時(shí)間的延長，抑制作用隨之增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間劑量效應(yīng)關(guān)系P＜001。計(jì)算出24H、48H和72HTCP的IC50值分別為13376UM、6766UM和3602UM。

簡介：中文摘要PPARY在人食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義摘要目的食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一，全世界每年約有30萬人死于食管癌。其發(fā)病率和死亡率各國差異很大。我國是世界食管癌高發(fā)地，其死亡率占全球的50％以上，粗死亡率為1738／10萬，占總癌亡人數(shù)的1641％。食管癌的病理類型主要分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、癌肉瘤、肉瘤樣癌及小細(xì)胞癌。其中我國以鱗狀細(xì)胞癌為主，約占發(fā)病率的90％左右。過氧化物酶體增殖物激活受體PEROXISOMEPROLIFERATORACTIVATEDRECEPTORS，PPARS被證實(shí)是核受體超家族的成員之一，是一類能與DNA應(yīng)答元件DNARESPECTIVEELEMENT結(jié)合的配體激活性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，其主要功能是對與細(xì)胞生長和分化相關(guān)的基因表達(dá)特異性的調(diào)控。PPAR7是過氧化物酶體增殖物激活受體中研究最為廣泛的亞型。近來研究已證實(shí)，PPARY在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤血管生成等重要作用。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法IHC及實(shí)時(shí)定量PCRRTPCR檢測了PPAR7在人食管鱗狀細(xì)胞癌組織及其相應(yīng)遠(yuǎn)癌組織距癌組織邊緣5CM以上中的表達(dá)情況，分析了其與食管癌臨床病理各指標(biāo)間的關(guān)系，探討了其在食管鱗狀細(xì)胞癌表達(dá)的意義，為PPAR7激動劑應(yīng)用于腫瘤的臨床治療提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科在2013年2月2013年12月期間經(jīng)手術(shù)治療的食管鱗狀細(xì)胞癌患者新鮮組織標(biāo)本55例，其中男性患者33例，女性患者2260，男女比為15／1，病人平均年齡為623歲。食管胸上段癌6例，中段癌32例，下段癌17例；高分化4例，中分化38例，低分化13例。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療及化療；術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)。對照組選取這55N患者的新鮮遠(yuǎn)癌組織標(biāo)本距癌組織邊緣5CM以上。分別記錄患者性別、年齡、病理類型、分化程度、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理情況。采用免疫組織化學(xué)法與實(shí)時(shí)定量PCR法，檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組標(biāo)本中PPAR7蛋白及MRNA的表達(dá)水平，分析其與食管癌臨床病理特征

簡介：中圖分類號UDC碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼Q§33密級公玨MALATL對宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)表型的影響THEEFFECTOFMALAT1INCERVICALCANCERCELLBIOLOGYPHENOTYPE作者姓名學(xué)科專業(yè)研究方向?qū)W院系、所指導(dǎo)教師江艷細(xì)胞生物學(xué)腫瘤生物學(xué)治療腫瘤研究所李官成教授敝料嗍一耕頸鏈D社奶中南大學(xué)二。一四年五月碩士畢業(yè)論文中文摘要MALATL對宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)表型的影響摘要研究背景與目的近年來，宮頸癌發(fā)病率在某些地區(qū)有明顯上升趨勢，且患者年輕化趨勢越來越明顯。目前已明確宮頸癌的發(fā)生與人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV的持續(xù)感染相關(guān)，但有研究表明年輕婦女的HPV感染通常是一過性的，因此，在宮頸癌早期篩查中HPV檢測實(shí)驗(yàn)不能很好的鑒別靜止和持續(xù)感染，再加上目前宮頸癌手術(shù)、放療和化療存在一定局限性，研究宮頸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，尋找新的能夠用于治療和病情監(jiān)測指標(biāo)的靶分子成為亟待解決的重大問題。LNCRNA是近年研究發(fā)現(xiàn)的在表觀遺傳水平、轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)并廣泛參與幾乎所有生理和病理過程的一類非編碼RNA。實(shí)驗(yàn)室前期在太空誘變宮頸癌細(xì)胞中篩選獲得一個(gè)表達(dá)上調(diào)的長片段非編碼RNA基因MALATL，MALATL是定位于染色體LLQL3，核酸序列為8708BP，在多種腫瘤中被異常調(diào)控，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但MALATL與宮頸癌的關(guān)系目前還未見其他實(shí)驗(yàn)室有相關(guān)報(bào)導(dǎo)。本課題擬通過RTPCR方法檢測MALATL在宮頸癌細(xì)胞系和宮頸上皮細(xì)胞樣本中的表達(dá)；用RNA沉默技術(shù)和過本課題受如下基金資助1．湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目編號122220522．2013年中南大學(xué)教師基金項(xiàng)目編號2013JSJJ0453．2013年中南大學(xué)自主探索創(chuàng)新課題項(xiàng)目編號2013ZZTS283

簡介：血管重建REMODELING是心血管疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過程，力學(xué)因素在其中起重要調(diào)控作用。血管平滑肌細(xì)胞VULARSMOOTHMUSCLECELLS，VSMCS與血管內(nèi)皮細(xì)胞ENDOTHELIALCELLS，ECS在結(jié)構(gòu)上相鄰，功能上有密切聯(lián)系，它們之間的相互交流CROSSTALK在血管生理功能的維持和血管重建中均扮演著重要的角色。然而，在力學(xué)因素作用下，ECS與VSMCS相互交流的力學(xué)生物學(xué)MECHANOBIOLOGY機(jī)制尚需進(jìn)一步闡明。本文基于本實(shí)驗(yàn)室前期取得的低切應(yīng)力LOWSHEARSTRESS，LOWSS誘導(dǎo)下血管差異蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)，以ECS與VSMCS相互交流在應(yīng)力誘導(dǎo)血管重建中的作用為著眼點(diǎn)，開展了兩部分研究首先，依據(jù)生物信息學(xué)分析所預(yù)測的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)用ECS與VSMCS聯(lián)合培養(yǎng)的平行平板流動腔系統(tǒng)對ECS分別施加正常切應(yīng)力NMALSHEARSTRESS，NSS和LOWSS，研究預(yù)測網(wǎng)絡(luò)中提示的分泌型蛋白PDGFBB和TGFΒ1及其相關(guān)蛋白LAMINA、LOX和磷酸化ERK12在ECS和VSMCS相互交流中的作用及其機(jī)制。結(jié)果顯示，LOWSS誘導(dǎo)ECS和VSMCS的PDGFBB和TGFΒ1分泌，LAMINA表達(dá)降低，LOX和磷酸化ERK12表達(dá)增高，細(xì)胞增殖和遷移能力增強(qiáng)。用PDGFBB和TGFΒ1重組蛋白對靜態(tài)培養(yǎng)下的ECS和VSMCS進(jìn)行刺激也得到了類似結(jié)果。干擾ECS的PDGFBB表達(dá)，發(fā)現(xiàn)LOWSS所誘導(dǎo)的ECS和VSMCS的LAMINA、LOX和磷酸化ERK12蛋白表達(dá)、細(xì)胞增殖和遷移被抑制而干擾ECS的TGFΒ1的表達(dá)，則對LOWSS所誘導(dǎo)的VSMCS的上述變化無影響應(yīng)用中性抗體分別封閉VSMCS的PDGFBB和TGFΒ1的作用，則抑制了LOWSS所誘導(dǎo)的ECS的上述變化。結(jié)果表明，PDGFBB和TGFΒ1在LOWSS誘導(dǎo)的ECS和VSMCS相互交流中發(fā)揮不同作用，ECS通過分泌PDGFBB調(diào)節(jié)VSMCS的功能，而VSMCS則通過分泌PDGFBB和TGFΒ1正反饋調(diào)節(jié)ECS的功能。然后，本文根據(jù)血管差異蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果的提示，選擇在血管組織中表達(dá)，但功能未知的力學(xué)敏感分子RAB28，深入研究了高張應(yīng)變條件下VSMCS與ECS相互交流對其表達(dá)的影響及其機(jī)制。應(yīng)用大鼠高血壓模型和細(xì)胞張應(yīng)變加載系統(tǒng)模擬血管細(xì)胞在高血壓狀態(tài)所承受的周期性張應(yīng)變，探討了RAB28在血管細(xì)胞中的功能及調(diào)控機(jī)制。結(jié)果顯示，高血壓大鼠頸總動脈的RAB28表達(dá)增高高張應(yīng)變誘導(dǎo)了VSMCS的RAB28表達(dá)張應(yīng)變加載后，用VSMCS的培養(yǎng)基培養(yǎng)靜態(tài)ECS后，ECS的RAB28表達(dá)也增高。對VSMCS的培養(yǎng)基進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，高張應(yīng)變可促進(jìn)VSMCS自分泌血管緊張素ⅡANGⅡ。ANGⅡ既作用于VSMCS自身，又通過旁分泌作用于相鄰的ECS，上調(diào)ECS和VSMCS的RAB28表達(dá)。干擾ECS的RAB28表達(dá)抑制ECS增殖，誘導(dǎo)其凋亡和遷移干擾VSMCS的RAB28表達(dá)則抑制VSMCS遷移。在ECS中，RAB28和NFΚB存在細(xì)胞內(nèi)共定位。ECS處于饑餓狀態(tài)時(shí)，NFΚB和RAB28主要分布在胞漿ECS受ANGⅡ刺激后，NFΚB和RAB28則主要分布在胞核。干擾ECS的RAB28表達(dá)，NFΚBP65亞基磷酸化水平下降，入核減少抑制NFΚB活化，則造成RAB28表達(dá)下降。結(jié)果提示，NFΚB活化機(jī)制中，RAB28可能參與了NFΚB的入核過程反之，NFΚB活化后上調(diào)RAB28的表達(dá)。NFΚB活化入核與RAB28表達(dá)之間存在反饋調(diào)控。綜上所述，在LOWSS條件下，ECS通過PDGFBB調(diào)控VSMCS的功能，而VSMCS則通過PDGFBB和TGFΒ1對ECS的功能進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)在高張應(yīng)變條件下，VSMCS通過ANGⅡ調(diào)控ECS的RAB28表達(dá)，RAB28可能參與了NFΚB的活化入核，進(jìn)而調(diào)控ECS的功能。這些結(jié)果對闡明血管重建的力學(xué)生物學(xué)機(jī)制有重要意義，也為心血管疾病的基礎(chǔ)和臨床研究提供了新的力學(xué)生物學(xué)思路。

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文PI3KAKT信號通路對人肝癌細(xì)胞中胱硫醚Γ裂解酶基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制及其生物學(xué)功能的研究姓名殷鵬申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師查錫良20120408復(fù)且大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要合成抑制劑CHX處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)LY294002不影響CSE蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。以上結(jié)果說明P13K／AKT信號通路可能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控人肝癌細(xì)胞CSE的基因表達(dá)水平。論文第二部分，我們研究P13K／AKT信號通路調(diào)控CSE基因表達(dá)的分子機(jī)制。首先構(gòu)建了六種不同長度的人CSE基因啟動子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)592／139BP片段的CSE基因啟動子活性最強(qiáng)，為核心啟動子片段。LY294002處理細(xì)胞能夠抑制CSE基因的轉(zhuǎn)錄，驗(yàn)證了P13K／AH能在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控CSE基因的表達(dá)。我們采用轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測軟件對核心啟動子中的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了預(yù)測，共發(fā)現(xiàn)包括4處SPL結(jié)合位點(diǎn)在內(nèi)的8種常見轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，我們對所有可能的結(jié)合位點(diǎn)一一分別進(jìn)行點(diǎn)突變，結(jié)果證明CSE基因啟動子中SPL結(jié)合位點(diǎn)突變后能夠明顯下降CSE基因啟動子活性以及CSE的MRNA和蛋白質(zhì)水平。其中以最靠近轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的兩處SPL結(jié)合位點(diǎn)突變引起的CSE下調(diào)最為明顯。而其他幾種常見的轉(zhuǎn)錄因子如APL，OCT1，F(xiàn)OXD3，HNF3D，VMYB，CETS和E2F對CSE轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控作用不明顯。采用直接干擾SPL水平，并結(jié)合CHIP的方法進(jìn)一步證明了SPL能與CSE基因啟動子區(qū)直接結(jié)合。而通過研究LY294002對CSEMRNA半衰期的影響發(fā)現(xiàn)，P13黜信號通路并未對CSE基因轉(zhuǎn)錄后水平有調(diào)控作用。以上結(jié)果說明SPL作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子在P13K／AKT信號通路對CSE基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控中發(fā)揮了重要作用。論文第三部分，我們主要研究了CSE的一些細(xì)胞生物學(xué)功能。實(shí)驗(yàn)證明CSE表達(dá)能夠影響內(nèi)源性H2S濃度的高低，并且CSE能夠促進(jìn)肝癌腫瘤細(xì)胞增殖，而這種促增殖作用是通過對細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)的，對細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21W礬／CIVL的影響可能是關(guān)鍵因素。而在腫瘤細(xì)胞的其他生物學(xué)行為中，CSE表達(dá)對人肝癌細(xì)胞凋亡能力以及對人肝癌細(xì)胞遷移能力都沒有明顯影響，而我們采用EMT相關(guān)蛋白檢測發(fā)現(xiàn)CSE在肝癌EMT的過程中也沒有明顯作用。綜上所述，本文研究發(fā)現(xiàn)在人肝癌細(xì)胞中，P13K／AKT信號通路通過轉(zhuǎn)錄因子SPL，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控CSE基因的表達(dá)，并且CSE及其催化產(chǎn)物內(nèi)源性H2S通過對細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。這一發(fā)現(xiàn)對深入認(rèn)識CSE基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制具有重要意義。關(guān)鍵詞CSE；P13叭KT；SPL；基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控；肝細(xì)胞癌中圖分類號Q52