版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、小鼠胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcells)是由囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)在體外培養(yǎng)條件下建立的多能性干細(xì)胞系,具有形成嵌合體的能力,并能發(fā)育為嵌合體的任何組織、細(xì)胞類型,包括生殖細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞在體外也能自發(fā)分化形成三個(gè)胚層的細(xì)胞;在特定誘導(dǎo)條件下,能分化成肌肉、神經(jīng)、胰島等細(xì)胞類型。特別地,胚胎干細(xì)胞在一定條件的誘導(dǎo)下,可以體外向生殖細(xì)胞分化。
生殖系的發(fā)育是大多數(shù)物種全能性(受精卵)和子代產(chǎn)生的源頭。在小鼠中,生殖系發(fā)育起始
2、于原生殖細(xì)胞(primodialgermcells)在胚胎發(fā)育第7天的出現(xiàn);而這一過程受到了精密的細(xì)胞信號(hào)調(diào)控,特別是BMP4/Smads和SCF/c-Kit信號(hào)通路,前者對(duì)于原生殖細(xì)胞發(fā)育、后者對(duì)于原生殖細(xì)胞生長(zhǎng)是必須的。無(wú)論雌雄,原生殖細(xì)胞都是最終的生殖細(xì)胞——卵母細(xì)胞和精子——的來(lái)源。在雄性小鼠,原生殖細(xì)胞在特化后遷移到發(fā)育中的雄性生殖脊,最終形成精原干細(xì)胞(spermatogonialstemcells),通過減數(shù)分裂維持整個(gè)雄
3、性小鼠成年后的生精過程。
本研究擬利用細(xì)胞因子誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞在體外條件下向生殖脊分化。首先,C57BL/6J雌鼠與Oct4-EGFP轉(zhuǎn)基因雄鼠(ES-4N)交配后,分離其囊胚,建立胚胎干細(xì)胞系。不同的培養(yǎng)條件下,小鼠胚胎干細(xì)胞建系的效率明顯不同,在2i-LIF培養(yǎng)基中效率最高,且干細(xì)胞維持基態(tài)(groundstate)。
為了使得胚胎干細(xì)胞在最終分化為精子后便于分離、觀察、鑒定,對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞進(jìn)行了精子特異性熒
4、光標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)。利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了pAcr-DsRed重組載體。載體啟動(dòng)子為頂體素基因(Acr)的啟動(dòng)子,其在減數(shù)分裂以后的精子細(xì)胞中開始表達(dá),因此可以用來(lái)特異性標(biāo)記精子。將重組載體電轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞,經(jīng)G418篩選出陽(yáng)性克隆后,制備嵌合體小鼠。
利用細(xì)胞因子對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。首先利用bFGF和ActivinA誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向表胚層細(xì)胞(epiblast)分化;再用BMP4和SCF誘導(dǎo)其向生殖細(xì)胞分化。實(shí)驗(yàn)結(jié)
5、果顯示,在BMP4和SCF的作用下,胚胎干細(xì)胞向生殖系分化,相關(guān)特異性蛋白在誘導(dǎo)后的轉(zhuǎn)錄水平明顯上升。BMP4單獨(dú)作用也可得到類似的結(jié)果,而SCF單獨(dú)作用不能誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向生殖系分化。這與生殖系在體內(nèi)發(fā)育時(shí)的信號(hào)調(diào)控通路是一致的。
綜上所述,小鼠胚胎干細(xì)胞在體外建系時(shí),2i-LIF培養(yǎng)體系是最為高效的;在轉(zhuǎn)染了精子特異性標(biāo)記后,胚胎干細(xì)胞仍具有全能性,這為研究胚胎干細(xì)胞向生殖系發(fā)育提供了很好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明,
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 體外誘導(dǎo)孤雌胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化.pdf
- 小鼠睪丸支持細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 補(bǔ)腎中藥誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞方向分化的研究.pdf
- 小鼠iPS細(xì)胞系的建立及向生殖細(xì)胞的誘導(dǎo)分化.pdf
- 人類胚胎干細(xì)胞與小鼠孤雌胚胎干細(xì)胞系的建立與鑒定.pdf
- 人胚胎干細(xì)胞系與人孤雌胚胎干細(xì)胞系建立的研究.pdf
- 昆明小鼠胚胎干細(xì)胞分離培養(yǎng)及其向原始生殖細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 體外誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為造血干細(xì)胞.pdf
- 人胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞定向分化與調(diào)控.pdf
- Ⅰ胚胎干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的體外實(shí)驗(yàn)研究;Ⅱ提高胚胎干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化率的體外實(shí)驗(yàn)研究;Ⅲ胚胎干細(xì)胞向膽管上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞.pdf
- 人胚胎干細(xì)胞和原始生殖細(xì)胞向肌細(xì)胞的分化.pdf
- 31636.通過小鼠胚胎干細(xì)胞研究原始生殖細(xì)胞的特化
- 小鼠胚胎干細(xì)胞建系及人胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立初探.pdf
- 體外誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- DAZL基因?qū)﹄u胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)為生殖細(xì)胞的功能研究.pdf
- 體外定向誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞分化.pdf
- 小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝臟細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 47460.小鼠胚胎干細(xì)胞建系與定向神經(jīng)誘導(dǎo)分化的研究
- 昆明白小鼠胚胎干細(xì)胞系及轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論