體外誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、在這里,我們以生長(zhǎng)因子為工具,試將ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞,同時(shí),在誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞時(shí),我們采用了三種不同的細(xì)胞培養(yǎng)方式,即EB方式、形成EB一定時(shí)間后將EBs消化成單個(gè)細(xì)胞(EB-單層)方式和細(xì)胞單層方式,以比較這三種方式的ES細(xì)胞的誘導(dǎo)效果.此外,我們還探討一個(gè)五個(gè)階段的、包含七種生長(zhǎng)因子的分階段誘導(dǎo)方法能否誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為功能良好的胰島素分泌細(xì)胞.期望通過上述研究,為今后ES細(xì)胞應(yīng)用到糖尿病臨床治療,最終

2、治愈糖尿病打下基礎(chǔ).第一部分GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinimide五種生長(zhǎng)因子聯(lián)合誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞一.目的聯(lián)合應(yīng)用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞.二.方法1.ES細(xì)胞的培養(yǎng)2.ES細(xì)胞的誘導(dǎo)3.HE染色4.DT染色5.免疫組化6.RT-PCR7.胰島素陽性細(xì)胞的計(jì)

3、數(shù)8.培養(yǎng)液胰島素水平的檢測(cè)9.數(shù)據(jù)處理和分析;四.小結(jié)以胚胎體方式進(jìn)行誘導(dǎo),聯(lián)合應(yīng)用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長(zhǎng)因子可將E14.1小鼠ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞;以葡萄糖作用細(xì)胞時(shí),胰島素分泌細(xì)胞可釋放胰島素到培養(yǎng)液中,并且提高葡萄糖濃度時(shí)胰島素分泌水平有所提高,但培養(yǎng)液胰島素水平很低,提示所誘導(dǎo)出來的胰島素分泌細(xì)胞功能欠佳.第二部分三種不同細(xì)胞培養(yǎng)方式對(duì)E

4、S細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞誘導(dǎo)效果的初步比較一.目的以EB-單層和細(xì)胞單層兩種不同的細(xì)胞培養(yǎng)方式,聯(lián)合應(yīng)用GLP-1、betacellulin、activin A、bFGF和nicotinimide五種生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)ES細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞,結(jié)合第一部分(即EB方式)結(jié)果,初步比較三種方式的ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)效果.二.方法1.ES細(xì)胞的培養(yǎng)2.ES細(xì)胞的誘導(dǎo)3.HE染色4.DTZ染色5.免疫組化6.RT-PCR