體外誘導(dǎo)孤雌胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化.pdf

1、本文對(duì)體外誘導(dǎo)孤雌胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化問題進(jìn)行了研究。隨著社會(huì)壓力的增加、環(huán)境的惡化，人類的生殖健康情況越來越引起人們的關(guān)注?，F(xiàn)實(shí)問題迫使許多女性選擇晚育，而女性的生殖能力隨著年齡的增長呈下降趨勢，因此人們對(duì)由卵巢衰老引起的疾病如不孕不育、胎兒的健康問題愈加重視。而卵子再生這一主題便成為了解決女性衰老的方法之一。同樣，配子發(fā)生及其調(diào)控機(jī)制的研究越加顯示出重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值和深遠(yuǎn)的社會(huì)意義。在小鼠中，未分化的生殖細(xì)胞前體被稱為原始生殖細(xì)胞

2、primordial germ cells(PGCs)。而精子和卵子都是由PGCs經(jīng)過減數(shù)分裂形成。胚胎干細(xì)胞最顯著的特征就是具有多能性。它能夠進(jìn)行無限增殖并且能在體內(nèi)和體外分化成三胚層的各種細(xì)胞類型，當(dāng)移植到發(fā)育的囊胚中后可以發(fā)育成新生的個(gè)體。胚胎干細(xì)胞由于其具有的獨(dú)特性質(zhì)和在生殖醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的巨大應(yīng)用潛力而受到科學(xué)界的廣泛關(guān)注。將未受精的卵子激活后，從中分離的胚胎干細(xì)胞即為孤雌胚胎干細(xì)胞parthenogenetic embryo s

3、tem cells(pESC)。該細(xì)胞具有正常胚胎干細(xì)胞的所有特性，用該細(xì)胞誘導(dǎo)目的組織在理論上可以避免一些免疫排斥問題。由于該細(xì)胞來源于卵子，所以我們選擇它在體外進(jìn)行卵子的誘導(dǎo)。RA是vitamin A的一種代謝產(chǎn)物。在胎兒的發(fā)育中RA對(duì)細(xì)胞的生長、分化以及衰老都起到作用。RA對(duì)體外誘導(dǎo)PGC的形成也有作用。Blimp1是PGC形成時(shí)最先表達(dá)的基因，我們先構(gòu)建了blimp1-GFP的1116pES細(xì)胞系，通過用RA在體外誘導(dǎo)1116p

4、ES cell向PGC分化，對(duì)誘導(dǎo)過程中所形成的embryonicbody(EB)進(jìn)行檢測時(shí)，并沒有看到blimp1表達(dá)的熒光，但PGC形成的晚期基因mvh和dazl的表達(dá)量上升很多倍。但減數(shù)分裂早期的基因如sycp3的表達(dá)量并沒有上升。說明此時(shí)的EB可能處于PGC晚期階段，接下來將該EB通過卵巢注射或者腎包囊移植到體內(nèi)進(jìn)一步檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在注射由RA誘導(dǎo)下形成的EB的卵巢切片中有許多類似卵泡狀的東西，但這些是否是真正的卵泡、是否由所注