小鼠iPS細胞系的建立及向生殖細胞的誘導分化.pdf

1、iPS細胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)具有分化成機體所有類型組織細胞的潛能，且克服了ES細胞不可避免的倫理問題和臨床移植中的免疫排斥問題。其建系和定向分化研究已成為當今研究的熱點領(lǐng)域。生殖細胞在個體發(fā)育中占有重要地位，iPS細胞體外分化獲得的生殖細胞，不僅可作為基因修飾的源頭細胞，通過受精即可獲得轉(zhuǎn)基因動物，且對不孕不育的治療提供了很好的解決方案。
　　本研究采用pMXs-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

2、介導Yamanaka OSKM四因子轉(zhuǎn)錄，結(jié)合Dox控制的Tet-on誘導系統(tǒng)，成功建立了小鼠iPS系，并對其生物學特性進行分析鑒定，在AP活性，染色體數(shù)目，干細胞標記，體內(nèi)畸胎瘤組織切片和體外分化免疫熒光的鑒定試驗中，證實該iPS細胞系具有和ES細胞相似的特性。將獲得的小鼠iPS細胞以3×104個/mL濃度懸滴培養(yǎng)制作EB，分化形成的細胞，可觀察到持續(xù)的跳動現(xiàn)象，經(jīng)免疫熒光鑒定，其表達心肌特異性蛋白GATA4。添加一定濃度RA的誘導液