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文檔簡介
1、iPS細胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)具有分化成機體所有類型組織細胞的潛能,且克服了ES細胞不可避免的倫理問題和臨床移植中的免疫排斥問題。其建系和定向分化研究已成為當今研究的熱點領(lǐng)域。生殖細胞在個體發(fā)育中占有重要地位,iPS細胞體外分化獲得的生殖細胞,不僅可作為基因修飾的源頭細胞,通過受精即可獲得轉(zhuǎn)基因動物,且對不孕不育的治療提供了很好的解決方案。
本研究采用pMXs-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體
2、介導Yamanaka OSKM四因子轉(zhuǎn)錄,結(jié)合Dox控制的Tet-on誘導系統(tǒng),成功建立了小鼠iPS系,并對其生物學特性進行分析鑒定,在AP活性,染色體數(shù)目,干細胞標記,體內(nèi)畸胎瘤組織切片和體外分化免疫熒光的鑒定試驗中,證實該iPS細胞系具有和ES細胞相似的特性。將獲得的小鼠iPS細胞以3×104個/mL濃度懸滴培養(yǎng)制作EB,分化形成的細胞,可觀察到持續(xù)的跳動現(xiàn)象,經(jīng)免疫熒光鑒定,其表達心肌特異性蛋白GATA4。添加一定濃度RA的誘導液
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