2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、新城疫病毒(NDV)又稱(chēng)亞洲雞瘟病毒,該病毒可引起雞、火雞、鴕鳥(niǎo)、鴿子、孔雀及其它野鳥(niǎo)等多種禽類(lèi)發(fā)病。該病1926年首次發(fā)現(xiàn)于英國(guó)新城,現(xiàn)流行于世界各國(guó)。在最近70年間,新城疫病毒流行造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失,打擊了許多國(guó)家的養(yǎng)禽業(yè)。國(guó)際獸疫局把新城疫定為必須通報(bào)的傳染病。盡管常規(guī)檢測(cè)新城疫病毒及其抗原的方法很多,但是檢測(cè)診斷新城疫活病毒在病毒學(xué)研究方面仍具有重要意義方法。為此建立了免疫熒光法和免疫組化法兩種血清學(xué)方法分別測(cè)定NDV在CEF

2、和COS-7兩種細(xì)胞中的定位,通過(guò)這兩個(gè)方法不僅能快速、準(zhǔn)確的檢查NDV,而且還能夠得到新城疫活病毒在細(xì)胞中的增殖和定位情況,為研究NDV的致病性提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
   通過(guò)高速離心和超速離心的方法對(duì)NDV進(jìn)行純化,經(jīng)過(guò)檢測(cè),純化的病毒可以用來(lái)進(jìn)行免疫。雞胚尿囊腔接種方法接種NDV F48E9強(qiáng)毒于9日齡的SPF雞胚,每枚接種0.2ml,去除24h內(nèi)死亡的雞胚,取24~120h死亡的雞胚,4℃放置12h,收集其尿囊液,用血凝

3、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定,得到效價(jià)為1:26,-20℃保存;反復(fù)凍融3次,4℃12000r/min離心50 min,收集上清液。將上清液以4℃60000 r/min離心6h,棄上清,用少量0.01mol/L pH7.4 PBS懸浮沉淀,-70℃保存。超離病毒用血凝實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定,得到效價(jià)為28。用所得的病毒免疫兩只青年公雞,得到雞抗NDV多克隆抗體,用血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè),效價(jià)分別為1:27和1:28。
   采用飽和硫酸銨鹽析、透析、Sepha

4、dex G-200柱凝膠層析法從雞血清中獲得IgG,經(jīng)SDS-PAGE電泳和免疫電泳鑒定,純化后的IgG達(dá)到電泳純,可以用來(lái)免疫。Folin-酚法測(cè)IgG濃度,繪制了純化過(guò)程的洗脫曲線。純化的雞血清IgG用于制備兔抗雞血清IgG多克隆抗體。采用瓊擴(kuò)試驗(yàn)和Western Blot對(duì)兔抗雞血清IgG多克隆抗體進(jìn)行了鑒定,瓊擴(kuò)試驗(yàn)測(cè)得多克隆抗體的效價(jià)為1:16,Western Blot顯示出多抗與IgG的重鏈和輕鏈反應(yīng)的兩條特異性條帶。

5、>   采用上述方法純化兔抗雞IgG多克隆抗體血清,經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定,純化后的IgG達(dá)到電泳純。Folin-酚法測(cè)IgG濃度,繪制了純化過(guò)程的洗脫曲線。純化的兔IgG用于制備酶標(biāo)記兔抗雞IgG抗體,采用過(guò)碘酸鈉氧化法將HRP標(biāo)記到兔抗雞IgG血清IgG上,得到酶標(biāo)記兔抗雞IgG抗體。對(duì)所得到酶標(biāo)記兔抗雞IgG抗體的使用效果以及酶結(jié)合物使用稀釋度進(jìn)行測(cè)定。發(fā)現(xiàn)酶標(biāo)記兔抗雞IgG抗體抗的使用效果比較好,可以進(jìn)行下面試驗(yàn)。所得的酶

6、標(biāo)記兔抗雞IgG抗體抗使用稀釋度為1:4000。
   本研究用上述所得到的抗原、雞抗NDV抗體和酶標(biāo)記兔抗雞IgG抗體建立了快速檢測(cè)NDV在CEF和COS-7細(xì)胞中的定位的免疫酶標(biāo)細(xì)胞化學(xué)法。通過(guò)方正法優(yōu)化出以下最佳反應(yīng)條件。確定該實(shí)驗(yàn)用4%多聚甲醛做固定劑結(jié)果較好,病毒接種量為100×TCID50,細(xì)胞孵育24h,雞抗NDV抗體在4℃反應(yīng)過(guò)夜,按1:50進(jìn)行稀釋?zhuān)笜?biāo)記兔抗雞IgG抗體在37℃反應(yīng)30min,按1:200進(jìn)行

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