人工感染鴨源新城疫病毒對鴨免疫功能作用的分子機制.pdf

1、新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的禽類烈性傳染病，在全球廣泛流傳，嚴重制約著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展和禽產(chǎn)品安全。傳統(tǒng)理論認為，鴨對NDV不敏感，但從NDV的演化進程看，有導(dǎo)致鴨ND流行的危險。由于NDV具有基因型種類多，變異進化速度快的特點，常導(dǎo)致鴨對疫苗免疫效果不佳，致使疾病防控難度加大。因此，深入了解NDV感染后，鴨先天免疫因子抗病毒作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機

2、制，對提高鴨的機體免疫力，降低感染幾率顯得極為重要。
　　為探討鴨的天然防御系統(tǒng)抗NDV感染的免疫調(diào)節(jié)作用機制，本試驗選用39只20日齡SPF紹鴨，隨機分為攻毒組27只和對照組12只。對照組不攻毒，攻毒組采用點眼滴鼻的途徑接種鴨源NDV強毒(Md/CH/LGD/1/2005)。分別在攻毒后的24 h和48 h，從對照及攻毒組各隨機取6只鴨屠宰，分別采集腎臟、肺臟、氣管、腺胃、骨髓、脾臟、盲腸扁桃體、哈德氏腺、法氏囊等9個組織。剩余

3、15只鴨子每天持續(xù)觀察，并于攻毒后24h、48h、72h、5d采集咽喉及泄殖腔拭子，以確定排毒和排毒時間。每隔4d采血一次直至24d對其抗體變化進行檢測。采集的全部組織運用實時熒光定量RT-PCR法檢測樣品中8種Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)、11種鴨防御素(Avian beta defensins，AvBDs)、7種細胞因子和4種相關(guān)免疫因子表達量的變化。
　　通過觀察發(fā)現(xiàn)，感染鴨源NDV強毒后

4、，鴨沒有發(fā)病和死亡情況發(fā)生，對其抗體水平的檢測結(jié)果顯示，該NDV能夠誘導(dǎo)鴨體內(nèi)產(chǎn)生NDV特異抗體。對攻毒后鴨排毒情況的檢測發(fā)現(xiàn)，在感染過程中均可在咽喉和泄殖腔內(nèi)檢測到NDV，且在檢測的時間內(nèi)，試驗鴨排毒開始于攻毒后第1d，到第5d停止。
　　通過對感染鴨NDV24 h和48 h后各組織器官中TLRs、AvBDs、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和細胞因子基因的表達量進行檢測，結(jié)果顯示:經(jīng)NDV強毒感染后，除TLR4外，TLR1、TLR2、TLR3、T

5、LR5、TLR7、TLR15、TLR21在大部分組織中均表達，且表達量都有上調(diào)的趨勢。其中，同對照組相比TLR2、3、7在脾臟中表達量顯著升高(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ，RIG-Ⅰ)在組織中廣泛分布，在大部分組織中表達量均上調(diào)，特別在24h脾臟、盲腸扁桃體和哈德氏腺等免疫器官中上調(diào)顯著(P＜0.05)。同時發(fā)現(xiàn)，NDV誘導(dǎo)后，AvBD1、AvBD5

6、、AvBD9、AvBD16在大部分組織中表達量升高，且在個別組織內(nèi)表達量升高顯著。其中與對照組相比，鴨AvBD5在盲腸扁桃體中表達量較高(P＜0.05)，AvBD16在肺臟及脾臟組織中表達顯著高于對照(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，髓樣分化因子(myeloid differentiationfactor88，MyD88)在9種組織中均被誘導(dǎo)表達，且與對照相比在脾臟、盲腸扁桃體及哈德氏腺等組織中表達量明顯增加(P＜0.05)。白細胞介

7、素2（Interleukin-2，IL-2）在哈德氏腺中表達量增加，與MyD88和TLR7的變化趨勢相同。經(jīng)NDV感染后，同對照組相比鴨白介素6(Interleukin-6，IL-6)在脾臟中表達量明顯升高，干擾素γ（Interferon-γ，IFN-γ）在腎臟中上調(diào)顯著(P＜0.05)。感染鴨源NDV后，調(diào)控蛋白細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶2(Extracellular regulated protein kinases2，ERK2)及凋亡基因

8、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cysteinyl aspartate specific proteinase3，Caspase-3)表達水平在脾臟(24 h)中顯著提高。
　　綜上所述，本研究所用紹鴨對鴨源NDV（Md/CH/LGD/1/2005毒株）不敏感，但該株NDV能夠誘導(dǎo)機體從感染后4d產(chǎn)生特異抗體。經(jīng)NDV感染后， TLRs（2，3和7）在脾臟組織中表達量顯著升高(P＜0.05);RIG-Ⅰ在24h脾臟、盲腸扁桃體和