雞新城疫病毒F、HN基因的真核表達及免疫效力研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)引起的侵害禽類的急性高度接觸性傳染病,是家禽傳染性疾病中危害最嚴重的疫病之一,由于對世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大,故被國際獸疫局確定為A類傳染病。使用疫苗進行免疫是全球養(yǎng)禽業(yè)防制該病的有效方法之一。由于傳統(tǒng)疫苗(減毒活苗或滅活苗)潛在的不足,迫切需要提高和加強新城疫疫苗的有效性。DNA疫苗作為第3代疫苗,因其既有亞單位疫苗的安全性,

2、又有減毒活疫苗的有效性而受到研究人員的矚目。因此,研制新一代高效、安全,低副作用的NDDNA疫苗是近年來研究的熱點之一。 本研究將新城疫病毒標準強毒F48E9株F、HN基因分別克隆到真核表達載體pCAGGS中,置于雞β-肌動蛋白啟動子的調(diào)控之下,構建成可用作DNA疫苗的NDVF和NDVHN基因表達質(zhì)粒。經(jīng)過酶切、測序分析篩選鑒定出含有F、HN基因的重組質(zhì)粒,分別命名為pCAGGS-F和pCAGGS-HN。然后,將用質(zhì)粒純化試劑盒

3、純化后的質(zhì)粒轉染Hela細胞,用間接免疫熒光技術檢測目的蛋白的表達情況。結果表明該表達載體可以表達F和HN基因。 在國內(nèi)首次應用構建的DNA疫苗對雞胚進行免疫,以測試其安全性(孵化率為100%,6/6),為后期進行進一步試驗奠定了基礎。 為了檢測這些質(zhì)粒是否可以誘導動物機體產(chǎn)生特異性免疫,將21日齡SPF雞分作8組并且每只雞帶有翅標,分別肌注接種不同劑量和組合的重組質(zhì)粒、載體質(zhì)粒pCAGGS以及生理鹽水。在免疫實驗中,應

4、用了外科手術中浸潤麻醉的方式給雛雞免疫。具體分組為,pCAGGS-F100μg、pCAGGS-F50μg、pCAGGS-HN100μg、pCAGGS-HN50μg、pCAGGS-F50μg+pCAGGS-HN50μg、pCAGGS-F25μg+pCAGGS-HN25μg、pCAGGS和生理鹽水組,其中pCAGGS-F25μg+pCAGGS-HN25μg組免疫方式為胸肌單點(肌肉和皮下混合),一免28天后進行二免,二免后第四周,所有雞都用

5、0.2ml103EID50的NDVF48E9株攻毒。免疫后及攻毒后每周無菌采集血清。結果pCAGGS-F25μg+pCAGGS-HN25μg免疫組的保護率達80%(4/5)。根據(jù)第一次所得數(shù)據(jù),我們對pCAGGS-F25μg+pCAGGS-HN25μg組加大樣本數(shù)目重新作免疫實驗,結果攻毒保護率pCAGGS-F25μg+pCAGGS-HN25μg組達到60%(6/10)。表明我們構建的DNA疫苗能夠誘導雞體產(chǎn)生特異性免疫應答,并對同型N

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