抗體免疫選擇壓作用下新城疫病毒HN基因和F基因的變異.pdf

1、雞新城疫（Newcastle disease，ND）是由一種Ⅰ型副黏病毒一雞新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引發(fā)的一種急性傳染病。未經(jīng)免疫的雞群，傳播性極強(qiáng)，發(fā)病和死亡率都非常高。即使一些已經(jīng)多次免疫的雞群，由NDV引發(fā)的急性和亞急性死亡仍不斷零星發(fā)生，而由新城疫引起的呼吸道感染、亞臨床感染及產(chǎn)蛋下降則更為普遍。七十年來，NDV一直是對(duì)雞群危害最大的疫病。近十年中，國內(nèi)禽病界一直試圖在分子遺傳水平闡明

2、NDV毒株的變異趨勢(shì)，在分子流行病學(xué)上已積累了大量毒株的資料和信息。但是，這些研究對(duì)信息的比較分析的深度還不夠，缺乏對(duì)疫病控制方面最為關(guān)心的抗原性變異的相關(guān)性方面開展深入的研究。迄今為止，對(duì)病毒在免疫選擇壓作用下變異規(guī)律的研究還僅僅是根據(jù)從病禽收集到的病毒流行毒株來進(jìn)行比較研究的，由于這些病毒之間的系譜關(guān)系不清楚，因此很難準(zhǔn)確闡明在免疫選擇壓作用下病毒相關(guān)抗原表位相關(guān)堿基具體變異的規(guī)律。本試驗(yàn)首次嘗試在嚴(yán)格的試驗(yàn)控制條件下顯示抗體這一免

3、疫選擇壓對(duì)NDV變異的影響。
　　 將NDV野毒株TZ060107接種10日齡SPF雞胚后，取尿囊液以0.1％終濃度甲醛滅活，做成油乳劑滅活苗。免疫21日齡SPF雞，2周后，加強(qiáng)免疫，二免后十天采集抗血清。通過這份血清的病毒中和試驗(yàn)，確定不完全抑制病毒復(fù)制的抗體最大濃度為1:50，用1:50作為加入到培養(yǎng)基中的抗體濃度，構(gòu)成抗體免疫選擇壓。為了完成該試驗(yàn)，將已完成HN基因和F基因序列測(cè)定的原代病毒。TZ060107接種雞胚成纖維

4、細(xì)胞（CEF）連續(xù)傳代，分為A組（培養(yǎng)基中含抗NDV的血清）和B組（培養(yǎng)基中無抗體），每組設(shè)3個(gè)獨(dú)立的傳代系列。分別對(duì)第10，20，30，40，50代病毒的HN基因和F基因進(jìn)行擴(kuò)增克隆測(cè)序。并將傳代病毒的HN和F蛋白的氨基酸序列分別與原代病毒進(jìn)行了比較，通過計(jì)算NS與S的比值，以顯示抗體免疫選擇壓對(duì)NDV HN和F基因變異的影響。
　　 序列比較結(jié)果顯示，有抗體A組HN基因發(fā)生突變的位點(diǎn)數(shù)明顯多于無抗體B組，且非同義突變（NS）