基因免疫制備新城疫病毒磷蛋白的單克隆抗體.pdf

1、　　本實(shí)驗(yàn)的目的是制備針對(duì)P蛋白特異的單抗，供研究P基因的結(jié)構(gòu)和功能使用。構(gòu)建了NDVP基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-P；經(jīng)酶切和PCR鑒定，確定P基因是以正確的方向插入pcDNA3.1(-)后，用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染入COS-1細(xì)胞，于轉(zhuǎn)染后72小時(shí)采用間接免疫熒光的方法確定該重組質(zhì)粒在體外真核細(xì)胞中可以表達(dá)目的蛋白；大量提取質(zhì)粒，將其作為DNA免疫的材料，免疫6周齡的BALB/C小鼠，每只小鼠腿部肌肉注射裸質(zhì)粒100μg

2、，隔2周免疫一次，共免疫4次，最后一次加強(qiáng)免疫后7天，取免疫小鼠的脾細(xì)胞和處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合。通過(guò)間接ELISA對(duì)融合的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，將獲得的陽(yáng)性細(xì)胞株用有限稀釋法進(jìn)行多次亞克隆后，獲得一株分泌針對(duì)P蛋白的特異性單抗的細(xì)胞株，命名為2G8，細(xì)胞上清效價(jià)為1：256，腹水效價(jià)為1：2×104，亞類(lèi)鑒定為IgM。用鵝源新城疫病毒ZJ-1株感染雞胚成纖維細(xì)胞做間接免疫熒光試驗(yàn)鑒定2G8的特異性，結(jié)果