新城疫病毒（DNV）HN基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)獲得兩株新城疫病毒(NDV)血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)基因cDNA，然后定向插入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3中，構(gòu)建了含HN基因的重組質(zhì)粒。首先，將NDVLasota株和F48E9株分別接種于9日齡SPF雞胚，于37℃孵化36h，置4℃12h后收獲雞胚尿囊液。根據(jù)GenBank登錄的這兩株病毒的HN基因序列和pcDNA3的多克隆酶切位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物P1：5'-CCCAAGCTTATGGACCGC

2、GCCGTTAGCCAAG-3'，P2：5'-GCTCTAGACTAGCCAGACCTGGCTTCTC-3'和P3：5'-CGGGATCCATGGACCGTGTAGTTAGCC-3'，P4：5'-CCGCTCGAGTTAAATCCCATCATCCTTGAG-3'。通過(guò)RT-PCR從接種病毒的雞胚尿囊液中分別獲得含兩株NDVHN基因cDNA。瓊脂糖電泳結(jié)果顯示，其大小均約為1700bp，與GenBank登錄的大小一致。其次，將HN基因cD

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