表達(dá)新城疫病毒F、HN基因和傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組禽痘病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究.pdf

1、新城疫、傳染性喉氣管炎和雞痘均是雞的主要呼吸道疾病，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的損失。盡管傳統(tǒng)方法制備的疫苗在疾病的控制上曾經(jīng)發(fā)揮重要的作用，但隨著動(dòng)物疾病清除計(jì)劃的進(jìn)行，需要用更加安全的、能夠區(qū)分野毒感染的新型疫苗來(lái)替代常規(guī)疫苗。 禽痘病毒載體疫苗以其特有的優(yōu)勢(shì)在疾病的控制中起到了重要的作用，以禽痘病毒為載體已經(jīng)研制出許多種重組病毒疫苗，其中有的已紀(jì)商業(yè)化。構(gòu)建表達(dá)多個(gè)病原體基因的重組禽痘載體疫苗對(duì)于面臨多種疾病威脅的養(yǎng)禽業(yè)來(lái)說(shuō)尤其具

2、有重要的意義。 本實(shí)驗(yàn)利用同源重組將新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)的gB基因以及報(bào)告基因LacZ插入雞痘病毒(FPV)的017株的復(fù)制非必需區(qū)，其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及報(bào)告基因LacZ是在早晚期啟動(dòng)子LP2EP2的控制下，大腸桿菌報(bào)告基因LacZ在晚期啟動(dòng)子P11的控制下。經(jīng)過(guò)10輪藍(lán)斑純化獲得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及報(bào)告基因LacZ的重組雞

3、痘病毒，稱為rFPV-F/HN/gB。經(jīng)PCR方法證明rFPV-F/HN/gB基因組中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因；間接免疫熒光試驗(yàn)和Western-blot試驗(yàn)表明NDV的F、HN蛋白和ILTVgB蛋白在rFPV-F/HN/gB感染的CEF細(xì)胞中獲得表達(dá)。與親本毒相比，重組病毒在病毒的復(fù)制和致雞胚成纖維細(xì)胞的病變方面無(wú)顯著不同。 為了檢測(cè)重組病毒對(duì)SPF雞的保護(hù)效果，將60只四周齡的SPF雞分為四組，第一組翅

4、下刺種1000PFUrFPV-F/HN/gB(20只)、第二組免疫ND弱毒疫苗(LaSota，10只，0.125ml/只)、第二組免疫ILT弱毒疫苗(10只，0.1ml/只)，第四組為非免疫對(duì)照雞(20只)。免疫后4周將重組病毒組和非免疫組隨機(jī)分為兩組，分別為1、5組和4、6組。其中1、2、4組共30只雞用致死劑量(103EID50)的NDVF48E9株進(jìn)行肌肉注射，另外的3、5、6組共30只雞用ILTV王崗強(qiáng)毒(500EID50)經(jīng)喉

5、內(nèi)接種。免疫和攻毒后每周采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。并于攻毒后檢測(cè)排毒、統(tǒng)計(jì)發(fā)病和死亡率。結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，免疫后3周rFPV-F/HN/gB免疫組能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗新城疫病毒的ELISA抗體，但抗體水平明顯低于LaSota免疫組，NDV攻毒前沒(méi)有檢測(cè)到ND的HI抗體，而LaSota免疫組在免疫后2周就顯示有HI抗體；同時(shí)重組病毒誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗ILTV的ELISA抗體，抗體水平也低于ILT弱毒疫苗免疫組。而非免疫組在攻毒前檢測(cè)不到任何抗體

6、。LaSota免疫雞獲得完全保護(hù)，rFPV-F/HN/gB免疫組的部分雞(7/10)抵抗ND強(qiáng)毒的攻擊，免于死亡，而且死亡雞發(fā)病和死亡時(shí)間明顯滯后于對(duì)照組。NDV的分離檢測(cè)結(jié)果表明：rFPV-F/HN/gB可以有效的控制排毒，但是與LaSota弱毒免疫組相比，不能完全控制病毒的繁殖。ILTV攻擊后，rFPV-F/HN/gB和ILT弱毒疫苗免疫雞對(duì)死亡的保護(hù)均為10/10，對(duì)發(fā)病的保護(hù)為7/10，非免疫對(duì)照組有1/10的死亡率和10/10