發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的山定子轉(zhuǎn)化及植株再生體系的建立.pdf

1、為了提高山定子(Malus baccata(L．)Borkh)的生根能力，用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化山定子，誘導(dǎo)產(chǎn)生發(fā)根，并由發(fā)根再生植株。通過對不同發(fā)根農(nóng)桿菌株系、培養(yǎng)基、共培養(yǎng)時間以及添加乙酰丁香酮(AS)的研究，優(yōu)化了發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系。當(dāng)用添加AS(100μmol/L)的菌液侵染植株切段30分鐘，共培養(yǎng)3d，在無激素的固體1/4MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)發(fā)根時，發(fā)根誘導(dǎo)率最高，達(dá)到88.89％。 發(fā)根再生通過兩個途徑進(jìn)行：1．誘導(dǎo)愈傷組織獲

2、得再生植株；2．發(fā)根通過器官發(fā)生途徑直接再生植株。途經(jīng)l篩選了三種不同激素組合的培養(yǎng)基，結(jié)果表明將發(fā)根愈傷組織在MS+BA2.0 mg·L<'-1>+HBA0.1 mg·L<'-1>+GA<,3>0.1 mg·L<'-1>的再生培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再生率最高，達(dá)到3％。途經(jīng)2利用L3<'4>正交設(shè)計對影響發(fā)根再生的6-BA、IBA、GA<,3>、TDZ四種激素進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明將發(fā)根在MS+6-BA2.0 mg·L<'-1>+IBA0.5

3、mg·L<'-1>+GA<,3>0.3 mg·L<'-1>+TDZ0.5 mg·L<'-1>。 (瓊脂0.7％，蔗糖3％，pH5.8)的再生培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以不沒入培養(yǎng)基表面為宜，再生率最高，達(dá)到73.3％o再生植株P(guān)CR檢測得到6株陽性轉(zhuǎn)基因植株，轉(zhuǎn)化效率為10％。為今后利用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化外源基因奠定基礎(chǔ)。 再生植株在MS+6-BA0.2 mg·L<'-1>+IBA0.5 mg·L<'-1>(瓊脂0.7％，蔗糖3％，pH5.8)