農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)非組織培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化及Bar基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、大豆[Glycinemax(L.)Merrill]作為重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物,是食用油和蛋白的主要作物來(lái)源,在食品工業(yè)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占重要地位。隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育大豆新品種、新種質(zhì)得到了廣泛應(yīng)用。目前,在大豆的遺傳轉(zhuǎn)化中農(nóng)桿菌介導(dǎo)的子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系存在著組織培養(yǎng)過(guò)程中莖伸長(zhǎng)和生根難的問(wèn)題,因此嘗試建立非組織培養(yǎng)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系是解決上述問(wèn)題的有效途徑。本研究以河北省推廣的優(yōu)良大豆品種為材料,以GUS基因在子葉

2、節(jié)區(qū)的瞬時(shí)表達(dá)為依據(jù),通過(guò)探討影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的多種因素,優(yōu)化了大豆子葉節(jié)非組織培養(yǎng)遺傳轉(zhuǎn)化體系,并利用該體系對(duì)冀豆16號(hào)進(jìn)行了Bar基因的遺傳轉(zhuǎn)化。通過(guò)比較葉片針刺法和涂抹法兩種篩選方法的篩選效率,確立了大豆子葉節(jié)非組織培養(yǎng)遺傳轉(zhuǎn)化體系的有效篩選方法,并且通過(guò)針刺法摸索了8個(gè)河北省優(yōu)良大豆品種的草銨膦篩選濃度。主要結(jié)果如下:
　　 1、通過(guò)對(duì)蔗糖濃度、表面活性劑、侵染方式、侵染次數(shù)、侵染液濃度及大豆基因型的摸索,發(fā)現(xiàn)侵染液中

3、附加3％蔗糖、OD600=0.6、以脫脂棉作為菌液附著介質(zhì)同時(shí)不添加表面活性劑SilwetL-77、侵染1次的GUS陽(yáng)性率最高達(dá)到62.13%,冀豆16號(hào)為易感大豆基因型。
　　 2、針刺法的篩選效率為27.2%,而涂抹法的篩選效率僅為9.1%,從而確定針刺法是適合該轉(zhuǎn)化體系的有效篩選方法。通過(guò)針刺法摸索了8個(gè)河北省優(yōu)良大豆品種的草銨膦篩選濃度,根據(jù)葉片及植株莖尖枯焦死亡情況初步確定其草銨膦篩選濃度分別為:冀豆15號(hào)、五星2號(hào)為