農(nóng)桿菌介導大豆轉(zhuǎn)化體系的建立及植酸酶基因的導入.pdf

1、大豆是我國重要的油料作物和糧飼兼用作物，是植物蛋白的重要來源。近年來，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，許多學者通過基因工程的手段來改良大豆品質(zhì)、提高大豆產(chǎn)量。本研究以大豆的子葉節(jié)為外植體，探討了影響大豆再生效率的主要因素，建立了子葉節(jié)的再生體系;通過農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化方法將植酸酶（Phy）基因?qū)胄×６怪校芯坑绊懫滢D(zhuǎn)化的主要因素，初步建立大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，并獲得了經(jīng)PCR檢測為陽性的轉(zhuǎn)基因植株。主要工作和結(jié)果如下:
　　1、大豆子葉節(jié)再生體系

2、的建立
　　(1)種子消毒方法的確定:比較了3種不同種子消毒方法，氯氣消毒法對種子的傷害比較小，污染率低，適合大豆種子的消毒。
　　(2)最適苗齡的篩選:不同苗齡的大豆子葉節(jié)誘導叢生芽能力存在顯著差異，無菌苗萌發(fā)4d時，叢生芽誘導率最高，為88.9％，因此子葉節(jié)轉(zhuǎn)化的最適苗齡為4d。
　　(3)大豆基因型的篩選:不同基因型的大豆再生能力差異較大，供試的5個不同基因型大豆，芽誘導率在24％-84％之間，其中小粒豆芽誘導率

3、最高，因此將小粒豆作為進一步轉(zhuǎn)化的實驗材料。
　　(4)6-BA濃度的確定:6-BA濃度直接影響無菌苗的萌發(fā)及叢生芽的誘導，萌發(fā)培養(yǎng)基中添加1 mg/L6-BA時無菌苗長勢最佳，芽誘導階段最適6-BA誘導叢生芽濃度為1.67 mg/L。
　　(5)生根階段IBA或NAA濃度的確定:生根階段添加IBA、NAA均可以顯著提高生根率，添加1 mg/L的IBA最適合小粒豆不定芽的生根。
　　2、Phy基因轉(zhuǎn)化大豆
　　(