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1、本試驗以葉片為外植體研究了2個苜蓿品種(新牧1號雜花苜蓿、新疆大葉紫花苜蓿)的組織培養(yǎng)程序,建立了完善的苜蓿葉片組培再生體系。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將耐鹽基因AtNHX1轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中,初步形成了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的優(yōu)化方法。研究結(jié)果如下: (1)葉盤法誘導(dǎo)苜蓿高效再生體系的建立①誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+2,4-D2mg/L+NAA1mg/L+KT1mg/L,新牧1號在此培養(yǎng)基上的出愈率為100%,新疆大葉苜蓿在此培養(yǎng)基上的出愈率為95.5%;②
2、增殖培養(yǎng)基:MS+2,4-D2mg/L+NAA1mg/L+KT1mg/L+CH0mg/L;③分化培養(yǎng)基:MS+KT4mg/L;④生根培養(yǎng)基:1/2MS,其中所用培養(yǎng)基蔗糖3%,瓊脂0.7%。由此形成了完整的再生植株,建立了適合于遺傳轉(zhuǎn)化操作的苜蓿再生系統(tǒng)。 (2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立經(jīng)GUS組織化學(xué)染色、抗性愈傷組織分析其優(yōu)化轉(zhuǎn)化條件為:葉片預(yù)培養(yǎng)4d,用農(nóng)桿菌菌液(OD600=0.5)侵染20min,然后在培養(yǎng)基
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