通過鋅指核酸酶和體細胞核移植技術產生Myostatin和GGTA1基因敲除的轉基因克隆豬.pdf

1、轉基因修飾豬可以用于改良物種，促進畜牧業(yè)發(fā)展，也可以作為器官移植中的低免疫原性供體，因此在醫(yī)藥學及畜牧業(yè)等領域擁有巨大的應用潛力。傳統(tǒng)的基因打靶效率非常低。新興技術鋅指核酸酶(Zinc-finger nuclease，ZFN)能夠有效的介導基因的定點修飾，效率高達1％，這有望從根本上解決體細胞基因組定點修飾效率低的問題。
　　本研究主要是通過鋅指核酸酶技術高效建立了肌肉抑制素基因（Myostatin）和α-1，3-半乳糖苷轉移酶(

2、α-1，3-galactosyl-transferase，GGTA1)基因雙等位基因敲除細胞系，比傳統(tǒng)的基因打靶效率提高了10000倍。同時，結合體細胞核移植技術產生了Myostatin和GGTA1雙等位基因敲除的轉基因克隆豬，為建立瘦肉型豬的新品系，以及為豬-人的異種器官移植打下理論基礎。實驗結果如下:
　　1.產生Myostatin基因敲除的克隆豬。將特異性識別Myostatin的鋅指核酸酶轉入大白豬的成纖維細胞LW5中，藥殺

3、篩選后，得到10個單敲細胞系，2個雙敲細胞系，在細胞水平的打靶效率分別為11.6％，2.3％.以兩個雙等位基因敲除的細胞系M11，M100為核供體進行核移植，產生8頭轉基因克隆豬。
　　2.產生GGTA1基因敲除的克隆豬。將特異性識別GGTA1的鋅指核酸酶轉入大白豬的成纖維細胞系LW5中，加藥篩選后，產生了18個單敲細胞系，4個雙敲的細胞系，細胞水平的打靶效率分別為23.4％，5.2％.以雙等位基因敲除的細胞系G3，G56，G65